测定通过抑制整联蛋白表达所介导的血管生成抑制剂的作用的方法技术

测试药物对整联蛋白表达的影响的方法，包括如下步骤：测定施用药物的患者血小板中整联蛋白表达量的步骤，和根据所测定的表达量确定药物对除血小板以外的细胞中整联蛋白表达的影响的步骤。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及测定影响整联蛋白表达的药物，优选血管生成抑制剂的作用的方法。
技术介绍
癌症是表现出高死亡率的疾病，用抗癌剂进行治疗的目的一般是改善患者的QOL和延长生存时间。然而，难以在短时间内确定药物延长生命的效果，因此使用肿瘤减小速度和血液肿瘤抗原水平作为替代标志物以用作疗效指标。此外，因为在抗癌剂的临床研究中使用确定药拘作用的生命延长时期也需要长期研究，可在较短时间内评价的肿瘤减小速度已用作替代标志物。然而，已有人指出，肿瘤减小速度不是必然起着生命延长指标的作用。因此，除了肿瘤减小速度以外，人们已尝试着使用疾病进展的时间、患病的存活时间、生物标志物等来作为替代标志拘。然而，这些方法仍然没有建立起来。人们认为，如果表明通过施用药物引起的并且与存活时间延长密切相关的变化的生物标志物可用作替代标志物，则就易于在临床研究中确定出适当的治疗方法，并且标志拘可在治疗期间用作药物疗效的指标。下面是已经报道过的替代标志物。Panorex是涉及糖蛋白EpCAM的抗体，其首先是作为结肠癌细胞的肿瘤标志物被发现的，之后经鉴定是粘着分子。其与存活率的关系是作为保留在骨链中的微癌细胞消除的替代标志物测定的(Stephan B.等人，Cllnical Cancer Research，1999，5，3999-4004)，并且平行进行了大规模的III期临床试验。前列腺特异性抗原已经在前列腺癌的激素治疗中用作替代标志物以确定最佳剂量(Denis L.，&Mahler C.Urology，1996，47(1ASuppl.)，26-32)。至于血管生成抑制剂作为替代标志物的应用，已经在BMS275291(一种基质金属蛋白酶抑制剂)的I期临床试验中测定了在伤口愈合中(在皮肤上切一个口之后)使用血管生成作为指标的方法。此外，对于另一种基质金属蛋白酶抑制剂，已经报道了在肿瘤位点使用酶活性作为标志物的方法(Clin。Cancer Res.，2000，6(8)，3290-6)。另外，预计血管生成抑制剂是除癌症之外的疾病的有效治疗剂，这些疾病例如动脉硬化、糖尿病性视网膜病、视网膜静脉闭塞、早熟性视网膜病、老年黄斑变性、新血管形成性青光眼、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、牛皮癣、血管瘤、血管纤维瘤等。如果发现了血管生成的替代标志物，就能够通过使用其作为这些疾病中的指标来确定适当的药物剂量、药物效果和给药时间。整联蛋白是在细胞表面上表达的细胞粘着分子，并且由α-链和β-链构成。整联蛋白参与细胞外基质膜蛋白与细胞之间的粘着以及细胞之间的粘着。当细胞粘着分子与整联蛋白结合时，细胞中的信号系统就开始运转。结果不仅发生了细胞粘着，还发生了细胞延伸、细胞生长、细胞程序死亡、分化、细胞支架定向、细胞迁移、组织形成、癌侵袭和转移、伤口愈合、血液凝集等。在这些整联蛋白当中，已知整联蛋白α2β1作用于胶原、层粘连蛋白等粘着分于，并在血管生成期间参与血管内皮细胞的管形成(George E等人，Exp.Cell.Res.，1996，224，39-51)。此外，据报道，涉及整联蛋白α1和整联蛋白α2的抗体在体内抑制VEGF引起的血管生成(Donald R.S.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，1997，94，13612-13617)。整联蛋白αvβ3特异性地存在于处于血管生成状态下的内皮细胞中，并且据报道，在使用小鸡胚胎绒毛尿囊的血管生成模型中，整联蛋白αvβ3中和抗体(LM609)抑制由成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)引起的血管生成(Brook，P.C.等人，Science，1994，264，569-571)。此外，据报道，整联蛋白αvβ3参与由FGF-2和肿瘤坏死因子-α引起的血管生成，整联蛋白αvβ5参与由血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子-α引起的血管生成(Friedlander，M.等人，Science，1995，270，1500-1502)。抗整联蛋白αvβ3抗体和整联蛋白αvβ3抑制剂目前正处于临床试验阶段。专利技术公开本专利技术的目的是提供用于影响整联蛋白，优选整联蛋白α2的表达，并抑制血管生成的药物的替代标志物。本专利技术人发现，对于通过抑制整联蛋白α2表达来抑制血管生成的通式(II)化合物(在下文中称为“化合物A”)所代表的药物，在其降低整联蛋白α2表达、减弱血管生成以及由此抑制癌细胞生长的状态下，周围血液中血小板表面上的整联蛋白α2表达也被降低了。 他们还发现，位于周围血液中的血小板表面上的整联蛋白α2可用作血管生成抑制的替代标志物，并由此完成了本专利技术。也就是说，本专利技术提供下列内容。1.测试药物对整联蛋白表达的影响的方法，包括如下步骤测定施用药物的患者血小板中整联蛋白表达量的步骤，和根据所测定的表达量确定药物对除血小板以外的细胞中整联蛋白表达的影响的步骤。2.依据1的方法，其中所述整联蛋白是整联蛋白α2。3.依据1的方法，其中所述整联蛋白表达量是通过免疫化学方法测定的。4.依据3的方法，其中所述免疫化学方法是FACS法。5.用于定量测定整联蛋白的在如3所定义的方法中使用的试剂。6.依据1的方法，其中所述整联蛋白表达量是通过测定编码整联蛋白的mRNA的量来测定的。7.依据6的方法，其中mRNA的量是通过定量PCR测定的。8.用于定量测定编码整联蛋白的mRNA的在如6所定义的方法中使用的试剂。9.依据2的方法，其中所述药物是通式(I)所代表的磺酰胺化合拘或其可药用盐或水合物 其中B代表C6-C10芳环或6-10元杂芳环，每一所述环可以是被取代和部分饱和的；K代表单键、-CH＝CH-或-(CR4bR5b)mb，其中R4b和R5b可以相同或不同，并且分别代表氢原子或C1-C4烷基，且mb是整数1或2；R1代表氢原子或C1-C6烷基；Z代表单键或-CO-NH-；且R代表C6-C10芳环或6-10元杂芳环，每一所述环可以是被取代和部分饱和的。10.依据9的方法，其中R代表吲哚、喹啉或异喹啉。11.依据2的方法，其中所述药拘是通式(Ia)所代表的磺酰胺化合物或其可药用盐或水合物 其中Aa代表可以被取代的单环或二环芳环；Ba代表6元不饱和烃环或含有一个氮原子作为杂原子的不饱和6元杂环，每一所述环可以是被取代的；Ca代表可以被取代的含有一个或两个氮原子的5元杂环；R1a代表氢原子或C1-C6烷基；Wa代表单键或-CH＝CH-；Ya代表碳或氮原子；Za代表-N(R2a)-，其中R2a代表氢原子或低级烷基，或氮原子。12.依据11的方法，其中Wa代表单键。13.依据11的方法，其中Wa代表单键，Za代表-NH-，且Ya代表碳原子。14.依据11-13任一项的方法，其中Ba代表可以被取代的苯或吡啶。15.依据11-14任一项的方法，其中Ca代表可以被取代的吡咯。16.依据11的方法，其中Aa代表可以被取代的苯或吡啶，Ba代表可以被取代的苯，Ca代表可以被取代的吡咯，Wa代表单键，且Za代表-NH-。17.依据2的方法，其中所述药物是通式(Ib)所代表的含有磺酰胺的杂环化合物或其可药用盐或水合物 其中Ab代表氢原子；卤素原子；羟基；可以被卤素原子取代的C1-C4烷基或烷氧基；氰基；-(CO)kbNR2bR3b本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗整联蛋白α２抗体在制备用于确定药物对整联蛋白α２表达影响的方法中的试剂的应用，其中所述方法包括如下步骤：通过免疫化学方法测定由施用药物的患者收集得到的血小板中整联蛋白α２表达量的步骤，和根据所测定的表达量的下降确定药物对除血小板以外的整联蛋白α２表达细胞中整联蛋白α２表达的影响的步骤。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：小野尚人，仙波太郎，畑直子，船桥泰博，若林利明，
申请(专利权)人：卫材RD管理有限公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]