本发明专利技术公开了一种检测单纯疱疹病毒Ⅱ型ＩｇＧ抗体的试剂盒及其制备方法，其中采用碱性磷酸酶标记抗体，化学发光底物液中含有１，２－二氧乙烷类衍生物。所述试剂盒由固相包被载体，生物素化抗原，阴阳性对照品，酶标抗体，化学发光底物液和浓缩洗涤液组成。本发明专利技术属于医学检验领域，建立了敏感快速的检测单纯疱疹病毒Ⅱ型ＩｇＧ抗体的方法，具有良好的精密度，是一种检测单纯疱疹病毒Ⅱ型ＩｇＧ抗体的可靠方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及临床检验领域，提供了一种采用生物素-亲和素包被技术和化学发光免疫分析技术检测单纯疱疹病毒II型IgG抗体(HSV-IIIgG)的试剂盒及其 制备方法。
技术介绍
单纯疱疹病毒直径约为120-150nm，向外依次由包膜、体被、衣壳三种同心结 构组成，体被由纤维质构成，细胞膜内含有脂成份。在低温下可生存数月，在湿 热50。C及干燥9(TC条件下30分钟可消灭。人类是单纯疱疹病毒的唯一 自然宿主， 人群感染高达80%-90%， 10%无症状。单纯疱疹病毒分为I型和II型二种，I型疱疹病毒主要是通过呼吸道、皮肤和 粘膜密切接触传播，感染腰以上部位的皮肤粘膜和器官。II型疱疹病毒主要引起生 殖器疱疹，而且主要通过直接接触病灶而传播，并导致皮肤病变。生殖器疱疹的 病原体90%为11型疱疹病毒，仅10%为1型疱疹病毒。单纯疱疹病毒一旦病毒进入人体，在疱疹初次发作后的数周内，抗体可持续 产生并存在于血液中，对于人体的自然防御非常重要。单纯疱疹的抗体主要有两 种， 一种是IgM抗体， 一般在病毒繁殖的高发期出现，持续时间比较短；另一种 抗体是IgG抗体，该抗体一旦产生，会长时间存在。只要感染了单纯疱疹，IgG抗 体就会在体内存在。大多数成年人都可终生存在单纯疱疹病毒的IgG抗体。生物素-亲和素之间的结合常数高达1O"(mol/L)'1， 一经结合就极为稳定。生物 素和亲和素既可与酶等多种材料标记，又可偶联抗体等一系列大分子生物活性物 质，这为临床检测抗原或抗体提供了更为有效和灵敏的手段。特别是近年来，链霉亲和素的问世克服了传统生物素-亲和素系统存在一定程度非特异性结合的缺 点，使该系统的应用日益广泛。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种将生物素-亲和素包被技术与化学发光免疫分析技术 结合，用于检测HSV-II型IgG抗体的试剂盒及其制备方法。本专利技术的技术方案 一种HSV-II型IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒， 其组成为亲和素包被的固相载体；生物素化的单纯疱疹病毒II型抗原；阴性对 照品；阳性对照品；碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体；上述酶所作用的化学发光 底物液和浓縮洗涤液。根据本专利技术的试剂盒，所述固相载体为微孔板或塑料管；所述碱性磷酸酶的 化学发光底物液的发光剂为1,2-二氧乙烷类衍生物，包括l,2-二氧乙烷类衍 生物为(金刚烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基) 苯基-1, 2-二氧乙烷(AMPPD)、 CSPD或CDP-Star。本专利技术的单纯疱疹病毒II型IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤1) 亲和素包被固相载体将亲和素加至0.05mol/L pH为7.0-7.5的PBS中混匀配制成所需浓度， 并将包被液负载于固相载体上；用生理盐水洗涤上述固相载体后，用含有 1%BSA， 0.1%防腐剂，pH值为7.0-7.5的O.01mol/L PBS作为封闭液封闭上 述固相载体。在上述方法中，所述亲和素的固相载体为微孔板或塑料管；2) 生物素化单纯疱疹病毒II型抗原将生物素(BNHS)溶于二甲基亚砜(DMSO)配制成10mg/mL的溶液，用 O.lmol/L硼酸钠缓冲液将纯化的单纯疱疹病毒II型抗原稀释至l-2mg/mL,将二者按1:50的比例混合，室温下搅拌反应4h，然后在0.01mol/L pH为7.0-7.5的 PBS中4。C透析过夜，结合物加入等体积甘油，一2(TC以下保存备用。3) 配制阴阳性对照品；将多份高效价HSV-IIgG阳性人血清混合后，56。Clh灭活，除菌过滤，适当 稀释后制成阳性对照品，稀释液为10%新生牛血清，0.1%防腐剂，0.02MTris-HCl 缓冲液，pH 7.0-7.5。将多份HSV-IIgG阴性人血清混合，56°C lh灭活后除菌过滤，制成阴性对照品。4) 制备碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体；采用戊二醛法将碱性磷酸酶与抗人IgG抗体偶联，然后对0.01mol/L pH为 7.0-7.5的PBS充分透析，加入等体积甘油，一2(TC以下保存备用。5) 配制化学发光底物液；化学发光底物液的组成为0.15-0.25mol/LTris-HCl， 16%NaCl， 0.4% KC1， 0.1%防腐剂，1.5%-4.0%发光剂，pH为7.0-7.5。在上述方法中，所述碱性磷酸酶的化学发光底物液的发光剂为1,2-二氧乙垸类衍生物，包括(金刚垸)-l,2-二氧乙垸、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基 -4-(3"-磷酰氧基)苯基-1， 2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。6) 配制浓縮洗涤液浓縮洗涤液的组成为0.15-0.25mol/LTris-HCl， 16%NaCl， l%Tween-20， pH 为7.0-7.5。使用时用去离子水稀释20倍。将上述制备好的半成品分装，组装成成品试剂盒。本专利技术的有益效果本专利技术中的试剂盒应用生物素-亲和素包被技术，不仅可 以保持被标记抗原的生物活性，而且因生物素与亲和素之间极高的亲和力，减少 了包被过程中的非特异吸附，并且在高度稀释的条件下仍可达到与直接包被同样 的效果，从而节省了包被抗体的用量。应用化学发光免疫分析技术可以避免酶联免疫分析试剂盒检测过程中划痕等外在因素对结果的影响。两种方法的结合有效 地提高了单纯疱疹病毒II型IgG抗体检测的灵敏度，是一种可靠的检测方 法。具体实施例方式实施例1制备本专利技术的单纯疱疹病毒II型IgG抗体化学发光免疫分析测定 试剂盒1) 亲和素固相微孔板的制备将亲和素加入0.05mol/LpH为7.2的PBS包被液中混匀配成2.5pg/mL， 然后加入到微孔板各孔中，每孔110nL， 4'C放置24h。用生理盐水洗三次， 每孔分别加入封闭液300nL，室温放置3小时，封闭液的配制为1.3mmol/L NaH2P04'2H20、 8.7mmol/L NaH2P04'12H20、 1%BSA和0.1%生物防腐剂， 定容至lOOOml， pH值为7.2。甩掉封闭液，在吸水纸上拍干。室温除湿干燥24小时。立即进行封袋， 贴签后置2 8i:保存。2) 酶标抗体的制备采用戊二醛法将碱性磷酸酶与抗人IgG抗体偶联，然后对0.05mol/LpH为7.2 的PBS充分透析，加入等体积甘油，一2(TC以下保存备用。3) 生物素化抗原的制备将生物素(BNHS)溶于二甲基亚砜(DMSO)配制成10mg/mL的溶液，用 O.lmol/L硼酸钠缓冲液将纯化的单纯疱疹病毒II型抗原稀释至lmg/mL;将二者 按1:50的比例混合，室温下搅拌反应4h;装入透析袋对0.05mol/L pH值为7.2的 PBS中4'C透析过夜，结合物加入等体积甘油，小量分装，一20'C以下保存备用。采用方阵法选择生物素化抗原和酶标抗体的工作浓度分别为l:2000和1:4000， 将生物素化抗原和酶标抗体用酶标抗体稀释液稀释，其组成成分为Tris 12.120g,HC110mL, BSA5g, Proclin 300 lml,去离子水定容至1000mL。4) 阴阳性对照品的制备将多份高效价HSV-IIIgG阳性人血清混合后，56'Clh灭活，除菌过滤，用含 10%新生牛血清，0.1%本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种单纯疱疹病毒Ⅱ型ＩｇＧ抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：亲和素包被的固相载体；生物素化的单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原；阴性对照品；阳性对照品；碱性磷酸酶标记的抗人ＩｇＧ抗体；化学发光底物液和浓缩洗涤液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋冰飞，应希堂，宋胜利，胡国茂，唐宝军，于尚永，
申请(专利权)人：北京科美东雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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