【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及杂交瘤细胞株1e5及其分泌的单克隆抗体和应用。
技术介绍
1、罗非鱼又称非洲鲫鱼，属于硬骨鱼纲，具有食性广、生长快、病害少、繁殖快等特点，我国已发展为罗非鱼养殖、消费、贸易大国。随着养殖规模不断扩大和养殖密度不断提高，各种疾病频发。其中危害最大是细菌性疾病，细菌性疾病以无乳链球菌为首要病原，严重影响着罗非鱼养殖业的发展。
2、免疫球蛋白是生物体免疫应答的标志物，硬骨鱼免疫球蛋白分为igm、igd、igt。其中igm是鱼类特异性免疫最主要介质，建立血清中igm抗体检测的方法，不仅有助于研究鱼类免疫应答规律，还能在疾病诊断与预防具有重要意义。目前针对罗非鱼igm单克隆抗体都是基于分离血清中的igm制备，存在抗体针对位点不明确的特点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决现有技术存在的上述问题，提供杂交瘤细胞株1e5及其分泌的单克隆抗体和应用，利用杂交瘤细胞株1e5分泌的单克隆抗体，通过条件优化，建立的elisa检测方法具有良好的特异性、敏感性，对罗非鱼免疫应答和疾病检测具有重要意义。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供杂交瘤细胞株1e5，该杂交瘤细胞株的保藏编号为cctccno：c2023389。
4、第二方面，本专利技术提供一种罗非鱼igm单克隆抗体，所述罗非鱼igm单克隆抗体由所述的杂交瘤细胞株1e5分泌产生。
5、进一步的，所述罗非鱼igm重
6、进一步的，所述罗非鱼igm单克隆抗体重链为igg1型，轻链为kappa型。
7、进一步的，所述罗非鱼igm重链恒定区ch3～ch4的上游引物序列为igm-f，如seqid no.3所示，所述罗非鱼igm重链恒定区ch3～ch4的下游引物序列为igm-r，如seq idno.4所示。
8、第三方面，本专利技术提供所述的罗非鱼igm单克隆抗体在制备罗非鱼无乳链球菌血清检测试剂及试剂盒中的应用。
9、第四方面，本专利技术提供一种罗非鱼无乳链球菌血清间接elisa检测方法，包括如下步骤：
10、(1)在酶标板包被无乳链球菌gap重组蛋白；
11、(2)封闭结束加入待测罗非鱼血清孵育；
12、(3)洗板后以所述罗非鱼igm单克隆抗体为一抗孵育；
13、(4)洗板后加羊抗鼠酶标抗体为二抗孵育；
14、(5)加显色液，测od450值。
15、进一步的，所述检测方法的反应条件为：无乳链球菌gap重组蛋白包被浓度为15ug/ml，待测罗非鱼血清稀释度为1：10，罗非鱼igm单克隆抗体稀释浓度为1：1 500，羊抗鼠酶标抗体稀释浓度为1：5 000。
16、生物材料保藏信息说明：本专利技术所述的杂交瘤细胞株1e5 hybridoma cell line1e5，保藏号为cctcc no：c2023389，已于2023年12月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。
17、本专利技术的有益效果：
18、本专利技术公开了罗非鱼igm单克隆抗体并运用该抗体建立检测罗非鱼无乳链球菌血清的elisa方法，所述单抗由杂交瘤细胞株1e5分泌获得，该单克隆抗体能特异性识别罗非鱼血清中大小约为75kda特异性条带。通过条件优化，建立的elisa检测方法具有良好的特异性、敏感性，对罗非鱼免疫应答和疾病检测具有重要意义。另外，本专利技术是基于罗非鱼igm重链基因表达的重组蛋白制备的单克隆抗体，能够很好替代从血清中分离igm，解决传统方法制备单抗存在抗体针对位点不明确的的问题。
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1.杂交瘤细胞株1E5，其特征在于：该杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO：C2023389。
2.一种罗非鱼IgM单克隆抗体，其特征在于：所述罗非鱼IgM单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株1E5分泌产生。
3.如权利要求2所述的罗非鱼IgM单克隆抗体，其特征在于：所述罗非鱼IgM重链恒定区CH3～CH4基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述罗非鱼IgM重链恒定区CH3～CH4氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.如权利要求2所述的罗非鱼IgM单克隆抗体，其特征在于：所述罗非鱼IgM重链恒定区CH3～CH4的上游引物序列为IgM-F，如SEQ ID NO.3所示；所述罗非鱼IgM重链恒定区CH3～CH4的下游引物序列为IgM-R，如SEQ ID NO.4所示。
5.如权利要求2所述的罗非鱼IgM单克隆抗体，其特征在于：所述罗非鱼IgM单克隆抗体重链为IgG1型，轻链为Kappa型。
6.权利要求2所述的罗非鱼IgM单克隆抗体在制备罗非鱼无乳链球菌血清检测试剂中的应用。
7.权利要求2所述
8.一种罗非鱼无乳链球菌血清间接ELISA检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
9.如权利要求8所述的罗非鱼无乳链球菌血清间接ELISA检测方法，其特征在于：所述检测方法的反应条件为：无乳链球菌gap重组蛋白包被浓度为15ug/mL，待测罗非鱼血清稀释度为1：10，罗非鱼IgM单克隆抗体稀释浓度为1：1 500，羊抗鼠酶标抗体稀释浓度为1：5000。
...【技术特征摘要】
1.杂交瘤细胞株1e5，其特征在于：该杂交瘤细胞株的保藏编号为cctcc no：c2023389。
2.一种罗非鱼igm单克隆抗体，其特征在于：所述罗非鱼igm单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株1e5分泌产生。
3.如权利要求2所述的罗非鱼igm单克隆抗体，其特征在于：所述罗非鱼igm重链恒定区ch3～ch4基因序列如seq id no.1所示，所述罗非鱼igm重链恒定区ch3～ch4氨基酸序列如seq id no.2所示。
4.如权利要求2所述的罗非鱼igm单克隆抗体，其特征在于：所述罗非鱼igm重链恒定区ch3～ch4的上游引物序列为igm-f，如seq id no.3所示；所述罗非鱼igm重链恒定区ch3～ch4的下游引物序列为igm-r，如seq id no.4所...
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