紫杉醇免疫测定法制造技术

紫杉醇的新的缀合物和衍生自紫杉醇的９和７位的新的免疫原和通过这些连接紫杉醇的免疫原产生的单克隆抗体可用于免疫测定法，以对生物流体中的紫杉醇进行定量和监测。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及免疫测定法领域，该测定法用于确定人类生物流体中紫杉醇的存在和/或对人类生物流体中的紫杉醇进行定量，以快速确定化学疗法期间最佳的药物浓度。
技术介绍
癌症是用于描述一组恶性肿瘤的术语，所述恶性肿瘤都具有共同的发展性状，此时身体的部分中的细胞开始失去控制地生长。多数癌症形成肿瘤，但是还可以在血液中呈现和循环穿过它们生长处的其它组织。最通常用手术、化学疗法和/或放射疗法组合治疗癌症恶性肿瘤。用于治疗特定癌症的治疗的类型取决于几种因素，包括癌症恶性肿瘤的类型和它们被诊断时所处的阶段。紫杉醇(taxol)也称作紫杉醇(paclitaxel)，是用于治疗乳腺癌(Holmes等人Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.，10，60，1991)、卵巢癌(Einzig等人Proc.Am.Assoc.Cancer Res.，31，1114，1990)和非小细胞肺癌的最常用的细胞毒性剂之一。紫杉醇具有下面的结构式 该化合物已与使人虚弱的副作用关联起来，所述副作用例如骨髓密度减小、过敏反应、嗜中性粒细胞减少、低血压、心动过缓(bardycardia)、恶心和呕吐。通过监视身体中紫杉醇水平和调节剂量，可以更好地控制和限制患者中的这些副作用。同时，在紫杉醇剂量和所产生的影响治疗效果的血清药物浓度之间通常存在高度可变的关系。紫杉醇的个体内和个体间药物代谢动力学可变性程度可以高达5倍(Gurney等人，J.Clin.Oncol.14，pp 2590-2611，1996)并且受到许多因素的影响，这些因素包括○器官功能○遗传调节○疾病状态○年龄○药物-药物相互作用○药物摄入时间○药物施用方式，和○与技术相关的施用。作为该可变性的结果，不同个体中相等剂量的同一药物可以导致显著不同的临床结果(Hon等人Clinical Chemistry 44，pp 388-400，1998)。相同紫杉醇剂量的有效性基于患者中的最终血清药物浓度和个体药物清除率而显著不同。治疗性药物处理将为临床医生提供在口服和静脉内药物施用中对患者差异的了解。使用治疗性药物管理，药物剂量可以为患者个体化，并且有效治疗癌症而没有不想要的副作用的机会将高得多。此外，紫杉醇的治疗性药物管理将作为极好的工具来确保用实际处方剂量施用化学治疗中的依从性(compliance)和获得有效的血清浓度水平。已经发现血清浓度的可变性不仅是由于生理因素，而且还可以由施用技术的变化导致。紫杉醇的常规治疗性药物管理将需要能获得可改造为适于一般实验室设备的简单自动化测试。最好地满足这些标准的测试是免疫测定法。已经报道了针对紫杉醇的免疫测定法和酶联免疫吸附测定(ELISA)测定法(Erlanger等人，美国专利5,756,301，1998年5月26日)。然而，用于该测定法的衍生物和免疫原会赋予相应抗体与紫杉醇和紫杉醇代谢物(特别是6-α-羟基紫杉醇)的宽范围的交叉反应活性。为了最有效于检测药物水平，抗体应该对活性化合物最特异并且对非活性代谢物显示出极低的交叉反应活性或者不显示交叉反应活性。专利技术概述根据本专利技术，已经产生了一类新的抗体，它们与紫杉醇高度选择性地反应，从而结合紫杉醇，而与紫杉醇代谢物，尤其是6-α-羟基紫杉醇和3’-对-羟基紫杉醇没有实质的交叉反应活性。选择性地反应是指该抗体仅与紫杉醇分子反应并且不与其它化合物实质性反应，所述其它化合物为诸如紫杉醇代谢物，最重要的阻断代谢物是6-α-羟基紫杉醇和3’-对-羟基紫杉醇。已经发现通过使用下述免疫原，产生对紫杉醇特异并且不与其它化合物如紫杉醇的代谢物或者相关化合物(如浆果赤霉素III、3’-对-羟基紫杉醇和6-α-羟基紫杉醇)实质性反应或者结合的抗体，所述免疫原是免疫原性多胺聚合物与下式化合物 其中A是 或＝N-O-；Y是有机间隔基团；X是能够与多胺聚合物结合的末端官能团；p是从0到1的整数；Ph是苯基；或者下式化合物 其中Ph、p、Y和X如上并且B是-CH2-或者 或者它们的混合物的缀合物(conjugate)。这些与紫杉醇高度选择性反应并且不与6-α-羟基紫杉醇和3’-对-羟基紫杉醇交叉反应的抗体的提供，使得可以产生下述免疫测定法，该测定法能特异性检测和监测用紫杉醇治疗的患者的流体样品中的紫杉醇。本专利技术还包括用于所述免疫测定法的试剂和试剂盒。作为紫杉醇代谢物的6-α-羟基紫杉醇和3’-对-羟基紫杉醇的存在是过去紫杉醇免疫测定法中假阳性读数的主要原因。专利技术详述根据本专利技术，提供了一类新的抗体，其与紫杉醇高度选择性反应并且不与上面提到的紫杉醇代谢物实质性反应或者交叉反应。已经发现通过使用式II-A的9-羰基紫杉醇和式II-B的7-羟基紫杉醇的这些衍生物或者它们的混合物作为免疫原，提供了本专利技术的这类新的抗体。通过使用这些抗体，已经开发了一种免疫测定法，包括用于该免疫测定法的试剂和试剂盒，所述免疫测定法用于检测和/或定量血液、血浆或者其它体液样品中的紫杉醇。通过使用该免疫测定法，可以检测和/或定量体液样品(优选血样或者血浆样品)中紫杉醇的存在和量。以这种方式，可以在治疗期间监测用紫杉醇治疗的患者并且根据所述监测调节对他的治疗。通过本专利技术，在用紫杉醇作为化学治疗剂治疗的癌症患者中获得了对紫杉醇的治疗性药物管理。用于本专利技术的该测定法中的试剂是式II-A和II-B的化合物或者其混合物与聚合物载体的缀合物。这些缀合物是样品中存在的紫杉醇与本专利技术抗体结合的竞争性结合配偶体。因此，与抗体结合的缀合物试剂的量将与样品中紫杉醇的量成反比。根据本专利技术，该测定法利用任何传统测量手段检测和测量结合或未结合所述抗体的所述缀合物的量。通过使用所述手段，可以测定结合或未结合的缀合物的量。一般而言，通过将样品中紫杉醇产生的结合的或未结合的缀合物的量的测量值与从含有已知量的紫杉醇的样品得到的标准或者校准曲线确定的结合或未结合的缀合物的值相关联，来测定样品中紫杉醇的量，所述已知量在待测试的样品的预期范围内。使用与用于样品相同的免疫测定步骤确定用于产生校准曲线的这些研究。从是II-A或者II-B的化合物或者其混合物制备缀合物以及免疫原。载体的缀合物或者免疫原连接到多胺聚合物配体部分，其具有下式 其中Y、A和p如上所述；以及x’是-CH2-或者官能连接基团； 其中x’、A、B和p如上所述。这些配体部分可以连接免疫原的载体或者多胺聚合物上的一个或多个活性位点。定义在该说明书全文中，下述定义将被这样理解本申请全文所用的术语“Ph”表示苯基。术语“亚烷基”表示含有1到10个碳原子的二价饱和的直链或者支链烃取代基。术语“免疫原”和“免疫原性”指能够在生物中引起、产生和生成免疫应答的物质。术语“缀合物”指从两个部分连接在一起形成的任何物质。根据本专利技术的代表性缀合物包括通过量小分子(如式II-A和II-B的化合物)与大分子(如载体或者多胺聚合物，尤其蛋白质)连接在一起形成的缀合物。在缀合物中，小分子可以结合在大分子的一个或多个活性位点。术语缀合物包括术语免疫原。“半抗原(hapten)”是部分或者不完全的抗原。它们是无蛋白质的物质，多数是低分子量物质，它们不能刺激抗体形成，但是与抗体反应。通过将半抗原偶联到高分子量免疫原载体上然后向人或者动物受试者注射该偶联的产物，即本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测样品中紫杉醇的免疫测定法，所述测定法包括：提供样品的混合物，含有与紫杉醇选择性反应并且不与６－α－羟基紫杉醇和３’－对－羟基紫杉醇实质性交叉反应的抗体以及载体与下式化合物：　　　　＊＊＊　　Ⅱ－Ａ　　　　其中Ａ是－ＮＨ－＊－或＝Ｎ－Ｏ－；　　　　Ｙ是有机间隔基团；　　　　Ｘ是能够与多胺聚合物结合的末端官能团；　　　　ｐ是从０到１的整数；　　　　Ｐｈ是苯基；　　　　或者下式化合物：　　　　＊＊＊　　Ⅱ－Ｂ　　　　其中Ｘ、Ｙ和ｐ如上所述并且Ｂ是－ＣＨ↓［２］－或者－＊－ＮＨ－ＣＨ↓［２］－　　　　或者它们的混合物的缀合物，　　　　导致样品中的紫杉醇和所述缀合物与所述抗体结合，之后测量所述混合物中结合或未结合所述抗体的所述缀合物的量，从而可以确定样品中紫杉醇的存在。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：S萨拉蒙，JB库尔特尼，D斯托克，
申请(专利权)人：萨拉达克斯生物医疗公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]