单纯疱疹病毒进入介体的配体和使用方法技术

提供一种疱疹病毒进入介体ＨＶＥＭ的新配体（ｐ３０）。ｐ３０可用于调节免疫应答并可用于抑制疱疹病毒感染。也提供应用本发明专利技术ｐ３０治疗淋巴细胞疾病患者或患有或怀疑患有疱疹病毒感染的患者的方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一般涉及用于调节免疫应答和病毒感染的化合物和方法，更准确地说本专利技术涉及一种可用于抑制单纯疱疹病毒感染的多肽。
技术介绍
1型和2型单纯疱疹病毒(HSV)引起反复发生从良性到严重的各种程度的感染。在存在有活性的细胞免疫系统的情况下，HSV表现为从潜伏于神经元到感染皮肤和其它组织。HSV的D糖蛋白(gD)是一种位于病毒体包膜中的跨膜蛋白，它通过结合于细胞受体启动感染。最近，鉴定了一种HSV用于感染的细胞蛋白并命名为HSV进入介体(HVEM)。HVEM是具有富含半胱氨酸细胞外域的1型跨膜蛋白，它显示与肿瘤坏死因子(TNF)相关细胞因子受体具有显著同源性。多数TNF超家族成员启动各种细胞反应，所述细胞反应是发动有效炎症和免疫应答所必需的。TNF是2型跨膜蛋白，它被蛋白酶解形成分泌型蛋白，而LTα缺乏跨膜域并只限以同三聚体(该形式LTα也称为TNFβ)分泌。当以表面蛋白表达时，LTα与称为LTβ的33kDa蛋白结合，LTβ也是α1β2和α2β1按一定亚基比例组成的异三聚体形式的2型跨膜糖蛋白。LTα和TNF均与两个受体结合并通过这两个受体发送信号，所述受体是55-60kDa TNF受体(TNFR60；CD120a或1型)和75-80kDa TNFR(TNFR80；2型或CD120b)。相反，表面LTα1β2复合物特异性地被LTβ受体(LTβR)识别，所述受体既不结合LTα也不结合TNF，而两种TNFR均结合LTα2β1异三聚体。小鼠LTα和LTβ基因遗传缺失已经显示，这两种基因在淋巴结和淋巴集结发育中有作用，并且与TNF和TNFR60一起，也是控制生发中心形成和在成年小鼠免疫应答期间控制免疫球蛋白同种型转换(例如IgA产生)的重要细胞因子。大多数研究已经指出，LTα1β2/LTβR是控制这些功能的重要细胞因子-受体系统。专利技术概述本专利技术基于一种作为HVEM配体起作用的内源多肽的鉴定，先前已知所述内源性多肽只结合HSV gD。提供称为p30的所述配体以及编码p30的核酸序列和结合p30的抗体。本专利技术也包括用于鉴定调节HSV感染的化合物的方法，以及用于调节淋巴细胞反应的方法。本专利技术方法可用于治疗例如患有自身免疫性疾病、淋巴系统恶性肿瘤和HSV感染的患者。在一个实施方案中，本专利技术特征性描述了鉴定影响HVEM结合剂介导的细胞反应的化合物的方法。本专利技术还包括鉴定影响LTbR-p30介导的细胞反应的化合物的方法。除非另有规定，否则本文所用的所有技术和科学术语与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的含义相同。尽管与本文所述方法类似或相同的方法和材料可用于实施或测试本专利技术，但是仍然描述合适的方法和材料如下。本文所述所有出版物、专利申请、专利以及其它文献均通过引用结合到本文中。在存在矛盾的情况下，本申请包括定义在内，将予以限定。另外，本文所述材料、方法和实施例仅仅是说明性的而不是限定性的。从以下详细说明、附图以及权利要求书可以显而易见地看到本专利技术其它特征和优点，例如治疗各种人类疾病。 附图说明图1A是一对流式细胞仪频率曲线图，图示HVEMFc融合蛋白结合到用PMA(上部曲线)或PMA和离子霉素(下部曲线)活化后的II-23.D7细胞。图1B是一对流式细胞仪频率曲线图，图示HVEMFc融合蛋白结合到正常人CD4+(上部曲线)T细胞和CD8+(下部曲线)T细胞。图1C是一个线性图，图示HVEMFc融合蛋白与活化II-23.D7细胞的饱和结合。图2A是一对图。上图是一个流式仪细胞频率曲线图，图示LTβRFc融合蛋白竟争HVEMFc融合蛋白与活化II-23.D7细胞的结合。下图是一个线性图，图示HVEMFc融合蛋白的结合被LTβRFc融合蛋白剂量依赖性抑制。图2B是一对图。上图是一个流式细胞仪频率曲线图，图示LTα同三聚体竟争HVEMFc融合蛋白的结合。下图是一个线性图，图示HVEMFc融合蛋白的结合被LTα同三聚体剂量依赖性抑制。图3是一对图。上图是一个流式细胞仪频率曲线图，图示天然存在的LTα的Tyr108Phe变异体不能竟争HVEMFc与II-23.D7细胞的结合，而下图是图示LTα和LTα(Tyr108Phe)竟争性结合分析的线性图。图4A是一个放射自显影图，得自沉淀物的双向等电聚焦/SDS-PAGE凝胶，所述沉淀物通过用mLTβRFc融合蛋白处理活化II-23.D7细胞提取物而获得。图4B是从一种沉淀物的双向等电聚焦/SDS-PAGE凝胶获得的放射自显影图，所述沉淀物通过用TNFR60Fc融合蛋白处理活化II-23.D7细胞提取物而获得。图4C是从一种沉淀物的双向等电聚焦/SDS-PAGE凝胶获得的放射自显影图，所述沉淀物通过用HVEMFc融合蛋白处理活化II-23.D7细胞提取物而获得。图5是一对图。上图是一个流式细胞仪频率曲线，图示HVEMFc融合蛋白的结合被HSV gD-1糖蛋白竟争。下图是一个线性图，图示HVEMFc融合蛋白的结合被HSV gD-1糖蛋白剂量依赖性抑制。图6是一对线性图，图示抗-HVEM抗体刺激新鲜分离的外周血T细胞(上部线性图)和记忆T细胞(下部线性图)的剂量依赖性增殖。图7是一对图。上图是一个流式细胞仪频率曲线图，图示HVEM在RAJI类淋巴母细胞上的表达。下图是一个线性图，图示RAJI细胞在应答抗-HVEM抗体中的剂量依赖性增殖。详细说明涉及抑制含有TNF受体(TNFR)相关多肽HVEM的细胞外域的融合蛋白结合的实验表明，恶性和正常人T-细胞均表达HVEM的细胞表面配体。竟争性抑制实验表明，所述HVEM配体与LTαβ异三聚体以及LTα具有相同的特征，但是它也具有区别于LTα1β2和TNF的特征。因此，LTα2β1可能是一种被HVEM识别的推定表面配体，需要说明的是LTα2β1上的HVEM结合位点与TNFR60不同。另一方面，HVEM可能识别一种新的配体。应用生化方法辨别这些可能性。免疫沉淀和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)研究证实，在T细胞表面存在HVEM的一种新的30kDa多肽配体(p30)，所述多肽配体在抗原性上与LTβ和LTα均不同。亲和层析纯化和双向电泳表明，p30物理性质也不同于LTα和LTβ，其分子量为30kDa而pI约7-8.5(图4C)。此外，这些研究表明p30也被LTβR识别而不被TNFR识别。结合抑制实验证实，可溶性gD-1(得自HSV-1的gD)和gD-1突变体gD-1(Δ290-299t)结合到HVEM，但是不能结合到LTβR或TNFR60。该结果提示，即使HVEM与为TNFR60和LTβR所识别的配体结合，但gD-1已经协同进化为特异性结合HVEM。此外，所述发现表明，gD-1是所述淋巴毒素的一种膜锚着病毒因子，并可以在进入或由感染细胞释放HSV时调节HVEM发送信号的活性。体外细胞培养研究表明，抗-HVEM抗体增强处女型T细胞和记忆T细胞的增殖。类似的实验表明，通过HVEM发送信号为B细胞提供活化刺激，而没有通过TNFR的均衡负向刺激的正向刺激可能是所述p30 HVEM配体的独特性质。这些结果表明，所述HVEM配体的生理功能可能不同于TNF和LTα1β2。一种HVEM的新的30kDa配体的鉴定增加了该配体可能引起先前归因于LTα或L本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于调节ＨＶＥＭ介导的细胞反应的体外方法，该方法包括将表达ＨＶＥＭ的细胞与包含可调节ＨＶＥＭ介导细胞反应的有效量的ｐ３０结合剂的药用组合物接触；其中ｐ３０结合剂是可溶性ＨＶＥＭ、可溶性ＬＴβＲ或特异性结合ｐ３０的抗体。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：CF瓦雷，
申请(专利权)人：拉霍拉敏感及免疫学研究所，
类型：发明
国别省市：US[美国]