用金磁微粒去除高丰度蛋白的方法技术

本发明专利技术涉及一种采用金磁微粒去除血清／浆等生物样品白蛋白和／或抗体等高丰度蛋白方法。金磁微粒是指以磁性纳米粒子或磁性纳米粒子的聚集体为核，在核表面包覆单质金、银等贵金属壳层形成的磁性复合微粒，也指以磁性纳米粒子或磁性纳米粒子的聚集体为核，在核表面组装纳米金、银等贵金属粒子形成的磁性复合微粒。本发明专利技术是通过亲和层析的方法将高丰度蛋白的亲和配基固定到金磁微粒表面，利用白蛋白或／和抗体与其相应亲和配基的亲和作用以及金磁微粒的超顺磁性从而在磁场中将白蛋白或／和抗体等高丰度蛋白从血清／浆等生物样品中分离出来以达到去除的目的。具有去除效率高、去除的特异性强、去除过程便捷的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种在血清/浆等生物样品中去除高丰度蛋白的方法。技术背景人类血清/浆等生物样品中含有机体组织细胞分泌、脱落至血中的多种低丰 度蛋白质，它们可能是一些信号传导和调控的关键蛋白。例如，坏死、凋亡或 溶血过程中，都会有一些细胞内蛋白质释放到血中。开展疾病的血清蛋白质组 学研究，寻找低丰度蛋白质，将有利于阐明发病机理，并有可能发现一些与疾 病特定状态相关的标志性蛋白质，从而为疾病的诊断提供新方法。血清蛋白质 组学的研究成果可应用于疾病的临床诊断、病程监测、疗效监控和药物治疗等 方面。然而一些高丰度蛋白质的存在，尤其是白蛋白和抗体，使得低丰度蛋白 质的分辨率下降，严重影响低丰度蛋白质的鉴定和检测。提高对低丰度蛋白检测的灵敏度和分辨率，关键在于去除样品中的高丰度 蛋白质。常用的两种方法一种是以树脂为载体对高丰度蛋白进行去除的方法， 另一种是以磁性微粒为载体通过亲和层析原理对高丰度蛋白进行去除的方法。以树脂为载体对高丰度蛋白进行去除的方法，分离柱需要一定的活化时间 及前处理步骤，并且所需反应体积较大，之后还需样品的浓縮，对小体积样品 处理时不能得到理想的结果。以磁性微粒为载体通本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用金磁微粒去除高丰度蛋白的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：　　　　１］用金磁微粒固定高丰度蛋白的亲和配基：取金磁微粒置于离心管中，磁性分离，弃上清；用偶联缓冲液清洗两次，磁性分离，弃上清；加入溶解在偶联缓冲液中的高丰度蛋白亲和配基，２０～４０℃条件下，充分反应１０ｍｉｎ～３０ｍｉｎ，磁性分离，弃上清；加入清洗缓冲液清洗，磁性分离，弃上清；加入保存缓冲液，２～８℃保存备用；　　　　２］稀释待处理生物样品：对待处理生物样品用去除缓冲液进行稀释；　　　　３］将金磁微粒和待处理生物样品共同反应：将固定了高丰度蛋白亲和配基的金磁微粒磁性分离，弃上清，加入去除缓冲液，混合均匀，磁性分离，弃上清...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈超，崔亚丽，唐一通，李铮，
申请(专利权)人：陕西西大北美基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]