本发明专利技术涉及一种检测试剂盒及其制备方法，具体地，是一种间接法检测单纯疱疹病毒Ⅰ型ＩｇＧ抗体的化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。试剂盒的组分包括：固相包被载体，生物素化抗原，阴阳性对照品，酶标抗体，化学发光底物液和浓缩洗涤液。试剂盒的制备过程包括：亲和素包被固相载体、生物素标记抗原、制备阴阳性对照品、酶标记抗人ＩｇＧ抗体，以及配制化学发光底物液和浓缩洗涤液，分装上述半成品制成试剂盒。本发明专利技术属于医学检验领域，是一种灵敏的检测单纯疱疹病毒Ⅰ型ＩｇＧ抗体的方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学检验领域，提供了一种采用生物素-亲和素包被技术和化学发 光免疫分析技术检测单纯疱疹病毒I型IgG抗体(HSV-I IgG)的试剂盒及其制 备方法。
技术介绍
单纯疱疹是单纯疱疹病毒所引起的一种急性疱疹性皮肤病，属于DNA病毒， 人是单纯疱疹病毒唯一的自然宿主，传播方式主要是直接接触传染，亦可通过被 唾液污染的餐具而间接传染。单纯疱疹的抗体主要有两种， 一种是IgM抗体， 一般在病毒繁殖的高发期出 现，持续时间比较短；另一种抗体是IgG抗体，该抗体一旦产生，会长时间存在。 只要感染了单纯疱疹，IgG抗体就会在体内存在。单纯疱疹病毒分为I和II型两种， 一般认为单纯疱疹病毒I型主要感染腰以上部位，如咽扁桃体炎、角结膜炎及口唇疱疹等。大多数成年人都可终生存在单纯疱疹病毒的IgG抗体。单纯疱疹病毒抗体的血清学诊断可作为临床诊断疱疹的重要辅助手段，现今 用于检测单纯疱疹病毒I型IgG抗体的方法主要有放射免疫分析法，免疫胶体 金渗滤法，免疫印迹法和酶联免疫分析方法等。放射免疫分析法涉及放射性 同位素，检测所需时间长，较少采用；免疫胶体金渗滤法和免疫印迹法操作 过程相对复杂，且试剂需要低温保存；酶联免疫分析方法影响因素较多，灵 敏度不高。现今化学发光免疫分析方法是一种较先进的免疫分析方法，自从Halman于 1978年成功地建立了CLIA，许多新材料、新技术、新工艺以及新仪器的研制相继取得成功，加速了CLIA的逐步完善，目前已广泛应用到基础和临床医学的各领域。 从实用性、稳定性、准确性等方面来看，化学发光免疫分析己经达到并超过了放 射免疫分析和荧光免疫分析等方法，具有良好的发展前景。生物素-亲和素系统是70年代后期应用于免疫学，并得到迅速发展的一种新型 生物反应放大系统。亲和素可预包被在固相载体内，再将生物素化抗原或抗体包 被于孔内，从而解决了一些抗原或抗体不易包被的难题，也提高了检测灵敏度。 在间接法中，将生物素化抗原，待测抗体和酶标记二抗进行反应，在固相载体表 面形成BA-抗原-待测抗体-酶标记二抗免疫复合物，再加入示踪物，通过提高免疫 复合物的量放大反应信号，从而提高了免疫分析的灵敏度。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种将生物素-亲和素包被技术与化学发光技术结合，用 于检测HSV-I型IgG的试剂盒及其制备方法。本专利技术的技术方案 一种HSV-1型IgG化学发光免疫分析测定试剂盒，其组 成为亲和素包被的固相载体；生物素化的单纯疱疹病毒I型抗原；阴性对照品； 阳性对照品；碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体；上述酶所作用的化学发光底物液 和浓縮洗涤液。根据本专利技术的试剂盒，所述固相载体为微孔板或塑料管；所述碱性磷酸酶的 化学发光底物液的发光剂为1,2-二氧乙垸类衍生物，包括l，2-二氧乙垸类衍 生物为(金刚烷)-l，2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚垸)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基) 苯基-1， 2-二氧乙烷(AMPPD)、 CSPD或CDP-Star。本专利技术的单纯疱疹病毒I型IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤1)亲和素包被固相载体将亲和素加至0.05mol/L pH为7.0-7.5的PBS中混匀配制成所需浓度， 并将包被液负载于固相载体上；用生理盐水洗涤上述固相载体后，用含有 1%BSA， 0.1%防腐剂，pH值为7.0-7.5的O.Olmol/LPBS作为封闭液封闭上 述固相载体。在上述方法中，所述亲和素的固相载体为微孔板或塑料管；2) 生物素化单纯疱疹病毒I型抗原用常规方法将生物素(BNHS)溶于N， N—二甲基甲酰胺(DMF)，用O.lmol/L NaHC03将纯化的单纯疱疹病毒I型抗原进行适当稀释，将二者混合室温下搅拌 反应2-4h后用O.Olmol/LpH为7.0-7.5的PBS于4'C透析过夜，结合物加入等体 积甘油，一2(TC以下保存备用。3) 配制阴阳性对照品；将多份高效价HSV-IIgG阳性人血清混合后，56。Clh灭活，除菌过滤，适当 稀释后制成阳性对照品，稀释液为10%新生牛血清，0.1%防腐剂，0.02MTris-HCl 缓冲液，pH 7.0-7.5。将多份HSV-IIgG阴性人血清混合，56'C lh灭活后除菌过滤，制成阴性对照a卯o4) 制备碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体；采用戊二醛法将碱性磷酸酶与抗人IgG抗体偶联，然后对0.01mol/L pH为 7.0-7.5的PBS充分透析，加入等体积甘油，一20'C以下保存备用。5) 配制化学发光底物液；化学发光底物液中包含0.15-0.25mol/LTris-HCl， 16%NaCl， 0.4% KC1， 0.1%防腐剂，1.5%-4.0%发光剂。在上述方法中，所述碱性磷酸酶的化学发光底物液的发光剂为1，2-二氧乙垸类衍生物，包括(金刚垸)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚垸)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯基-1， 2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。6)配制浓縮洗涤液浓縮洗涤液中包含0.15-0.25mol/LTris-HCl， 16% NaCl， 1% Tween-20。使用时用蒸馏水稀释20倍。将上述制备好的半成品分装，组装成成品试剂盒。本专利技术的有益效果本专利技术中的试剂盒将化学发光检测技术与生物素-亲和素 包被技术结合，采用抗体间接法测定单纯疱疹病毒I型IgG抗体，提高了检测 的敏感性，为诊断单纯疱疹感染提供更为可靠的依据。具体实施例方式实施例1制备本专利技术的单纯疱疹病毒I型IgG抗体化学发光免疫分析测定 试剂盒1) 亲和素固相微孔板的制备将亲和素加入包被液中混匀配成2pg/mL，然后加入到微孔板各孔中， 每孔ll(HiL， 4。C放置24h，包被液的配制为2.2 g NaH2P04-2H20， 12.9 g Na2HP04.12H20， 9.0gNaCl，用蒸馏水定容至1000ml， pH为7.4。用生理盐水洗三次，每孔分别加入封闭液30(HiL，室温放置3小时，封 闭液的配制为0.2gNaH2PO4-2H2O、 2.9gNaH2P04'12H20、 10gBSA禾卩lmL生 物防腐剂，定容至1000ml， pH值为7.2。甩掉封闭液，在吸水纸上拍干。室温除湿干燥24小时。立即进行封袋， 贴签后置2 8'C保存。2) 酶标抗体的制备采用戊二醛法将碱性磷酸酶与抗人IgG抗体偶联，然后对0.05mol/LpH为7.2 的PBS充分透析，加入等体积甘油，—20'C以下保存备用。3) 生物素化抗原的制备用常规方法将生物素(BNHS)溶于N，N—二甲基甲酰胺(DMF)配成lmg/mL;用0.1mol/L的NaHC03将纯化的单纯疱疹病毒I型抗原稀释为l-2mg/mL。按BNHS与抗体容积比为1:8或重量比1:7左右混合，室温搅拌下反应2-4h;装入透析袋对0.05mol/L pH值为7.2的PBS 4'C透析过夜，结合物加入等体积甘油，小量分装，一20'C以下保存备用。采用方阵法选择生物素化抗原和酶标抗体的工作浓度分别为l:3500和1:5000，将生物素化抗原和酶标抗体用酶标抗体稀释液稀释，其组成成分为Tris 12.120g，HC110mL, BSA5g, Procl本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种单纯疱疹病毒Ｉ型ＩｇＧ抗体化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：亲和素包被的固相载体；生物素化的单纯疱疹病毒Ｉ型抗原；阴性对照品；阳性对照品；碱性磷酸酶标记的抗人ＩｇＧ抗体；化学发光底物液和浓缩洗涤液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋冰飞，应希堂，宋胜利，胡国茂，郑金来，于尚永，
申请(专利权)人：北京科美东雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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