具有高HIV抗病毒和免疫调节双重活性的Fc融合蛋白衍生物制造技术

本发明专利技术涉及针对HIV的Fc融合蛋白衍生物，所述Fc融合蛋白衍生物具有在哺乳动物细胞中的增加的产量、延长的抗病毒和免疫调节活性。本发明专利技术的Fc融合蛋白衍生物的特征在于：(i)阻断人类免疫缺陷病毒(HIV)进入宿主细胞中，(ii)通过活化自然杀伤(NK)细胞和其他免疫系统细胞引发效应物功能，(iii)在哺乳动物细胞中具有高产量的产生，以及(iv)在体内具有延长的活性。本发明专利技术还涉及表达所述Fc融合蛋白衍生物的核酸、载体和宿主细胞，以及它们在人类健康方面的治疗和诊断应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有高HIV抗病毒和免疫调节双重活性的Fc融合蛋白衍生物专利
本专利技术涉及针对HIV的Fc融合蛋白衍生物，所述Fc融合蛋白衍生物具有在哺乳动物细胞中的增加的产量、延长的抗病毒和免疫调节活性。本专利技术的Fc融合蛋白衍生物的特征在于：(i)阻断人类免疫缺陷病毒(HIV)进入宿主细胞中，(ii)通过活化自然杀伤(NK)细胞和其他免疫系统细胞引发选择性效应物功能(effectorfunction)，(iii)在哺乳动物细胞中具有高产量的产生(highyieldproduction)，以及(iv)在体内具有延长的活性。公开并且例证了这些多肽的多种形式。表达这些多肽的分离的核酸、载体和宿主细胞，以及它们在人类健康方面的治疗和诊断应用，也在本专利技术的范围内。专利技术背景HIV感染是对全球人类健康的主要威胁之一。据估计，自1981年以来，全世界多于7800万人已经被人类免疫缺陷病毒感染。在同一时期，这些被感染的个体中近一半已经死于因之产生的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。参见UNAIDS,http://www.unaids.org/,2015年10月。保护性抗体的产生是用于开发针对人类病原体的疫苗的主要机制。然而，迄今为止，能够引发针对HIV的这样的抗体的免疫原的开发已经失败。这些免疫原的设计首先要求鉴定出保守的表位，以确保持续和稳定的应答，并且其次，要求设计适当地呈递这些表位的新的和更有效的免疫原。参见HaynesB,CurrOpinImmunol.2015；35:39-47。与免疫原设计方面的这些不足的进展不同，最近已经鉴定出针对从HIV感染的个体分离的HIV包膜糖蛋白的大量新的、有效的和广谱的抗体(即广泛中和抗体(broadlyneutralizingantibody)，bNAb)。参见MascolaJ等人,ImmunolRev.2013；254:225-244。此外，基于抗体结构的合成分子也已经作为新的治疗剂被提出。参见GardnerM等人,Nature2015；519:87-91。事实上，高度有效的抗体可以保护未被感染的个体免于获得HIV，或者可以在HIV感染的患者的根除策略中使用。参见Mascola,2013,同上。还提出使用针对包膜糖蛋白及其亚基的中和抗体来预防HIV在体内复制。参见YangX等人,J.Virol.2005；79:3500-3508。在治疗领域中，由于抗体作为能够通过与HIV包膜糖蛋白结合而阻断HIV复制的抗病毒剂和通过抗体链的恒定区(Fc)与NK细胞和其他细胞的表面上表达的Fc受体CD16相互作用而作为NK细胞活化剂的双重功能，它们是尤其重要的。这种相互作用使CD16+免疫细胞能够通过被称为抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的机制杀伤被感染的细胞。参见MilliganC等人,CellHostMicrobe.2015；17:500-506。因为两种活性看起来是保护未被感染的受试者所需要的，已经做出巨大努力来开发具有增加的抗病毒和ADCC活性的中和抗体。已经描述了若干种IgG衍生物，其增加了人类IgG1对人类CD16的亲和力，因此增加了它们的ADCC活性。参见SaxenaA等人,FrontiersImmunol2016；7(580):1-11。然而，这些修饰的Fc融合蛋白的临床应用可能受它们在哺乳动物细胞中的低产生水平或它们的效应物功能的变化影响。因此，本领域存在对具有受体选择性和高产生水平的具有增加的ADCC活性的中和抗体的需要。专利技术概述在第一个方面中，本申请涉及本专利技术的修饰的Fc融合蛋白衍生物，所述修饰的Fc融合蛋白衍生物从N-末端至C-末端包含：(a)人类CD4受体的D1细胞外结构域和D2细胞外结构域，(b)人类IgG1的Fc部分，所述人类IgG1的Fc部分包含M428L或N434S点突变中的至少一个，(c)选自由以下组成的组的部分(i)序列为(GGGGS)n的接头多肽，其中1≤n≤10，(ii)SEQIDNO:5-9和(iii)其组合，以及(d)gp41衍生的多肽。本专利技术的Fc融合蛋白衍生物具有比本领域已知的任何其他可比较的抗体更高的抗病毒和ADCC活性。参见Gardner,2015,同上。本专利技术的Fc融合蛋白衍生物的表达和作用持续时间也比其他可比较的抗HIV抗体更高。在另外的方面中，本专利技术涉及编码本专利技术的Fc融合蛋白衍生物的核酸，涉及包含所述核酸的载体以及涉及包含前文指示的核酸和载体的宿主细胞。在另一个方面中，本专利技术涉及包含本专利技术的Fc融合蛋白衍生物、核酸、载体和宿主细胞或其混合物的药物组合物。在另一个方面中，本专利技术涉及包含本专利技术的Fc融合蛋白衍生物、核酸、载体、宿主细胞和药物组合物以及至少一种治疗剂的组合。在又另一个方面中，本专利技术涉及本专利技术的Fc融合蛋白衍生物、核酸、载体、宿主细胞、药物组合物和组合或其混合物作为药物的用途。在该方面的另外的形式中，本专利技术涉及本专利技术的Fc融合蛋白衍生物、核酸、载体、宿主细胞、药物组合物和组合或其混合物在治疗或预防HIV感染或AIDS中的用途。在该方面的可选的形式中，本专利技术涉及一种在受试者中治疗或预防HIV感染或AIDS的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本专利技术的Fc融合蛋白衍生物、核酸、载体、宿主细胞、药物组合物和组合或其混合物。在该方面的另一个可选的形式中，本专利技术涉及本专利技术的Fc融合蛋白衍生物、核酸、载体、宿主细胞、药物组合物和组合或其混合物在制备用于治疗或预防HIV感染或AIDS的药物中的用途。另外地，本专利技术涉及一种制备本专利技术的Fc融合蛋白衍生物的方法，该方法包括以下步骤：(a)培养包含根据本专利技术的核酸的宿主细胞，(b)使核酸序列表达和(c)从宿主细胞培养物回收Fc融合蛋白衍生物。在另一个方面中，本专利技术涉及一种使HIV失活的方法，该方法包括使病毒与本专利技术的Fc融合蛋白衍生物接触的步骤。在另外的方面中，本专利技术涉及一种在HIV感染的细胞中诱导gp120的表达的方法，该方法包括使感染的细胞与本专利技术的Fc融合蛋白衍生物、核酸、载体、宿主细胞、药物组合物和组合或其混合物接触的步骤。在另一个方面中，本专利技术涉及一种检测样品中的HIV的方法，该方法包括以下步骤：(a)使样品与本专利技术的Fc融合蛋白衍生物接触，和(b)确定Fc融合蛋白衍生物是否与样品的分子特异性结合。在又另一个方面中，本专利技术涉及一种试剂盒，所述试剂盒包含本专利技术的Fc融合蛋白衍生物、核酸、载体、宿主细胞和药物组合物或其混合物。附图简述图1.本专利技术的Fc融合蛋白衍生物的通用结构的示意图。从N-末端至C-末端，分子包含人类CD4的D1结构域和D2结构域、人类IgG1的恒定区(例如野生型、突变的)、任选的人类CCR5肽、柔性接头和HIVgp41肽(例如T-20、C34或EHO)。图2.为了改善Fc融合蛋白的活性和产量而进行的筛选程序的示意图。已经在人类IgG1序列中筛选出改善产生和效应物功能的不同的突变集合。参见表1。然后筛选出不同的接头和gp41本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Fc融合蛋白衍生物，所述Fc融合蛋白衍生物从N-末端至C-末端包含：/n(a)人类CD4的D1细胞外结构域和D2细胞外结构域，/n(b)人类IgG1的Fc部分，所述人类IgG1的Fc部分包含M428L或N434S点突变中的至少一个，/n(c)选自由以下组成的组的部分：(i)序列为(GGGGS)

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170510 US 62/504,4111.Fc融合蛋白衍生物，所述Fc融合蛋白衍生物从N-末端至C-末端包含：
(a)人类CD4的D1细胞外结构域和D2细胞外结构域，
(b)人类IgG1的Fc部分，所述人类IgG1的Fc部分包含M428L或N434S点突变中的至少一个，
(c)选自由以下组成的组的部分：(i)序列为(GGGGS)n的接头多肽，其中1≤n≤10，(ii)SEQIDNO:5-9和(iii)其组合，以及
(d)gp41衍生的多肽。


2.根据权利要求1所述的Fc融合蛋白衍生物，其中所述人类IgG1的Fc部分包含G236A、S239D、A330L或I332E点突变中的至少一个。


3.根据权利要求1或2所述的Fc融合蛋白衍生物，其中所述人类IgG1的Fc部分还包含F243L点突变。


4.根据任一前述权利要求所述的Fc融合蛋白衍生物，其中所述人类IgG1的Fc部分还包含R292P点突变。


5.根据任一前述权利要求所述的Fc融合蛋白衍生物，其中所述人类IgG1的Fc部分还包含Y300L点突变。


6.根据任一前述权利要求所述的Fc融合蛋白衍生物，其中所述人类IgG1的Fc部分还包含P396L点突变。


7.根据任一前述权利要求所述的Fc融合蛋白衍生物，其中所述人类IgG1的Fc部分还包含S298A、E333A或K334A点突变中的至少一个。


8.根据任一前述权利要求所述的Fc融合蛋白衍生物，其中所述人类IgG1的Fc部分还包含K322A或V305I点突变。


9.根据任一前述权利要求所述的Fc融合蛋白衍生物，其中人类CCR5受体序列包含SEQIDNO:5。


10.根据任一前述权利要求所述的Fc融合蛋白衍生物，其中所述gp41衍生的多肽包含T-20、C34或EHO多肽。


11.一种分离的核酸，所述分离的核酸编码根据权利要求1所述的Fc融合蛋白衍生物。


12.根据权利要求11所述的核酸，所述核酸已经过密码子优化。


13.一种表达载体，所述表达载体包含根据权利要求11至12所述的核酸。


14.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求1至10中任一项所述的Fc融合蛋白衍生物、根据权利要求11至12所述的核酸或根据权利要求13所述的表达载体。


15.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的根据权利要求1至10中任一项所述的Fc融合蛋白衍生物、根据权利要求11至12所述的核酸、根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·卡里略莫丽娜，B·克洛特萨拉，J·M·布兰科阿布厄斯，
申请(专利权)人：阿尔巴朱纳治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：西班牙;ES