本发明专利技术采用筛选得到的对于PRRSV具有广谱中和活性的单克隆抗体MAB‑GP3为活性成分，制备得到对PRRSV感染具有预防和治疗效果的药物制剂，将其用于PRRSV感染的治疗，其可以有效的减轻肺部宏观病变，同时还能有效的提升感染动物的存活率。
【技术实现步骤摘要】
一种用于预防和治疗PRRSV感染的抗体药物
：本专利技术属于生物领域，具体用于预防和治疗PRRSV感染的药物，特别涉及具有广谱中和活性的PRRSV单克隆抗体MAB-GP3在制备用于预防和治疗PRRSV感染的药物中的应用。
技术介绍
：猪繁殖与呼吸综合征（Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV）引起的以母猪流产和仔猪呼吸障碍为主要特征的病毒性传染病，并能引起严重的免疫抑制。目前PRRSV有两种基因型：1型亦称欧洲型（Lelystad原型）和2型亦称北美型（VR2332原型），PRRSV-1和PRRSV-2株核苷酸序列约有60%相似性。其中PRRSV-II型病毒包括VR2385，VR2332，CH1a，SD16等，PRRSV-I型毒目前中国发现的有GZ11。中和抗体是当病原微生物侵入机体时会产生相应的抗体。病原微生物入侵细胞时需要依赖病原体自身表达的特定分子与细胞上的受体结合，才能感染细胞，并进一步扩增。中和抗体是B淋巴细胞产生的某些抗体，能够与病原微生物表面的抗原结合，从而阻止该病原微生物黏附靶细胞受体，防止侵入细胞。中和抗体在抗猪繁殖与呼吸综合征病毒感染过程中起重要作用,在自然感染PRRSV的过程中，中和抗体产生较晚，为病毒在宿主体内大量复制并感染其他易感动物提供了充裕的时间。然而被动输入PRRSV的中和抗体可预防PRRSV感染妊娠母猪，并且对母猪和仔猪都可起到消除性免疫作用。然而由于不同PRRSV毒株的核酸序列差别较大存在抗原性存在差异，导致单一毒株致弱的PRRSV弱毒疫苗难以对核酸序列差别较大的野毒难以产生完整的保护。另一方面，临床上也有报道在猪群上也检测个别PRRSV感染猪个体的血清样本含有的多克隆血清可同时中和1型和2型PRRSV病毒的感染，提示不同来源的PRRSV病毒上存在保守的抗原表位可刺激机体产生广谱中和抗体，但是，现有研究中尚未报道具有广谱中和的单克隆抗体及其应用。本专利技术鉴定出一株PRRSV特异性单克隆抗体，其所识别的保守表位广泛存在于不同基因型的PRRSV毒株，并且该抗体可在体外实验上中和不同PRRSV毒株对易感细胞的感染。
技术实现思路
：针对现有技术中缺乏PRRSV广谱中和抗体的问题，本专利技术鉴定出一株PRRSV广谱中和抗体MAB-GP3，对于PRRSV-I型和PRRSV-II型病毒均具有较高的中和活性，并将其用于猪繁殖与呼吸综合征的治疗药物的开发。为解决以上技术问题，本专利技术采用如下技术手段：一种用于治疗PRRSV感染的抗体药物，其特征在于，所述药物的主要活性成分为PRRSV广谱中和单克隆抗体MAB-GP3，所述PRRSV广谱中和单克隆抗体MAB-GP3包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo：1所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo：2所示。本专利技术还请求保护所述PRRSV广谱中和单克隆抗体MAB-GP3的编码DNA，包括重链可变区和轻链可变区，其特征在于：所述重链可变区的编码DNA序列如SEQIDNo：3所示；所述轻链可变区的编码DNA序列如SEQIDNo：4所示。所述单克隆抗体MAB-GP3为IgG2b亚型。所述PRRSV感染为PRRSV-I型和PRRSV-II型病毒同时或单独感染。PRRSV广谱中和单克隆抗体MAB-GP3在制备用于治疗PRRSV感染的抗体药物中的应用，所述PRRSV广谱中和单克隆抗体MAB-GP3包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo：1所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo：2所示。基于以上技术方案，本专利技术具有如下技术效果：本专利技术采用筛选得到的对于PRRSV具有广谱中和活性的单克隆抗体MAB-GP3为活性成分，制备得到对PRRSV感染具有预防和治疗效果的药物制剂，将其用于PRRSV感染的治疗，其可以有效的减轻肺部宏观病变，同时还能有效的提升感染动物的存活率。附图说明：图1：单克隆抗体MAB-GP3病毒中和实验结果图：图1-A为Westernblot检测结果，其中SD16表示PRRSV-SD16病毒；IsotypeControl为同型对照组，即未感染PRRSV的小鼠IgM；N表示基于PRRSV-N蛋白检测表征的病毒繁殖水平；α-Tublin为α微管蛋白，作为Westernblot内参。图1-B为基于荧光定量PCR检测PRRSV-N基因mRNA表达水平的检测结果。图2：单克隆抗体MAB-GP3广谱反应活性测定结果图。图3：单克隆抗体MAB-GP3广谱中和活性测定结果图。图4：单克隆抗体MAB-GP3腹水中和活性的检测结果图：图4-A，单克隆抗体MAB-GP3腹水针对PRRSV-SD16病毒（PRRSV-II型）的中和效价；图4-B，单克隆抗体MAB-GP3腹水针对PRRSV-GZ11病毒（PRRSV-I型）的中和效价。图5：单克隆抗体MAB-GP3对PRRSV感染的体内保护效果图：图5-A，肺部宏观病变结果；图5-B肺部宏观病变评分结果。具体实施方式：下面列出具体实施方案对本专利技术做进一步阐述，以使本领域技术人员可以更清楚得得知本专利技术的技术方案，并非对本专利技术的限制。实施例1：单克隆抗体MAB-GP3的制备和鉴定1.杂交瘤细胞系的建立将PRRSV病毒：SD16(由西北农林科技大学动物医学院免疫生物学实验室提供）作为免疫原，用弗氏完全佐剂（Sigma公司）1:1混合乳化，免疫6周龄雌性Balb/c小鼠（由西安交通大学提供），腹部皮下注射，剂量为3×10^7PFU/只，每14天加强免疫一次。第三次免疫后7天尾静脉采血用IFA检测小鼠血清中抗免疫原的抗体效价，效价最好的的小鼠以尾静脉注射冲击免疫，免疫原用生理盐水1:1混匀，剂量为3×10^7PFU/只2.细胞融合2.1无菌获取免疫后小鼠的脾细胞，以扩大培养好的小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）,两者比例5:1，将50ml离心管中脾细胞悬液和瘤细胞悬液1000rpm离心10min。离心后分别弃尽上清，各添加10ml不完全1640培养基，用吸管重新悬浮细胞，用吸管将10ml脾细胞悬液添加到10ml瘤细胞悬液中，充分混匀。1000rpm离心10min。离心完成后，弃上清，用手指轻轻弹击离心管底部，使细胞松散呈糊状，散在管底壁上。准备37℃水浴烧杯，将离心管置于烧杯中，右手用吸管吸取1mlPEG1500（Roche公司），沿离心管壁，尽量接近细胞处缓缓加入PEG，右手始终不停均匀转动离心管，时间控制在60s。轻轻摇晃，缓缓添加15ml培养基，终止融合，充分混匀，在水浴中静置5min。700rpm离心8min弃上清，添加HAT培养基10ml，补加HAT培养基本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于治疗PRRSV感染的抗体药物，其特征在于，所述药物的主要活性成分为PRRSV广谱中和单克隆抗体MAB-GP3，所述PRRSV广谱中和单克隆抗体MAB-GP3包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于治疗PRRSV感染的抗体药物，其特征在于，所述药物的主要活性成分为PRRSV广谱中和单克隆抗体MAB-GP3，所述PRRSV广谱中和单克隆抗体MAB-GP3包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo：1所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo：2所示。
2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述PRRSV广谱中和单克隆抗体MAB-GP3的编码DNA，包括重链可变区和轻链可变区，其特征在于：
所述重链可变区的编码DNA序列如SEQIDNo：3所示；
所述轻链可变区的编码DNA序列如SEQ...
【专利技术属性】
技术研发人员：南雨辰，张志刚，周恩民，武春燕，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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