用于新型冠状病毒和非典病毒的广谱抗体喷剂制造技术

本发明专利技术公开了一种抗新型冠状病毒肺炎和非典型肺炎的复合IgY抗体，通过以下方法制备：构建新型冠状病毒和非典型肺炎病毒的重组抗原；以重组抗原制备免疫制剂免疫产蛋禽类，从免疫禽蛋中获得的特异性复合IgY抗体。采用该抗体制备喷剂，用于广谱杀灭新型冠状病毒和非典型肺炎病毒两种病毒，适用于喷涂在鼻腔、口腔、皮肤等部位；该抗体制剂有特异性中和病毒作用，能有效控制传染源、保护易感人群、一线医护人员消毒防护，预防新型冠状病毒传播。

Broad-spectrum antibody novel coronavirus and SARS virus spray

【技术实现步骤摘要】
用于新型冠状病毒和非典病毒的广谱抗体喷剂
本专利技术涉及特异性IgY及其制备方法，具体涉及一种用于新型冠状病毒和非典病毒的广谱抗体喷剂。
技术介绍
严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2，SARS-CoV-2)引起的急性冠状病毒病(coronaryvirusdisease2019，COVID-19)成为国际关注的突发公共卫生事件。SARS-CoV-2感染人数众多，传播性极强，病死率较高，急需寻求安全高效的特异药物治疗。治疗性抗体作为一种可以特异性识别抗原发挥体液免疫功能的生物制剂，具有功能强靶向性高的特点。SARS-CoV-2是单股正链RNA病毒，基因组全序列显示其与SARS-CoV结构相似性高达80％，受体结合域(Receptorbindingdomain,RBD)同源性达到73％，是SARS-CoV的姊妹病毒，但是也存在编码蛋白的差异如8a蛋白缺失等。单链RNA病毒具有高度变异性，因此研发可中和两种亚型病毒的广谱中和抗体成为研究的焦点。刺突蛋白(spikeprotein，S)是冠状病毒的表面结构蛋白，是病毒识别宿主细胞表面受体血管紧缩素转化酶2(angiotensin-convertingenzyme2，ACE2)的关键分子，在病毒入侵机体时起关键作用。S蛋白含有大量的抗原决定簇，可以诱导保护性抗体的产生。SARS康复病人的血清中普遍存在抗S蛋白的抗体。研究发现SARS-CoV抗体CR3022可以与SARS-CoV-2RBD有效结合，但另外一些抗体如m396、CR3014则不能，表明两种亚型之间S蛋白差异序列影响已有抗体的有效性，急需开发可以特异性中和两种亚型病毒的新型广谱治疗性抗体。新冠病毒感染人数众多，并且传播性极强，急需寻求安全高效、快速制备、成本低廉的抗病毒消毒制剂。针对冠状病毒的防治，各国批准上市的家用或医用消毒剂虽能有效杀灭新型冠状病毒，但口腔、鼻腔等吸入或服用等体内应用，尚缺乏特异性强、安全有效的产品。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术提供了解决上述问题的用于新型冠状病毒和非典病毒的广谱抗体喷剂。本专利技术通过下述技术方案实现：一种抗新型冠状病毒肺炎和非典型肺炎的复合IgY抗体，通过以下方法制备得：构建新型冠状病毒和非典型肺炎病毒的重组抗原；以重组抗原制备免疫制剂免疫产蛋禽类，从免疫禽蛋中获得的特异性复合IgY抗体。新型冠状病毒(SARS-CoV-2)和非典型肺炎病毒(SARS-CoV)结构相似性高达80％，但是也存在编码蛋白的差异。作为典型的单链RNA病毒，其可怕的变异性才最值得警惕，因此研发功能强大、靶向性高、可同时中和两种姊妹病毒的广谱治疗性抗体成为研究的焦点。卵黄抗体(immunoglobulinyolk，IgY)是指用特定的抗原免疫产蛋禽类后，从免疫禽蛋中获得的特异性抗体。本专利技术通过构建新型冠状病毒和非典型肺炎病毒的重组抗原；以重组抗原制备免疫制剂免疫产蛋禽类，从免疫禽蛋中获得的特异性复合IgY抗体，能够同时杀灭两种SARS-CoV-2和SARS-CoVS姊妹病毒。进一步地，所述复合抗原包括新型冠状病毒和非典型肺炎病毒重组S蛋白、或者新型冠状病毒和非典型肺炎病毒的S蛋白表位多肽。本专利技术可基于pcDNA6B-FLAG构建的SARS-CoV-2和SARS-CoV的重组S蛋白质粒，通过纯化两种S蛋白，或通过生物信息学筛选姊妹病毒的通用S抗原表位；将全长抗体进行小型化，开发表位抗体；利用复合S抗原，获得一种安全高效、快速制备、成本低廉、能够杀灭两种SARS-CoV-2和SARS-CoVS姊妹病毒的抗体。可通过如下具体步骤制备获得：步骤1，构建SARS-CoV-2和SARS-CoV重组S蛋白构建SARS-CoV-2、SARS-CoV重组S蛋白的pcDNA6B-FLAG质粒，转染HEK-293细胞，通过抗性筛选获得稳定表达株，扩大培养后裂解细胞，RT-PCR和免疫印迹鉴定，Flag吸附柱亲和层析纯化S蛋白，酶切去除FLAG标签。步骤2，生物信息学进行抗原表位筛选：应用生物信息学技术，分析两种病毒亚型筛选S蛋白的受体结合域(receptorbindingdomain,RBD)抗原表位，构建表位多肽，将合成的多肽与恢复期COVID-19病人血清进行交叉反应，筛选最佳抗原表位多肽。步骤3，制备特异性抗SARS-CoV-2和SARS-CoVS蛋白的IgY抗体利用IgY产生的原理，将重组S蛋白或抗原表位多肽作为抗原与弗氏佐剂乳化制备免疫制剂，采用多次多点双翅下肌肉注射的方式免疫产蛋来航鸡；收集免疫前一周及免疫后四个月内的鸡蛋；通过水稀释、饱和硫酸铵溶液沉淀及离心过滤器等纯化方法，获得纯净的IgY抗体，SDS-PAGE蛋白电泳检测IgY纯度，Westernblot法鉴定IgY的特异性；间接ELISA法检测鸡IgY各周期的效价变化；BCA法测定蛋白浓度。加速实验法37℃90天评价热稳定性。进一步地，新型冠状病毒的S全蛋白和非典型肺炎病毒的S全蛋白按照质量配比1:1混合作为重组抗原；或者新型冠状病毒和非典型肺炎病毒两者各自的S蛋白受体结合域的表位肽，按质量配比1:1比例混合为复合抗原表位肽作为重组抗原。上述的抗新型冠状病毒肺炎和非典型肺炎的复合IgY抗体在制备预防和治疗新型冠状病毒肺炎和非典型肺炎制剂中的应用。一种用于新型冠状病毒和非典病毒的广谱抗体喷剂，组分包含上述的抗新型冠状病毒肺炎和非典型肺炎的复合IgY抗体。本专利技术提供的用于新型冠状病毒和非典病毒的广谱抗体喷剂，能够同时适用于杀灭新型冠状病毒和非典型肺炎病毒两种病毒，是一种广谱杀灭两种病毒的喷剂；所述喷剂不依托全毒株为免疫原，降低灭活不彻底、散毒和病毒残存等风险；所述喷剂是一种可适用于鼻腔、口腔、皮肤等部位的复合生物消毒喷剂，弥补防控制剂缺乏的不足；所述抗体制剂有特异性中和病毒作用，能有效控制传染源、保护易感人群、一线医护人员消毒防护，预防新型冠状病毒传播。进一步地，所述抗新型冠状病毒肺炎和非典型肺炎的复合IgY抗体在喷剂中的效价≥1:32。本专利技术具有如下的优点和有益效果：SARS-CoV-2和SARS-CoV结构相似性高达80％，但是也存在编码蛋白的差异。作为典型的单链RNA病毒，其可怕的变异性才最值得警惕，因此研发功能强大、靶向性高、可同时中和两种姊妹病毒的广谱治疗性抗体成为研究的焦点。基于目前构建的SARS-CoV-2和SARS-CoV重组S蛋白、生物信息学筛选姊妹病毒的S抗原表位，研发并制备广谱杀灭两种病毒、适用于鼻腔、口腔、皮肤等部位的复合生物消毒喷剂，弥补防控制剂缺乏的不足。该抗体制剂有特异性中和病毒作用，能有效控制传染源、保护易感人群、一线医护人员消毒防护，预防新型冠状病毒传播；该喷剂不依托全毒株为免疫原，降低灭活不彻底、散毒和病毒残存等风险。本专利技术提供的抗新型冠状病毒肺炎和非典型肺炎的复合IgY本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗新型冠状病毒肺炎和非典型肺炎的复合IgY抗体，其特征在于，通过以下方法制备得：构建新型冠状病毒和非典型肺炎病毒的重组抗原；以重组抗原制备免疫制剂免疫产蛋禽类，从免疫禽蛋中获得的特异性复合IgY抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗新型冠状病毒肺炎和非典型肺炎的复合IgY抗体，其特征在于，通过以下方法制备得：构建新型冠状病毒和非典型肺炎病毒的重组抗原；以重组抗原制备免疫制剂免疫产蛋禽类，从免疫禽蛋中获得的特异性复合IgY抗体。


2.根据权利要求1所述的抗新型冠状病毒肺炎和非典型肺炎的复合IgY抗体，其特征在于，所述复合抗原包括新型冠状病毒和非典型肺炎病毒重组S蛋白、或者新型冠状病毒和非典型肺炎病毒的S蛋白表位多肽。


3.根据权利要求2所述的抗新型冠状病毒肺炎和非典型肺炎的复合IgY抗体，其特征在于，新型冠状病毒的S全蛋白和非典型肺炎病毒的S全蛋白按照质量配比1:1混合作为重组抗原；或...

【专利技术属性】
技术研发人员：李燕，沈鑫，卫韡，包丽荣，晏彩霞，张程，李佳，李明远，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51