造血祖细胞标志物制造技术

本发明专利技术提供了用于制备CD4/CD8双阳性细胞的方法，包括以下步骤：步骤1：从含有造血祖细胞的细胞群中分离出表达选自由CD24、CD62L、CD90、CD143、CD263、Notch3、CD32、CD39、CD49a、CD164、CD317、CD200和CD218a构成的组中的一种或多种分子的细胞，和/或不表达选自由CD49f、CD51、CD102、CD42b、CD61、CD62P、CD69、CD102和CD156c构成的第二组中的一种或多种分子的细胞，和步骤2：将步骤1中分离的细胞分化成CD4/CD8双阳性细胞。

Hematopoietic progenitor cell marker

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】造血祖细胞标志物
本专利技术涉及使用一种或多种造血祖细胞标志物(HPC标志物)制备CD8阳性细胞的方法，以及表达所述一种或多种HPC标志物的细胞群等。
技术介绍
T细胞在抵挡诸如细菌、病毒等外源病原体和诸如癌细胞等异常细胞的免疫系统中发挥关键性作用。尤其是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，通过其细胞表面存在的T细胞受体(TCR)识别来自病毒、肿瘤等的抗原肽，并与抗原呈递细胞的I型主要组织相容性抗原共同呈递，特异地针对将所述抗原肽作为外源物质展示的细胞产生细胞毒活性。大部分CTL是CD8单阳性(SP)的细胞。已知上述CD8SP细胞是在胸腺中，从不表达TCR且没有CD4或CD8(CD4/CD8双阴性(在本说明书中，有时用DN表示双阴性)细胞)的未成熟细胞经表达CD8和CD4的细胞(CD4/CD8双阳性(在本说明书中，有时用DP表示双阳性)细胞)分化而成的。如上文所述，由于T细胞在免疫细胞中发挥关键性作用，因此，如果能够补充或再生T细胞，对于预防或治疗诸如肿瘤、感染、自身免疫功能障碍等疾病就是非常有效的手段。因此，已经在尝试通过从iPS细胞诱导造血祖细胞(在本说明书中有时被称为HPC)的方法，进一步诱导CD4/CD8DP细胞的方法等，来获得造血祖细胞和T细胞系细胞。例如，非专利文献1描述了可以通过共培养iPS细胞和饲养层细胞(尤其是OP9细胞)来诱导CD34/CD43DP细胞。专利文献1和非专利文献2描述了利用CD43和CD34、CD31或CD144的表达作为指标，从含有自人多能干细胞诱导的HPC的细胞群分离HPC的方法，用于将分离的细胞分化成T细胞系细胞的方法，还描述了当将多能干细胞分化成HPC时，所诱导的血系细胞的特性取决于Activin/Nodal在诱导的早期阶段是否发挥作用。专利文献2描述了在无饲养层的条件下制备CD4/CD8DP的方法。此外，非专利文献3教导了诱导造血祖细胞(包括来自人多能干细胞的造血祖细胞)的多种方法，并提到低诱导效率是体外诱导的血液细胞在临床应用中受阻的理由之一。文献列表专利文献专利文献1：WO2013/075222专利文献2：WO2017/221975非专利文献非专利文献1：ChoiK.D.等人，StemCells，27(2009)；559-567非专利文献2：KennedyM.等人，CellReports，2(2012)；1722-1735非专利文献3：LiuS.等人，Cytotherapy，17(2015)；344-358
技术实现思路
专利技术要解决的课题本专利技术的目的是获得更多的T细胞系细胞(例如，CD8阳性细胞(例如CD4/CD8DP细胞、CD8SP细胞))和/或以更高浓度获得它们(即，提供所述细胞的制备方法)以稳定提供细胞治疗。此外，本专利技术的目的还包括提供用于解决上述课题的含有造血祖细胞的细胞群。用于解决课题的技术手段为了研究出解决上述问题的制备CD4/CD8DP细胞的方法，本申请的专利技术人鉴定了在HPC表面表达的标志物(HPC标志物)。本申请的专利技术人进一步地发现，使用一种或多种所述标志物从含有HPC的细胞群中分离的HPC显示出向CD8阳性细胞(例如，CD4/CD8DP细胞)的高分化效率和高增殖能力，也就是说，通过使用一种或多种上述HPC标志物，能够获得更多CD8阳性细胞，和/或能够在细胞群中获得更高浓度的CD8阳性细胞。此外还发现，通过本专利技术的制备方法，收率变化较小，能够稳定地提供CD8阳性细胞，从而完成了本专利技术。即，本专利技术提供了下述方案。[1]用于制备CD4/CD8双阳性细胞的方法，所述方法包括以下步骤：步骤1：从含有造血祖细胞的细胞群中分离出表达选自由CD24、CD62L、CD90、CD143、CD263、Notch3、CD32、CD39、CD49a、CD164、CD317、CD200、CD218a、CD7、CD144、CD56、CD226、CD262和CD325组成的第一组中的一种或多种分子的细胞，和/或不表达选自由CD49f、CD51、CD102、CD42b、CD61、CD62P、CD69、CD102和CD156c组成的第二组中的一种或多种分子的细胞，和步骤2：将步骤1中分离的细胞分化成CD4/CD8双阳性细胞。[2]根据[1]所述的方法，其中，所述步骤1中选出的细胞不表达CD235a或CD14，但表达CD45、CD34和CD43。[3]根据[1]或[2]所述的方法，其中，所述步骤1是从含有造血祖细胞的细胞群中分离出表达选自由CD24、CD62L、CD90、CD143、CD263、Notch3、CD32、CD39、CD49a、CD164、CD317、CD200、CD218a、CD7、CD144、CD56、CD226、CD262和CD325组成的第一组中的一种或多种分子的细胞的步骤。[4]根据[3]所述的方法，其中，所述步骤1中，第一组由CD24、CD62L、CD90、CD143、CD263、Notch3、CD200、CD218a、CD7和CD144组成。[5]根据[1]或[2]所述的方法，其中，所述步骤1是从包含造血祖细胞的细胞群中分离出不表达选自CD49f、CD51、CD102、CD42b、CD61、CD62P、CD69、CD102和CD156c组成的第二组中的一种或多种分子的细胞的步骤。[6]根据[5]所述的方法，其中，所述步骤1中，第二组由CD49f、CD51和CD102组成。[7]根据[1]-[6]中任一项所述的方法，其中，所述步骤1中，含有造血祖细胞的细胞群是通过分化诱导多能干细胞获得的。[8]根据[7]所述的方法，其中，所述多能干细胞是人的诱导性多能干细胞。[9-1]制备CD8单阳性细胞的方法，所述方法包括将通过[1]-[8]中任一项所述的方法获得的CD4/CD8双阳性细胞诱导为CD8单阳性细胞的步骤。[9-2]根据[9-1]所述的方法，其中，所述诱导步骤例如包括在存在肾上腺皮质激素、抗体和/或细胞因子时培养CD4/CD8双阳性细胞，优选地，所述肾上腺皮质激素是地塞米松，和/或所述抗体是抗CD3抗体，和/或所述细胞因子是IL-2。[10]根据[9-1]或[9-2]所述的方法，其中，所述CD8单阳性细胞是细胞毒性T淋巴细胞。[11]一种细胞群，其是从含有造血祖细胞的细胞群中分离出表达选自由CD24、CD62L、CD90、CD143、CD263、Notch3、CD32、CD39、CD49a、CD164、CD317、CD200、CD218a、CD7、CD144、CD56、CD226、CD262和CD325组成的第一组中的一种或多种分子的细胞，和/或不表达选自由CD49f、CD51、CD102、CD42b、CD61、CD62P、CD69、CD102和CD156c组成的第二组中的一种或多种分子的细胞而获得的。[12]根据[11]所述的细胞群，其中，所述分离的细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于制备CD4/CD8双阳性细胞的方法，所述方法包括以下步骤：/n步骤1：从含有造血祖细胞的细胞群中分离出表达选自由CD24、CD62L、CD90、CD143、CD263、Notch3、CD32、CD39、CD49a、CD164、CD317、CD200、CD218a、CD7、CD144、CD56、CD226、CD262和CD325组成的第一组中的一种或多种分子的细胞，和/或不表达选自由CD49f、CD51、CD102、CD42b、CD61、CD62P、CD69、CD102和CD156c组成的第二组中的一种或多种分子的细胞，和/n步骤2：将步骤1中分离的细胞分化成CD4/CD8双阳性细胞。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170426 JP 2017-0877231.用于制备CD4/CD8双阳性细胞的方法，所述方法包括以下步骤：
步骤1：从含有造血祖细胞的细胞群中分离出表达选自由CD24、CD62L、CD90、CD143、CD263、Notch3、CD32、CD39、CD49a、CD164、CD317、CD200、CD218a、CD7、CD144、CD56、CD226、CD262和CD325组成的第一组中的一种或多种分子的细胞，和/或不表达选自由CD49f、CD51、CD102、CD42b、CD61、CD62P、CD69、CD102和CD156c组成的第二组中的一种或多种分子的细胞，和
步骤2：将步骤1中分离的细胞分化成CD4/CD8双阳性细胞。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤1中选出的细胞不表达CD235a或CD14，但表达CD45、CD34和CD43。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述步骤1是从含有造血祖细胞的细胞群中分离出表达选自由CD24、CD62L、CD90、CD143、CD263、Notch3、CD32、CD39、CD49a、CD164、CD317、CD200、CD218a、CD7、CD144、CD56、CD226、CD262和CD325组成的第一组中的一种或多种分子的细胞的步骤。


4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述步骤1中，第一组由CD24、CD62L、CD90、CD143、CD263、Notch3、CD200、CD218a、CD7和CD144组成。


5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述步骤1包括从含有造血祖细胞的细胞群中分离出不表达选自由CD49f、CD51、CD102、CD42b、CD61、CD62P、CD69、CD102和CD156c组成的第二组中的一种或多种分子的细胞。


6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述步骤1中，第二组由CD49f、CD51和CD102组成。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述步骤1中，包含造血祖细胞的细胞群是通过诱导多能干细胞分化获得的。


8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述多能干细胞是人的诱导性多能干细胞。


9.用于制备CD8单阳性细胞的方法，所述方法包括诱导通过权利要求1至8中任一项所述的方法获得的CD4/CD8双阳性细胞成为CD8单阳性细胞的步骤。


10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述CD8单阳性细胞是细胞毒性T淋巴细胞。


11.一种细胞群，其是通过从含...

【专利技术属性】
技术研发人员：金子新，入口翔一，三嶋雄太，葛西义明，林哲，有马寿来留，
申请(专利权)人：国立大学法人京都大学，武田药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP