一种制备(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇的方法技术

本发明专利技术提供了一种制备(S)‑2‑氯‑1‑(3,4‑二氟苯基)乙醇的方法，包括如下步骤：使用固定化载体LX‑1000ODS或者LXES‑J420将酮基还原酶KRED固定化，得到固定化酶；用固定化酶催化2‑氯‑1‑(3,4‑二氟苯基)乙酮进行还原反应，得到目标化合物。本发明专利技术方法的能够高效、稳定地催化式底物反应生成高光学纯度的产物，适合于工业化应用。

【技术实现步骤摘要】
一种制备(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇的方法
本专利技术属于生物催化
，具体地说，涉及一种制备(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇的方法。
技术介绍
替格瑞洛，曾用名替卡格雷，是英国阿斯利康(AstraZeneca)公司开发的一种新型具有选择性抗凝血药，是首个可逆的结合型P2Y12腺苷二磷酸受体(ADP)拮抗剂。替格瑞洛与氯吡格雷相比，具有明显降低患者心肌梗塞、卒中或者心血管死亡症状的优点。2011年美国FDA批准上市，在全球85个国家得到批准，被列入29个国家的医疗保险目录，进入31个国家病人自付目录，具有广阔的市场前景。目前通常采用化学方法合成替格瑞洛，已有专利公开了多种替格瑞洛的合成工艺路线。在美国专利US7250419公开的替格瑞洛合成路线中，式II所示化合物(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇是关键中间体之一，具有较高的经济价值。EP2589587A1报道了另一条路线是采用CBS催化剂，BH3还原得到手性氯醇II，但ee值仅在90-93％，产品需要精制来提高ee值且成本较高。专利文献CN109112166A报道了一种具有高效催化活性的酮还原酶(KRED)以及使用该游离酶催化式II所示化合物2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮制备化合物II的方法，ee值可＞99％。酮还原酶价格昂贵，游离酶只能一次性使用，无法回收再利用，这就导致化合物I经酮不对称还原反应制备化合物II的原料成本较高，成为工业化应用的障碍。
技术实现思路
<br>为了克服现有技术的酶法制备化合物II经济性差的缺陷，专利技术人对于酮还原酶KRED的固定化技术进行了研究。发现特定的固定化酶能够高效且稳定地催化化合物I的不对称还原反应，降低化合物II的生产成本。具体而言，本专利技术包括如下技术方案。一种制备(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇的方法，包括如下步骤：A.使用固定化载体LX-1000ODS或者LXES-J420将酮基还原酶KRED固定化，得到固定化酶；B.使用步骤A中得到的固定化酶催化式I所示化合物2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮进行还原反应，得到作为替格瑞洛中间体之一的式II所示化合物(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇：优选地，上述固定化载体是LX-1000ODS。在一种优选的实施方式中，上述酮基还原酶来源于开菲尔乳杆菌(Lactobacilluskefiri)，氨基酸序列为SEQIDNO:1：MTDRLKGKVAIVTGGTLGIGLAIADKFVEEGAKVVITGRRADVGERAAKSIGGTDVIRFVQHDASDEAGWTKLFDTTEEAFGPVTTVVNNAGIGVVKSVEDTTTEEWRKLLSVNLDGVFFGTRLGIQRMKNKGLGASIINMSSIFGMVGDPTVGAYNASKGAVRIMSKSAALDCALKDYDVRVNTVHPGPIKTPMLDDVEGAEEMWSQRTKTPMGHIGEPNDIAWVCVYLASGESKFATGAEFVIDGGWTAQ(SEQIDNO:1)。上述酮基还原酶SEQIDNO:1可以通过微生物表达得到。上述酮基还原酶SEQIDNO:1的表达基因优选是SEQIDNO:2：ATGACTGATCGTTTAAAAGGCAAAGTAGCAATTGTAACTGGCGGTACCTTGGGAATTGGCTTGGCAATCGCTGATAAGTTTGTTGAAGAAGGCGCAAAGGTTGTTATTACCGGCCGTCGGGCTGATGTAGGTGAACGGGCTGCCAAATCAATCGGCGGCACAGACGTTATCCGTTTTGTCCAACACGATGCTTCTGATGAAGCCGGCTGGACTAAGTTGTTTGATACGACTGAAGAAGCATTTGGCCCAGTTACCACGGTTGTCAACAATGCCGGAATTGGGGTCGTAAAGAGTGTTGAAGATACCACAACTGAAGAATGGCGCAAGCTGCTCTCAGTTAACTTGGATGGTGTCTTCTTCGGTACCCGTCTTGGAATCCAACGTATGAAGAATAAAGGACTCGGAGCATCAATCATCAATATGTCATCTATCTTCGGTATGGTTGGTGATCCAACTGTGGGTGCATACAACGCTTCAAAAGGTGCTGTCAGAATTATGTCTAAATCAGCTGCCTTGGATTGCGCTTTGAAGGACTACGATGTTCGGGTTAACACTGTTCATCCAGGTCCTATCAAGACACCAATGCTTGACGATGTTGAAGGGGCAGAAGAAATGTGGTCACAGCGGACCAAGACACCAATGGGTCATATCGGTGAACCTAACGATATCGCTTGGGTCTGTGTTTACCTGGCATCTGGCGAATCTAAATTTGCCACTGGTGCAGAATTCGTTATCGATGGTGGATGGACTGCTCAATAA(SEQIDNO:2)。优选地，上述微生物是大肠杆菌。一种实施方式中，上述步骤A为：将发酵后的微生物菌体离心，破壁，离心，取上清得粗酶液，在磷酸盐缓冲液中与固定化载体混合、吸附，得到固定化酶。上述步骤B的反应体系为pH7.5-8.5的磷酸盐缓冲液，优选pH7.8-8.2，更优选pH8.0左右。上述步骤B的反应温度为30-45℃。优选35-42℃，更优选37-40℃。优选地，上述反应体系中可以添加有异丙醇和辅酶NADP+。NADP+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，辅酶II)的作用是，作为氧化剂掠夺电子，酮基还原酶利用异丙醇将NADP+还原为NADPH，产生充足的NADPH作为生物合成的还原剂，从而促进还原反应。本专利技术提供的固定化酮基还原酶能够高活性催化式底物I发生不对称还原反应，产生高光学纯度的替格瑞洛中间体II，具有稳定性好、成本低的优点，有利于实现工业化生产。具体实施方式酶的固定化是用物理或化学手段，将游离酶封锁在固体材料上、或限制在一定区域内，酶仍然可以发挥催化作用，并可循环使用。经固定化的酶与游离酶相比具有稳定性高、回收方便、易于控制、可反复使用、成本低廉等优点，在生物工业、医学及临床诊断、化学分析、环境保护、能源开发以及基础研究等方面发挥了重要作用。生物催化领域公知，与游离酶法相比，应用固定化酶技术具有生产过程简化、生产效率提高等优点。同时，由于酶可多次使用，且酶的稳定性提高，从而有效提高了单位酶的生产力；其次，固定化酶极易与底物、产物分开，简化了提纯工艺，产率较高，产品质量较好。但是，酶的固定化也有不少缺点，固定化时酶活力通常会有损失，而且催化反应产物的手性纯度有时也会发生变化，往往难于保证高的手性纯度。专利技术人在研究酮还原酶KRED的固定化时，尝试了多种类型的固定化方法，包括吸附法、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇的方法，包括如下步骤：/nA.使用固定化载体LX-1000ODS或者LXES-J420将酮基还原酶KRED固定化，得到固定化酶；/nB.使用步骤A中得到的固定化酶催化式I所示化合物2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮进行还原反应，得到式II所示化合物(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇：/n

【技术特征摘要】
1.一种制备(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇的方法，包括如下步骤：
A.使用固定化载体LX-1000ODS或者LXES-J420将酮基还原酶KRED固定化，得到固定化酶；
B.使用步骤A中得到的固定化酶催化式I所示化合物2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮进行还原反应，得到式II所示化合物(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇：





2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定化载体是LX-1000ODS。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述酮基还原酶的氨基酸序列为SEQIDNO:1。


4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述酮基还原酶SEQIDNO:1由微生物表达得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶荣盛，潘震华，朱傅赟，原犇犇，沈正权，孙梁栋，沈青，郑云，胡海亮，
申请(专利权)人：湖州颐盛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33