【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别涉及一种高效筛选抑制支原体药物的方法。
技术介绍
1、鸡毒支原体可引发鸡慢性呼吸道病，该病发生后可抑制鸡的生长，降低饲料的转化率，此外，鸡毒支原体病还可降低蛋鸡的产蛋率和种蛋的孵化率，增加弱雏所占的比重，从而导致养鸡业严重的经济损失。因此找到能够抑制支原体的药物变得特别重要，但是因为鸡毒支原体是一种特殊的微生物，其固体培养很困难，即使生长，其菌落也需要借助导致显微镜才能看清楚。另外，鸡毒支原体的液体培养物是完全透明的，要靠其生长过程中的代谢产物改变液休培养基的ph值,并通过培养基中指示剂的颜色变化来判新支原体的生长情况，由此导致抑制鸡毒支原体生长的药物筛选存在诸多困难。
2、现有技术中是通过在鸡毒支原体培养基中添加指示剂，支原体生长过程中产生代谢产物，从而导致溶液中ph变化，因此在肉眼观察时通过观察指示剂颜色的变化来判断其生长情况，但是此种方法并不够准确，通常依赖于实验人员的经验判断，人为主观性强，误差大且不方便，不能够满足科研需要。
3、ph计测定方法虽准确，但是每个样品采用ph计测定耗时长，效率过低，不能满足研发实验和生产中的需要。而酶标仪应用广泛，只是现有技术中没有将其应用至此，因为现有技术的指示剂酚红在酶标仪的测定过程中灵敏度弱，导致测定数据不稳定，不能够满足酶标仪测定的需要。
4、因此，现有技术需要进一步的改进。
技术实现思路
1、本专利技术旨在解决上述现有技术中存在的问题，提供了一种高效筛选抑制支原体药物的方法
2、具体的，本申请提供的技术方案如下：
3、第一方面，本专利技术提供了一种高效筛选抑制支原体药物的方法，方法步骤如下：
4、s1：支原体培养液体培养基配制：称取/量取如下成分：nac1：5.0g、kc1：0.4g、mgso4·7h20：0.2g、na2hpo4·h20：1.6g、kh2po4：0.2g、葡萄糖：10g、乳蛋白水解物：5g、酵母粉：5g、显色指示剂15-20mg；加水至1000ml用1.0％mol/l的naoh调ph值至7.6～7.8，115℃灭菌30min；然后加1％半胱氨酸溶液：10ml、2％精氨酸溶液：20ml马血清：100ml，用无菌滤膜0.22μm过滤加入，获得液体培养基，备用；
5、s2：采用s1所得液体培养基进行药物抑制支原体最小浓度筛选；
6、s3：测定药物抑制支原体最小浓度，得到该药物的最小用量浓度。
7、进一步的，所述s1中液体培养基的显色指示剂为酚红、石蕊中的一种或两种。
8、进一步的，显色指示剂用量：酚红10-15mg/l，石蕊为0.5-2mg/l。优选的，显色指示剂组合，酚红15mg/l、石蕊1mg/l。
9、优选的，所述s1中液体培养基的显色指示剂为酚红和石蕊的组合，质量比为15:1。
10、进一步的，所述s2中的药物包括抗生素类与非抗生素类。
11、优选的，所述抗生素类药物为泰乐菌素，所述非抗生素类药物为抗菌肽。
12、进一步的，所述s3中测定的方法包括：肉眼观察法、ph测定法、酶标仪法、荧光定量pcr法。
13、具体的，所述酶标仪法在566nm下测定其吸收值大小。
14、具体的，所述荧光定量pcr法中鸡毒支原体的引物设计如下：
15、mg-pvpa-f：caaccacgtcctcaacaagct；
16、mg-pvpa-r：catgggtcttggttggttagatc；
17、探针设计如下：mg-pvpa-probe：cacgtccaatgggag。
18、基于同一个专利技术创造，本专利技术还提供了如第一方面中任一方法在筛选鸡毒支原体药物中的应用。
19、本专利技术具有如下优点/有益效果：
20、1、本专利技术选用酶标仪测定法，相较于现有技术中的肉眼观察法和ph计测定法，更为方便快捷，且数据更为准确，能够精准的判断出正确数据；
21、2、本专利技术通过更换液体培养基中的显色指示剂，克服了现有技术中酚红在酶标仪中灵敏度低下导致数据不准确无法使用的情况；进一步提升了显色指示剂的灵敏度；
22、3、本专利技术通过实时荧光定量pcr法和ph计测定法进一步验证了上述显示指示剂和酶标仪法的可行性；
23、4、本专利技术通过实验得到泰乐菌素和抗菌肽在抑制鸡毒支原体中的应用；
24、5、本专利技术的方法应用简单便捷适合大范围使用，在今后筛选支原体药物过程中意义深远。
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1.一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，方法步骤如下：
2.根据权利要求1所述的一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，所述S1中液体培养基的显色指示剂为酚红、石蕊中的一种或两种。
3.根据权利要求2所述的一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，所述显色指示剂用量：酚红10-15mg/L，石蕊为0.5-2mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，所述S1中液体培养基的显色指示剂为酚红和石蕊的组合，质量比为15:1。
5.根据权利要求1所述的一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，所述S2中的药物包括抗生素类与非抗生素类。
6.根据权利要求5所述的一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，所述抗生素类药物为泰乐菌素，所述非抗生素类药物为抗菌肽。
7.根据权利要求1所述的一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，所述S3中测定的方法包括：肉眼观察法、pH测定法、酶标仪法、荧光定量PCR法。
8.根据权利要求7所述的一种高效筛选
9.根据权利要求7所述的一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR法中鸡毒支原体的引物设计如下：
10.如权利要求1-9中任一方法在筛选鸡毒支原体药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，方法步骤如下：
2.根据权利要求1所述的一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，所述s1中液体培养基的显色指示剂为酚红、石蕊中的一种或两种。
3.根据权利要求2所述的一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，所述显色指示剂用量：酚红10-15mg/l，石蕊为0.5-2mg/l。
4.根据权利要求1所述的一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，所述s1中液体培养基的显色指示剂为酚红和石蕊的组合，质量比为15:1。
5.根据权利要求1所述的一种高效筛选抑制支原体药物的方法，其特征在于，所述s2中的药物包括抗生素类与非抗生素类...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜新永，刘长太，罗成盛，李欣，裴中鲜，
申请(专利权)人：青岛润达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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