大肠杆菌快速检测试剂盒的制备和使用方法技术

本发明专利技术涉及一种大肠杆菌快速检测试剂盒的制备和使用方法。其中试剂盒内包括环介导等温扩增反应液Ａ、Ｂｓｔ　　ＤＮＡ聚合酶Ｂ、显色剂Ｃ；反应液Ａ含有反应缓冲液、ｄＮＴＰ、硫酸镁、上游内引物５－ＧＣＣＧＴＴＡＡＡＣＴＧＡＧＴＴＴＧＣＴＣＡＧＴＣＣＡＧＧＣＴＧＡＡＡＴＴＡＣＴＣＡＡＣ－３、下游内引物５－ＧＡＡＡＴＧＡＡＡＡＴＴＣＡＧＧＴＴＧＧＴＧＣＴＣＧＣＡＴＣＡＡＴＴＴＴＴＧＣＣＡＧＡＴ－３、上游外引物５－ＴＧＡＣＡＧＣＧＡＴＣＴＴＴＣＴＴＣＴ－３、下游外引物５－ＣＧＡＴＡＴＴＡＡＡＡＣＣＧＴＣＣＡＧＧ－３和甜菜碱；检测大肠杆菌的方法包括待测样品或者细菌ＤＮＡ的提取、大肠杆菌的环介导等温扩增反应和显色检测。本发明专利技术的优点是快速、特异性强、灵敏度高而且成本低。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种大肠杆菌快速检测试剂盒，其特征是其中的试剂包括：　　　　（１）环介导等温扩增反应液Ａ：　　　　包括１０×Ｔｈｅｒｍｏｐｏｌ反应缓冲液、３００－５００μｍｏｌ／Ｌ　　ｄＮＴＰ、２－４ｍｍｏｌ／Ｌ硫酸镁、０．８－１．２μｍｏｌ／Ｌ上游内引物、０．８－１．２μｍｏｌ／Ｌ下游内引物、０．２－０．３μｍｏｌ／Ｌ上游外引物、０．２－０．３μｍｏｌ／Ｌ下游外引物和１－１．５ｍｏｌ／Ｌ甜菜碱；其中１０×Ｔｈｅｒｍｏｐｏｌ反应缓冲液含有２００ｍｍｏｌ／Ｌ　　ｐＨ８．８的三羟基甲基氨基甲烷－盐酸、１００ｍｍｏｌ／Ｌ氯化钾、１００ｍｍｏｌ／Ｌ硫酸铵、２０ｍｍｏｌ／Ｌ硫酸镁和１％曲拉通Ｘ－１００；　　　　其中所述的上游内引物５－ＧＣＣＧＴＴＡＡＡＣＴＧＡＧＴＴＴＧＣＴＣＡＧＴＣＣＡＧＧＣＴＧＡＡＡＴＴＡＣＴＣＡＡＣ－３；　　　　下游内引物５－ＧＡＡＡＴＧＡＡＡＡＴＴＣＡＧＧＴＴＧＧＴＧＣＴＣＧＣＡＴＣＡＡＴＴＴＴＴＧＣＣＡＧＡＴ－３；　　　　上游外引物５－ＴＧＡＣＡＧＣＧＡＴＣＴＴＴＣＴＴＣＴ－３；　　　　下游外引物５－ＣＧＡＴＡＴＴＡＡＡＡＣＣＧＴＣＣＡＧＧ－３。　　　　（２）ＵＮＧ酶：１Ｕ／μＬ；　　　　（３）Ｂｓｔ　　ＤＮＡ聚合酶Ｂ：８Ｕ／μＬ；　　　　（４）显色剂Ｃ：为１０％的荧光染料ＳＹＢＲ　　ＧＲＥＥＮ　　Ｉ或者ＤＮＡＧｒｅｅｎ。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高宏伟，梁成珠，王岩，雷质文，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]