【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体制备新方法专利
本专利技术主要涉及制备抗体的新方法，尤其是适用于制备全人源抗体的体外方法。专利技术背景抗体的制备方法在实验室和临床上都有广泛的应用。抗体制备过程中涉及杂交瘤技术、转基因动物模型和体外免疫法。传统的杂交瘤技术已经是被大多数人接受的主流成熟技术手段，通常包括动物免疫、淋巴细胞分离、淋巴细胞与骨髓瘤等永生化细胞融合、抗体人源化和亲和力成熟等步骤。抗体也可以通过高通量筛选的方法制备，但也面临着成本高、生产周期长、亲和力低、重链和轻链可变区配对不可预测等缺点。转基因动物模型是一种相对较新的技术，通过目前尚未明确的机制对动物进行基因改造，来表达人类的易变区域。近年来人们对体外免疫技术进行了深入研究和发展，使得该技术不再需要动物免疫，因而降低了其成本，操作更加方便快捷，无需任何人源化步骤即可获得全人源抗体，然而，鲜有用上述方法制备成功的抗体被报道。因此，继续需要研发新型高效的体外免疫方法来制备全人源抗体有重要意义。专利技术简述在一个方面，本专利技术提供了一种基于体外免疫手段制备抗体的新方法。...
【技术保护点】
1.一种产生抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在培养液中培养PBMC的步骤，所述培养液包含CD40L、ICOSL、ICOS和TLR激动剂中的至少一种。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170508 CN PCT/CN2017/083432;20180112 CN PCT/CN201.一种产生抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在培养液中培养PBMC的步骤，所述培养液包含CD40L、ICOSL、ICOS和TLR激动剂中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养液包含ICOS和TLR激动剂。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养液包含CD40L和TLR激动剂。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养液包含ICOS和CD40L。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养液包含ICOS、CD40L和TLR激动剂。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养液进一步包含IL2和/或IL21。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述TLR激动剂是TLR7激动剂、TLR8激动剂或者TLR9激动剂。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述TLR激动剂是TLR7和TLR8(TLR7/TLR8)激动剂。
9.根据权利要求7所述的方法，其中所述TLR7激动剂是咪喹莫特(imiquimod)。
10.根据权利要求7所述的方法，其中所述TLR9激动剂是CpGODN。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述PBMC是从人中分离的，来自造血干细胞(HSC)或脐带血。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述PBMC包括B细胞和Tf细胞(Tfollicularcell)。
13.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述PBMC包括B细胞和树突状细胞。
14.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述PBMC包括B细胞、Tf细胞和树突状细胞。
15.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中所述培养液进一步包含抗原。
16.根据上述权利要求中的任一项所述的方法，其中所述培养液还包括的共刺激分子、CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODNs)、白细胞介素、抗凋亡蛋白、TNFs、干扰素(INFs)、脂类、avasimid、EFNB1、EPHB4、PlexinB2、Semaphorin4C、BLIMP-1、IRF4或其任何组合。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述共刺激分子为CD40、APRIL、TNF家族的B细胞激活因子(BAFF)、OX40、OX40L或其任何组合。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述CpGODN是CpG2006、D/KCpG或其任何组合。
19.根据权利要求16所述的方法，其中所述白介素是IL-1b、IL2、IL21、IL4、IL3、IL5、IL6、IL7、IL10、IL13、IL14、IL15、IL33或其任何组合。
20.根据权利要求16所述的方法，其中所述抗凋亡蛋白为Bcl-2、Bcl-6、Bcl-XL、Bcl-w、Mcl-1、其类似物或其任何组合。
21.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中CD40L、ICOSL、ICOS和TLR激动剂中的至少一种诱导PBMC产生抗体增强、PBMC中B细胞活化和分化和/或B细胞成熟。
22.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括从培养的PBMC中分离其分泌的抗体的步骤。
23.根据权利要求22所述的方法，其进一步包括获...
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