【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于改善的免疫细胞疗法的NK抑制剂基因的靶向基因整合
本专利技术属于适应性细胞免疫疗法领域。它旨在增强原代免疫细胞针对发展免疫抗性的病症(如肿瘤)的功能，从而改善这些免疫细胞的治疗潜力。具体地，本专利技术的方法提供了编码NK抑制剂的外源编码序列的遗传插入以防止来自患者NK细胞攻击的同种异体T细胞排斥并且有利于所述T细胞的移植，特别是当它们来源于供体时。更具体地，这些外源编码序列插入到受通过免疫细胞激活，通过肿瘤微环境或者危急生命的炎症性病况上调的内源基因启动子或者对免疫细胞激活不敏感的启动子转录控制的细胞基因组中，更具体地在β2m基因座插入。本专利技术还提供了序列特异性核酸内切酶试剂和供体DNA载体，如AAV载体，以实施在所述具体基因座的这类靶向插入。本专利技术的方法有助于改善工程化原代免疫细胞的治疗潜力和安全性以便有效地用于细胞疗法中。
技术介绍
十多年来，通过针对一系列病症(特别是HIV感染和白血病)的许多临床试验，已建立了包括造血细胞谱系在内的原代免疫细胞群的有效临床应用(TristenS.J.等人(2011)TreatingcancerwithgeneticallyengineeredTcells.TrendsinBiotechnology.29(11):550-557)。然而，这些临床试验的大多数都使用了从患者本身或从相容供体获得的免疫细胞，主要是NK和T细胞，这对可用免疫细胞的数量、它们的适应性以及它们克服已经出现了绕过或减少患者免疫系统的策略的疾病的效率带来了一些限制。作为获得同种异体免...
【技术保护点】
1.用于制备用于细胞免疫疗法的工程化原代免疫细胞的方法，所述方法包括：/n–提供包含T细胞的细胞群；/n–向所述T细胞的一部分中引入：/ni)至少一种核酸，其包含待整合在选定内源基因座上的外源多核苷酸序列，以编码至少一种NK细胞抑制剂；/nii)特异性靶向所述选定内源基因座的至少一种序列特异性试剂，/n其中通过靶向基因整合将所述外源多核苷酸序列插入所述内源基因座。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171019 EP PCT/EP2017/076798;20180209 EP PCT/EP201.用于制备用于细胞免疫疗法的工程化原代免疫细胞的方法，所述方法包括：
–提供包含T细胞的细胞群；
–向所述T细胞的一部分中引入：
i)至少一种核酸，其包含待整合在选定内源基因座上的外源多核苷酸序列，以编码至少一种NK细胞抑制剂；
ii)特异性靶向所述选定内源基因座的至少一种序列特异性试剂，
其中通过靶向基因整合将所述外源多核苷酸序列插入所述内源基因座。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述序列特异性试剂是核酸酶。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中通过同源重组或NHEJ至所述免疫细胞内操作所述靶向基因整合。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中将所述外源多核苷酸序列整合至在所述基因座处存在的内源启动子的转录控制下。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述内源基因座是表达MHCI组分如β2m的基因座。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述外源序列的所述插入使所述内源基因座处的β2m表达失活。
7.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中选择所述内源启动子以在免疫细胞活化期间具有活性。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述内源基因座处的所述内源启动子对T细胞活化起反应，如选自表6的一种。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述T细胞被赋予有嵌合抗原受体(CAR)。
10.根据权利要求9所述的方法，其中编码所述嵌合抗原受体(CAR)的外源序列已在TCR基因座处整合。
11.根据权利要求10所述的方法，其中编码所述嵌合抗原受体(CAR)的所述外源序列防止所述内源TCR序列的表达。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述内源基因座处的所述内源启动子的活性通过所述嵌合抗原受体(CAR)对所述T细胞活化起反应。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述特异性核酸内切酶试剂选自RNA或DNA引导的核酸内切酶，如Cas9或Cpf1、RNA或DNA向导、TAL核酸内切酶、锌指核酸酶、归巢核酸内切酶或它们的任意组合。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述编码NK抑制剂的外源序列优选包含编码非多态性I类分子的序列，如HLA-G或HLA-E或其包含其重链表位的片段。
15.根据权利要求5至14中任一项所述的方法，其中当在β2m内源基因座处整合时，所述外源序列导致HLA-E或HLA-G或其片段与β2m片段的融合体的表达。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述HLA-E或HLA-G或其片段与β2m片段的融合体导致HLA-E或HLA-G的二聚体或三聚体的表达。
17.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述编码NK抑制剂的外源序列优选包含编码病毒逃避素或包含其表位的片段的序列，如来自UL16(也称为ULBP1-Uniprotref.:#Q9BZM6)的片段。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述T细胞是原代细胞，优选是人原代T细胞。
19.通过根据权利要求1至18中任一项所述的方法可获得的...
【专利技术属性】
技术研发人员：布莱恩·布瑟尔，菲利普·杜沙托，亚历山大·朱耶拉特，劳伦特·普瓦罗，朱利安·瓦尔顿，
申请(专利权)人：塞勒克提斯公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR
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