一种鸡腺病毒卵黄抗体全蛋喷干粉的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡腺病毒卵黄抗体全蛋喷干粉的制备方法，包括为蛋鸡注射腺病毒疫苗，对卵黄中的卵黄抗体进行免疫学检测，腺病毒的卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:15以上时收集鸡蛋；将收集的鸡蛋进行清洗消毒，之后在无菌条件下打蛋，将整蛋液加水搅拌，然后分别进行酵母除糖、胃蛋白酶酶切蛋白步骤，之后进行温浴，冷却、喷干即得。由本发明专利技术提供的制备方法得到的全蛋抗体粉剂溶解性好，抗体损失少，抗体活性高，并且成本大大减少，具有较好的经济效益和社会效益。

【技术实现步骤摘要】
一种鸡腺病毒卵黄抗体全蛋喷干粉的制备方法
本专利技术涉及抗体药物领域，特别是涉及一种鸡腺病毒卵黄抗体全蛋喷干粉的制备方法。
技术介绍
卵黄抗体提取于新鲜鸡蛋的蛋黄，因为鸡蛋含水量高（平均值在70%以上）在储存过程中易受周围温度、湿度、储存方法及储存时间等的限制，易腐败变质。然而将卵黄抗体提取后进行处理得到粉状蛋黄粉，不但能阻止微生物生长又能减缓化学反应速度，有利于抗体的储存及运输。处理后得到的蛋黄粉使用更加简便，不仅可任意调节稀释倍数，控制抗体浓度，还能作为添加剂，添加于兽药中。但是市面上存在的卵黄抗体喷雾干燥技术使用的是卵黄，并且卵黄液还经过沉降后才喷雾干燥，虽然得到的卵黄抗体较为纯净，但卵黄与卵清分离过程中以及卵黄沉降过程中相当一部分的卵黄抗体会丢失，而且过多的纯化抗体也会造成成本的增加，卵黄抗体喷雾干燥前越纯净，喷雾干燥后损失的越多，这是因为鸡蛋的某些物质能够对抗体起到保护作用。虽然目前也存在全蛋粉喷干工艺的研究，但是这些方法都存在着喷干温度过高，喷干后溶解性不好等问题，而且这些工艺对于卵黄中的抗体并未起到保护措施，喷干后抗体存活基本为零。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种鸡腺病毒卵黄抗体全蛋喷干粉的制备方法；通过该方法得到的全蛋抗体粉剂溶解性好，抗体损失少，抗体活性高，并且成本大大减少。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种鸡腺病毒卵黄抗体全蛋喷干粉的制备方法，步骤如下：（1）取刚开始产蛋的蛋鸡，为蛋鸡注射腺病毒疫苗，对蛋鸡免疫3次，每次间隔9天，对卵黄中的卵黄抗体进行免疫学检测，腺病毒的卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:15以上时收集鸡蛋；（2）将收集的鸡蛋进行清洗干净，然后用新洁尔灭进行消毒，之后再清洗喷淋干净，晾干，置于4℃下保存；（3）将步骤（2）中保存的鸡蛋在无菌条件下打蛋，将整蛋液添加一倍体积水后用搅拌机搅拌均匀；（4）向整蛋液中添加4‰的酿酒酵母进行除糖，除糖时间为6-10小时，除糖温度为30-35℃；（5）用pH为3的盐酸溶液活化胃蛋白酶，活化后加水调节pH为4-5，按总蛋液2‰的酶量添加胃蛋白酶进行酶切，酶切时间为2-4h，酶切温度32-37℃；（6）酶切完成过后，于50℃温浴15-20分钟，在温浴过程中，添加2-8‰的海藻酸钠作为保护剂，1‰吐温80作为乳化剂，5-10％的可溶性淀粉，慢慢搅拌直至温浴时间结束；然后迅速冷却至4℃，设置喷干机进风温度140℃，出风温度70℃，将蛋液进行喷干，收集可得腺病毒全蛋抗体喷干粉。优选的方案是，所述步骤（4）中除糖时间为8小时。优选的方案是，所述步骤（4）中除糖温度为32℃。优选的方案是，所述步骤（5）中酶切时间为3小时。优选的方案是，所述步骤（5）中酶切温度34℃。优选的方案是，所述步骤（6）中海藻酸钠的添加量为4‰。优选的方案是，所述步骤（6）中可溶性淀粉的添加量为8％。本专利技术的有益效果体现在：（1）在本专利技术中，获取全蛋液后加入了酵母除糖、胃蛋白酶酶切蛋白步骤，酵母除糖的同时还能将蛋液处理成更稳定的溶液体系，并且不会对抗体蛋白特异性免疫活性产生危害；（2）在本专利技术中，采用胃蛋白酶酶切能完整保存抗体Fab片段，不会造成抗体失活；（3）本专利技术在喷雾干燥前添加海藻酸钠作为抗体保护剂，吐温80作为乳化剂，并且温浴作用能够让海藻酸钠与吐温80溶解迅速，能使吐温80将油水混合物切成更小的分子体系，这样喷干得到的全蛋抗体粉不会存在不溶的情况；（3）由本专利技术提供的制备方法得到的全蛋抗体粉剂溶解性好，抗体损失少，抗体活性高，并且成本大大减少，具有较好的经济效益和社会效益。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明：其中本专利技术中所用蛋鸡均来自青岛后山后鸡场。实施例1一种鸡腺病毒卵黄抗体全蛋喷干粉的制备方法，步骤如下：（1）取刚开始产蛋的蛋鸡，为蛋鸡注射腺病毒疫苗，对蛋鸡免疫3次，每次间隔9天，对卵黄中的卵黄抗体进行免疫学检测，腺病毒的卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:15以上时收集鸡蛋；（2）将收集的鸡蛋进行清洗干净，然后用新洁尔灭进行消毒，之后再清洗喷淋干净，晾干，置于4℃下保存；（3）将步骤（2）中保存的鸡蛋在无菌条件下打蛋，将整蛋液添加一倍体积水后用搅拌机搅拌均匀；（4）向整蛋液中添加4‰的酿酒酵母进行除糖，除糖时间为6小时，除糖温度为30℃；（5）用pH为3的盐酸溶液活化胃蛋白酶，活化后加水调节pH为4，按总蛋液2‰的酶量添加胃蛋白酶进行酶切，酶切时间为2h，酶切温度32℃；（6）酶切完成过后，于50℃温浴15分钟，在温浴过程中，添加2‰的海藻酸钠作为保护剂，1‰吐温80作为乳化剂，5％的可溶性淀粉，慢慢搅拌直至温浴时间结束；然后迅速冷却至4℃，设置喷干机进风温度140℃，出风温度70℃，将蛋液进行喷干，收集可得腺病毒全蛋抗体喷干粉。实施例2一种鸡腺病毒卵黄抗体全蛋喷干粉的制备方法，步骤如下：（1）取刚开始产蛋的蛋鸡，为蛋鸡注射腺病毒疫苗，对蛋鸡免疫3次，每次间隔9天，对卵黄中的卵黄抗体进行免疫学检测，腺病毒的卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:15以上时收集鸡蛋；（2）将收集的鸡蛋进行清洗干净，然后用新洁尔灭进行消毒，之后再清洗喷淋干净，晾干，置于4℃下保存；（3）将步骤（2）中保存的鸡蛋在无菌条件下打蛋，将整蛋液添加一倍体积水后用搅拌机搅拌均匀；（4）向整蛋液中添加4‰的酿酒酵母进行除糖，除糖时间为10小时，除糖温度为35℃；（5）用pH为3的盐酸溶液活化胃蛋白酶，活化后加水调节pH为4，按总蛋液2‰的酶量添加胃蛋白酶进行酶切，酶切时间为4h，酶切温度34℃；（6）酶切完成过后，于50℃温浴15分钟，在温浴过程中，添加8‰的海藻酸钠作为保护剂，1‰吐温80作为乳化剂，8％的可溶性淀粉，慢慢搅拌直至温浴时间结束；然后迅速冷却至4℃，设置喷干机进风温度140℃，出风温度70℃，将蛋液进行喷干，收集可得腺病毒全蛋抗体喷干粉。实施例3一种鸡腺病毒卵黄抗体全蛋喷干粉的制备方法，步骤如下：（1）取刚开始产蛋的蛋鸡，为蛋鸡注射腺病毒疫苗，对蛋鸡免疫3次，每次间隔9天，对卵黄中的卵黄抗体进行免疫学检测，腺病毒的卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:15以上时收集鸡蛋；（2）将收集的鸡蛋进行清洗干净，然后用新洁尔灭进行消毒，之后再清洗喷淋干净，晾干，置于4℃下保存；（3）将步骤（2）中保存的鸡蛋在无菌条件下打蛋，将整蛋液添加一倍体积水后用搅拌机搅拌均匀；（4）向整蛋液中添加4‰的酿酒酵母进行除糖，除糖时间为8小时，除糖温度为32℃；（5）用pH为3的盐酸溶液活化胃蛋白酶，活化后加水调节pH为4，按总蛋液2‰的酶量添加胃蛋白酶进行酶切，酶切时间为3h，酶切温度37℃；（6）酶切完成过后，于50℃温浴1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡腺病毒卵黄抗体全蛋喷干粉的制备方法，其特征在于，步骤如下：/n（1）取刚开始产蛋的蛋鸡，为蛋鸡注射腺病毒疫苗，对蛋鸡免疫3次，每次间隔9天，对卵黄中的卵黄抗体进行免疫学检测，腺病毒的卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:15以上时收集鸡蛋；（2）将收集的鸡蛋进行清洗干净，然后用新洁尔灭进行消毒，之后再清洗喷淋干净，晾干，置于4℃下保存；/n（3）将步骤（2）中保存的鸡蛋在无菌条件下打蛋，将整蛋液添加一倍体积水后用搅拌机搅拌均匀；/n（4）向整蛋液中添加4‰的酿酒酵母进行除糖，除糖时间为6-10小时，除糖温度为30-35℃；/n（5）用pH为3的盐酸溶液活化胃蛋白酶，活化后加水调节pH为4-5，按总蛋液2‰的酶量添加胃蛋白酶进行酶切，酶切时间为2-4h，酶切温度32-37℃；/n（6）酶切完成过后，于50℃温浴15-20分钟，在温浴过程中，添加2-8‰的海藻酸钠作为保护剂，1‰吐温80作为乳化剂，5-10％的可溶性淀粉，慢慢搅拌直至温浴时间结束；然后迅速冷却至4℃，设置喷干机进风温度140℃，出风温度70℃，将蛋液进行喷干，收集可得腺病毒全蛋抗体喷干粉。/n

【技术特征摘要】
1.一种鸡腺病毒卵黄抗体全蛋喷干粉的制备方法，其特征在于，步骤如下：
（1）取刚开始产蛋的蛋鸡，为蛋鸡注射腺病毒疫苗，对蛋鸡免疫3次，每次间隔9天，对卵黄中的卵黄抗体进行免疫学检测，腺病毒的卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:15以上时收集鸡蛋；（2）将收集的鸡蛋进行清洗干净，然后用新洁尔灭进行消毒，之后再清洗喷淋干净，晾干，置于4℃下保存；
（3）将步骤（2）中保存的鸡蛋在无菌条件下打蛋，将整蛋液添加一倍体积水后用搅拌机搅拌均匀；
（4）向整蛋液中添加4‰的酿酒酵母进行除糖，除糖时间为6-10小时，除糖温度为30-35℃；
（5）用pH为3的盐酸溶液活化胃蛋白酶，活化后加水调节pH为4-5，按总蛋液2‰的酶量添加胃蛋白酶进行酶切，酶切时间为2-4h，酶切温度32-37℃；
（6）酶切完成过后，于50℃温浴15-20分钟，在温浴过程中，添加2-8‰的海藻酸钠作为保护剂，1‰吐温80作为乳化剂，5-10％的可溶性淀粉，慢慢搅拌直至温浴时间结束；然后迅速冷却至4℃，设置喷干机...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜新永，李霞，李先胜，赵丹丹，罗成盛，张庆，刘玉庆，盖春云，衣蕾，马如霞，刘爽，
申请(专利权)人：青岛润达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37