功能化红系细胞制造技术

本文描述了功能化红系细胞的新颖制剂，和用于在人医药和兽医药应用中使用的相关组合物、试剂、以及方法。

Functional erythroid cells

This paper describes novel preparations of functionalized erythroid cells and related compositions, reagents and methods for use in human medicine and veterinary medicine.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】功能化红系细胞相关申请本申请要求于2017年2月17日提交的美国序列号62/460,589和2017年8月07日提交的美国序列号62/542,142的优先权，将其各自的内容通过引用以其全文结合在此。序列表本申请含有一份已经以ASCII格式电子提交的序列表并且将该序列表通过引用以其全文特此结合。创建于2018年2月15日的所述ASCII副本被命名为R2081-7021WO_SL.txt，并且大小是51,103字节。
技术介绍
如WO2015/073587(卢比斯治疗公司(RubiusTherapeutics,Inc.))中所述，红系细胞(例如红细胞)可以被工程化以表达多种外源治疗性蛋白质，以便于治疗许多不同的疾病。该工程化可涉及将转基因引入红细胞前体，并然后诱导这些前体分化和表达转基因。然而，一些蛋白质难以表达，例如，因为它们需要翻译后修饰或因为它们损害宿主细胞的生长或功能。存在对产生包含此类蛋白质的细胞的改进方法的需求。
技术实现思路
本文描述了功能化红系细胞的新颖制剂和相关组合物、试剂，以及对用于人医药和兽医药应用中使用具有益处和令人惊讶的品质的方法。例如，本文披露的方法和组合物提供了功能化红系细胞，这些功能化红系细胞用于在治疗应用中使用具有优化的产量、纯度、稳定性、活力、免疫原性、功能、完整性和/或生物学功能。本文所述的功能化红系细胞特别适合于将药剂递送至细胞表面或用于复杂或难以表达的药剂(例如多肽，如多聚体多肽)；大多肽；体外衍生的药剂(例如多肽)；可能对红系细胞有毒的药剂或不能在红系细胞中有效表达的药剂。药剂还可以是脂质、核酸、糖、药物、或小分子。本文披露的方法和组合物提供了用治疗剂或诊断剂衍生的优化的红系细胞，用于在广泛的适应症中使用。还提供了优化的试剂、中间体、和合成方法。在一方面，本专利技术的特征在于制剂(例如红系细胞，如造血干细胞、网织红细胞、或红细胞的药物制剂)，该制剂包含多达、至少、多于、或约5,000、10,000、50,000、100,000、200,000、300,000、400,000、500,000个偶联试剂/细胞。例如，在一些方面，本披露的特征在于制剂(例如，红系细胞的药物制剂)，该制剂包含至少5,000、10,000、50,000、100,000、200,000、300,000、400,000、500,000个偶联试剂/细胞。在一些实施例中，本文所述的药物制剂包含多达10,000、50,000、100,000、200,000、300,000、400,000、500,000个偶联试剂/细胞。在一个实施例中，该制剂中至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、或99.9％的细胞具有所述水平的偶联试剂(例如，炔烃偶联试剂(KR)/细胞或叠氮化物偶联试剂(AR)/细胞)。在一个实施例中，该制剂中至少约1％、2％、3％、5％、10％、20％、30％、或40％的细胞具有所述水平的药剂/细胞。在一个实施例中，该制剂包含多达、至少、多于、或约10,000、50,000、100,000、106、107、108、或109个细胞。在一个实施例中，该制剂包含多达、至少、多于、或约1010、1011、或1012个细胞。在一个实施例中，该细胞进一步例如在细胞内或在细胞表面上包含由外源核酸表达的多肽。在另一个方面，本专利技术的特征在于制剂(例如红系细胞，如造血干细胞、网织红细胞、或红细胞的药物制剂)，该制剂包含多达、至少、多于、或约1,000、2,000、3,000、4,000、或5,000个偶联试剂/细胞。例如，在一些方面，本披露的特征在于制剂(例如，红系细胞的药物制剂)，该制剂包含至少1,000、2,000、3,000、4,000、或5,000个偶联试剂/细胞。在另一个方面，本专利技术的特征在于制剂(例如红系细胞，如造血干细胞、网织红细胞、或红细胞的药物制剂)，该制剂包含药剂(例如，通过残基接头与细胞偶联的异源药剂)的多达、至少、多于、或约5,000、10,000、50,000、100,000、200,000、300,000、400,000、500,000个拷贝。在一些实施例中，该残基接头包含点击特征。例如，在一些方面，本披露的特征在于制剂(例如，红系细胞的药物制剂)，该制剂包含通过具有点击特征的残基接头与细胞偶联的异源试剂的至少5,000、10,000、50,000、100,000、200,000、300,000、400,000、500,000个拷贝。在一个实施例中，该制剂中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、或99.9％的细胞具有所述水平的药剂/细胞。在一个实施例中，该制剂中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、或99.9％的细胞包含第一药剂和第二药剂，例如，其中如果药剂水平高于在99％的其他类似未标记细胞中测量的水平，则细胞被认为是阳性的。在一个实施例中，该制剂中至少约1％、2％、3％、5％、10％、20％、30％、或40％的细胞具有所述水平的药剂/细胞。在一个实施例中，该制剂包含多达、至少、多于、或约10,000、50,000、100,000、106、107、108、或109个细胞。在一个实施例中，该制剂包含多达、至少、多于、或约1010、1011、或1012个细胞。在一个实施例中，这些红系细胞是网织红细胞(例如，来自体外扩增的、分化的和去核的HSC)。在实施例中，这些红系细胞包含造血前体细胞(例如，CD34+细胞)。在一个实施例中，这些红系细胞是红细胞(例如，获得自血液)。在一个实施例中，这些红系细胞被遗传修饰，例如，这些细胞包含由外源核酸(例如，DNA或RNA，例如，mRNA)表达的多肽。在一个实施例中，这些红系细胞(例如，低渗负载的)被外源蛋白包封。在一个实施例中，该制剂不含或基本上不含游离偶联试剂、未反应的偶联试剂、有机溶剂、金属(例如，铜)、催化剂、或未标记的细胞或未修饰的细胞。在一个实施例中，该药剂是在WO2015/15302；或在WO2015/073587中所述的药剂，其各自在此通过引用以其全文并入。在一个实施例中，该药剂包含肽型药剂(例如，多肽、酶、或抗体)。在一个实施例中，该肽型药剂包含细胞因子；受体；配体；激素；生长因子；血液因子；溶酶体贮积酶；天冬酰胺酶；或包含胞外结构域、反配体(counterligand)结合结构域、或其他生物学活性结构域的任何前述项的片段；或其片段或变体。在一个实施例中，该药剂包含抗原(例如，肿瘤抗原、感染性疾病抗原，和自身抗原)。在一个实施例中，该药剂包含脂质；核酸(例如RNA、DNA、siRNA)；糖；药物；或小分子。在一个实施例中，该药剂包含大于约30、50、75、100、150、200、250、300、350、或400千道尔顿的多肽。在一个实施例中，该药剂包含约1-2、1-5、2-5、5-10、10-20、20-50、50-100、100-200、或200-500kDa的多肽。在一个实施例中，该药本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种去核红系细胞，该去核红系细胞包含外源多肽剂，该外源多肽剂通过包含点击特征的残基接头经由细胞表面上的蛋白质的氨基酸侧链与细胞表面共价连接，其中该点击特征作为点击反应的产物而形成或具有点击特征的结构。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170217 US 62/460,589;20170807 US 62/542,1421.一种去核红系细胞，该去核红系细胞包含外源多肽剂，该外源多肽剂通过包含点击特征的残基接头经由细胞表面上的蛋白质的氨基酸侧链与细胞表面共价连接，其中该点击特征作为点击反应的产物而形成或具有点击特征的结构。


2.一种去核红系细胞，该去核红系细胞包含：
多个外源多肽剂，该多个外源多肽剂中的每个外源多肽剂通过包含点击特征的残基接头与细胞表面共价连接，
其中细胞上至少10％的外源多肽剂经由氨基酸侧链与细胞表面上的蛋白质连接，
其中该点击特征作为点击反应的产物而形成或具有点击特征的结构。


3.如权利要求2所述的去核红系细胞，其中细胞上至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、或99％的外源多肽剂经由氨基酸侧链与细胞表面上的蛋白质连接。


4.如前述权利要求中任一项所述的去核红系细胞，该去核红系细胞未被基因工程化。


5.如前述权利要求中任一项所述的去核红系细胞，该去核红系细胞不包含非天然氨基酸。


6.如前述权利要求中任一项所述的去核红系细胞，其中该外源多肽剂包含π-钳。


7.如权利要求6所述的去核红系细胞，其中该外源多肽剂经由π-钳与去核红系细胞共价连接。


8.如前述权利要求中任一项所述的去核红系细胞，其中该外源多肽剂包含非经典氨基酸(ncAA)。


9.如权利要求8所述的去核红系细胞，其中该外源多肽剂经由ncAA与去核红系细胞共价连接。


10.如前述权利要求中任一项所述的去核红系细胞，该去核红系细胞缺少分选酶转移特征。


11.如前述权利要求中任一项所述的去核红系细胞，其中该外源多肽剂选自α4β7抗体；IL10；酶，例如天冬酰胺酶；或凝血因子，例如因子Xa。


12.如前述权利要求中任一项所述的去核红系细胞，该去核红系细胞包含该外源多肽剂的至少约5,000、10,000、50,000、100,000、或200,000个拷贝，或包含该外源多肽剂的在5,000-10,000个之间、在10,000-50,000个之间、在50,000-100,000个之间、或在100,000-200,000个之间的拷贝。


13.如前述权利要求中任一项所述的去核红系细胞，其中该外源多肽剂是与结合配偶体结合的肽配体。


14.如前述权利要求中任一项所述的去核红...

【专利技术属性】
技术研发人员：T韦翰，TF陈，X张，C赫达克，J马塔芬克，S艾劳尔，B劳，L霍夫曼，KE泰歇特，SR达斯塔吉尔，
申请(专利权)人：鲁比厄斯治疗法股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US