【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程领域，尤其涉及一种耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体及其应用。
技术介绍
1、铜绿假单胞菌(pseudomonasaeruginosa，pa)是一种革兰阴性菌，在自然界中分布广泛，是医院感染常见的条件致病菌。在急性感染阶段，pa定植于宿主细胞，借助菌毛、鞭毛及营养物质在环境中成长，逃避宿主免疫攻击，细菌分散成为适应宿主环境的浮游高毒性表型；在慢性感染阶段，群体感应系统及其他调节系统调控生物膜形成，分泌大量胞外多糖，保护细菌免受免疫系统和抗生素的攻击。
2、pa的致病性来自于多功能代谢、大量毒力因子的产生、生物膜的形成和后天产生的一些适应性变异。pa的致病力受几个系统的调控，如群体感应系统、双组分系统、非编码rna等。其中，群体感应系统主要参与细菌生长、运动、鞭毛形成、分泌系统、生物被膜形成等。双组分系统也在识别外界环境的信号分子和感受环境变化中起重要作用。pa具备的一系列精密的调节系统，赋予了pa在不同环境压力下生存的能力，促进pa在宿主细胞的定植，给治疗带来了困难。此外，随着养鸡业规模的不断扩大，鸡铜绿假单胞菌病也不断增多，常见雏鸡发病，多为急性致死性败血症，死亡率可高达80％，给养鸡业带来了较大的危害。
3、目前，临床对疑似pa感染病例常采用经验性抗生素治疗方案，首选β-内酰胺类药物、氨曲南、多粘菌素及喹诺酮和氨基糖苷类药物，但由于pa多样性的抗生素耐药机制及治疗期间过度使用抗生素均加速了多重耐药菌株的发展，导致常规治疗无效。近些年，随着抗菌药物的大量使用，尤其在我国，抗生素作为饲料添加剂
4、噬菌体又称细菌病毒，是一种在细菌体内完成增殖，通过裂解细菌将自身释放到环境中的微生物。与抗生素治疗相比，噬菌体治疗具有代谢效率低、杀死细菌的最低剂量低、高度的特异性、高效的杀菌效果、筛选速度快等优势。
5、目前，噬菌体在实际生产应用过程种多采用口服的方式，噬菌体经过消化道时，胃酸等成分容易使噬菌体失活，可见已有的铜绿假单胞菌噬菌体的耐强酸或者强碱性能并不理想。因此，如何提供一种既可以替代抗生素使用，又能抵抗胃酸腐蚀，对宿主肠道疾病得到有效治疗的新型铜绿假单胞菌噬菌体是解决上述问题的关键所在。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有铜绿假单胞菌噬菌体在强酸或者强碱条件下容易失活的技术问题，提出一种耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，该噬菌体不仅可以替代抗生素使用，还能在强酸强碱条件下保持较高的活性，对宿主菌保持较高的裂解效果，使其能抵抗胃酸腐蚀，使宿主肠道疾病得到有效治疗；该噬菌体还能用于制备预防和/或治疗铜绿假单胞菌引起的疾病的生物制剂，生物制剂包括药物、饲料添加剂、杀菌剂、消毒剂或清洁剂等。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
3、一种耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，该噬菌体被命名为铜绿假单胞菌噬菌体rkp-pa-22003，保藏编号为cgmcc no.45368，于2022年10月31号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
4、在一实施方式中，所述耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的全基因组序列如seq idno.1所示。
5、在一实施方式中，当培养环境或生长环境的ph为2时，所述耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的效价大于108pfu·ml-1；当培养环境或生长环境的ph为13时，所述所述耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的效价大于107pfu·ml-1。
6、本专利技术列举了上述任一实施方式所述的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的用途，该噬菌体用于制备预防和/或治疗铜绿假单胞菌引起的疾病的生物制剂。
7、在一实施方式中，所述生物制剂包括药物、饲料添加剂、杀菌剂、消毒剂或清洁剂。
8、一种预防和/或治疗铜绿假单胞菌引起的疾病的药物，其有效成分包括上述任一实施方式列举的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体。
9、在一实施方式中，所述药物为以纯化后的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体制备的单一制剂或以纯化后的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体与其他有效成分搭配使用得到的复配制剂。
10、在一实施方式中，所述药物的给药方式为口服、肌肉注射或腹腔注射。
11、饲料添加剂，其特征在于，包括上述任一实施方式所列举的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，通过将其添加到畜禽动物饲料中，以预防和/或治疗由铜绿假单胞菌引发的疾病。
12、消毒剂或清洁剂，包括上述任一实施方式所列举的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，通过向畜禽动物养殖环境中喷洒所述消毒剂或清洁剂，对包含铜绿假单胞菌的动物粪便、动物尸体、养殖环境地面、水源、水槽、料槽以及笼具进行消毒处理，防治所述铜绿假单胞菌的污染；
13、其中，所述消毒剂或清洁剂的剂型为水剂、片剂或冻干粉。
14、与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果在于：
15、1、本专利技术提出一种耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，该噬菌体不仅可以替代抗生素使用，还能在强酸强碱条件下保持较高的活性，对宿主菌保持较高的裂解效果，使其能抵抗胃酸腐蚀，使宿主肠道疾病得到有效治疗，同时该噬菌体对环境友好；
16、2、本专利技术提出一种耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，该噬菌体连续传代30次，始终保持较高的效价，没有出现明显波动，该噬菌体可以稳定遗传；同时，该噬菌体对病原菌具有较强的裂解效果以及较宽的裂解谱；
17、3、本专利技术提出一种耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体能够用于制备预防和/或治疗铜绿假单胞菌引起的疾病的生物制剂，生物制剂包括药物、饲料添加剂、杀菌剂、消毒剂或清洁剂等。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，其特征在于，所述耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体被命名为RKP-PA-22003，保藏编号为CGMCC No.45368，于2022年10月31号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
2.根据权利要求1所述的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，其特征在于，所述耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的全基因组序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，其特征在于，当培养环境或生长环境的pH为2时，所述耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的效价大于108pfu·mL-1；当培养环境或生长环境的pH为13时，所述所述耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的效价大于107pfu·mL-1。
4.根据权利要求1所述的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的用途，其特征在于，该噬菌体用于制备预防和/或治疗铜绿假单胞菌引起的疾病的生物制剂。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述生物制剂包括药物、饲料添加剂、杀菌剂、消毒剂或清洁剂。
6.一种预防和/或治疗铜绿假单胞菌引起的疾病的药物，其特征在于，其有效成分包
7.根据权利要求6所述的预防和/或治疗铜绿假单胞菌引起的疾病的药物，其特征在于，所述药物为以纯化后的如权利要求1～3中任意一项所述的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体制备的单一制剂或以纯化后的如权利要求1～3中任意一项所述的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体与其他有效成分搭配使用得到的复配制剂。
8.根据权利要求6所述的预防和/或治疗铜绿假单胞菌引起的疾病的药物，其特征在于，所述药物的给药方式为口服、肌肉注射或腹腔注射。
9.饲料添加剂，其特征在于，包括如权利要求1～3中任意一项所述的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，通过将其添加到畜禽动物饲料中，以预防和/或治疗由铜绿假单胞菌引发的疾病。
10.消毒剂或清洁剂，其特征在于，包括如权利要求1～3中任意一项所述的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，通过向畜禽动物养殖环境中喷洒所述消毒剂或清洁剂，对包含铜绿假单胞菌的动物粪便、动物尸体、养殖环境地面、水源、水槽、料槽以及笼具进行消毒处理，防治所述铜绿假单胞菌的污染；
...【技术特征摘要】
1.一种耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，其特征在于，所述耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体被命名为rkp-pa-22003，保藏编号为cgmcc no.45368，于2022年10月31号保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
2.根据权利要求1所述的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，其特征在于，所述耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的全基因组序列如seq id no.1所示。
3.根据权利要求1所述的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体，其特征在于，当培养环境或生长环境的ph为2时，所述耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的效价大于108pfu·ml-1；当培养环境或生长环境的ph为13时，所述所述耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的效价大于107pfu·ml-1。
4.根据权利要求1所述的耐酸碱铜绿假单胞菌噬菌体的用途，其特征在于，该噬菌体用于制备预防和/或治疗铜绿假单胞菌引起的疾病的生物制剂。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述生物制剂包括药物、饲料添加剂、杀菌剂、消毒剂或清洁剂。
6.一种预防和/或治疗铜绿假单胞菌引起的疾病的药物，...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜新永，刘军伟，王立坤，李爽，刘雨，
申请(专利权)人：青岛润达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。