通用型抗CD22嵌合抗原受体工程化的免疫细胞制造技术

本申请涉及一种具有新的CD22嵌合抗原受体(CD22 CAR)的工程化的免疫细胞，具有TRAC基因中的缺失，其能够重定向所述免疫细胞对选定的肿瘤细胞的特异性和反应性。具有此类CAR的工程化的免疫细胞特别适合用于治疗复发的难治性的表达CD22的癌症。

Engineering immune cells of universal anti-CD22 chimeric antigen receptor

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通用型抗CD22嵌合抗原受体工程化的免疫细胞
本专利技术总体上涉及免疫治疗领域，更具体地，涉及对CD22特异的通用型嵌合抗原受体T细胞(UCART22)和工程化所述细胞的方法，该对CD22特异的通用型嵌合抗原受体T细胞(UCART22)是包含至少一个经编辑的基因和对分化簇22(CD22)特异的嵌合抗原受体(CAR)(CARCD22)的工程化人原代免疫细胞，所述经编辑的基因优选是编码TCR亚基的基因或CD52基因。本专利技术进一步涉及UCART22在可能是或可能不是细胞初始供体(“同种异体(allogenic)”或“自体”CD22CAR工程化人原代免疫细胞)的患者中作为用于复发的难治性血液癌症的治疗的应用。根据本专利技术的表达CD22的细胞对于免疫治疗、特别是针对侵袭性或复发的癌症是特别有效和安全的。
技术介绍
2000年，在美国，血液癌症(非霍奇金淋巴瘤、白血病)预计死亡人数超过45,000人(Greenlee等人，CACancerJ.Clin.，50:7-33(2000))。2014年公布的数字相似，并且尽管在治疗方面如化疗中取得了进展，但此类癌症的预后基本不变。(EKMai，UBertsch，JDürig，CKunz，MHaenel，IWBlau，MMunder，AJauch，BSchurich，THielscher，MMerz，BHuegle-Doerr，ASeckinger，DHose，JHillengass，MSRaab，KNeben，H-WLindemann，MZeis，CGerecke，IGHSchmidt-Wolf，KWeisel，CScheid，HSalwender和HGoldschmidt.PhaseIIItrialofbortezomib,cyclophosphamideanddexamethasone(VCD)versusbortezomib,doxorubicinanddexamethasone(PAd)innewlydiagnosedmyeloma.Leukemia(硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(VCD)与硼替佐米、阿霉素和地塞米松(PAd)在新诊断的骨髓瘤、白血病中的III期试验)(2015年3月19日)|doi:10.1038/leu.2015.80.)在针对这些血液癌症的新的研究性疗法中，独特的是通过嵌合抗原受体(CAR)的基因转移对具有细胞裂解能力的细胞如T细胞进行的遗传修饰(Jena，dotti等，2010)。CAR是由与单个分子中或形成多聚体的多个跨膜结构域中的一个或多个胞内信号转导结构域相关的靶向部分组成的合成受体。在特定的CAR中，结合部分由来自单链抗体(scFV)的抗原结合结构域组成，包含由接头连接的单克隆抗体的可变片段。基于受体或配体结构域的结合部分也被成功地用于制备CAR。添加来自T细胞受体(TCR)的共刺激分子的信号转导结构域，以及特定的跨膜和铰链结构域用于形成第二代和第三代CAR，获得在人类中成功的治疗试验。在这些研究中，来自患血液(“液态”)癌症患者的T细胞被重新定向针对表达例如CD19或CD22的恶性细胞(June等，2011；Haso等，2013)并重新注射到相同患者中。(HasoW,LeeDW,ShahNN,Stetler-StevensonM,YuanCM,PastanIH,DimitrovDS,MorganRA,FitzGeraldDJ,BarrettDM,WayneAS,MackallCL,OrentasRJ.Anti-CD22-chimericantigenreceptorstargetingB-cellprecursoracutelymphoblasticleukemia.Blood.2013Feb14；121(7):1165-74.doi:10.1182/blood-2012-06-438002.Epub2012Dec14)。允许来自一个个体的免疫细胞在重新注射到同一个体(通常患有癌症)之前进行工程化的方法不是很适合用于可能在与时间赛跑的侵袭形式的肿瘤。此外，这种方法在免疫系统发生改变的患者中可能是有问题的或不确定的。为了缓解这一问题，最近实施了使用表达CAR的所谓“同种异体(allogeneic)”T细胞(也称为通用型或“现成”T细胞)的免疫疗法，第一批接受这种细胞治疗的两名患者在治疗后约两年仍处于缓解期。尽管如此，这种疗法仍有一些方面有待改进，如存在抗T细胞药物时的有效性、抗逃逸肿瘤细胞的有效性、持久性、控制手段等。事实上，似乎通过下调CAR识别的表面抗原的表达，癌细胞可能逃避治疗并存活下来，尽管在接受治疗的患者中仍然存在重新定向的免疫。此外，在用自体或同种异体T细胞治疗的患者中观察到的、有时是致命的主要不良反应是细胞因子释放综合征。因此，仍然需要为这些疾病、特别是对血液癌症的侵袭性或难治性/复发的形式开发有效和安全的治疗。
技术实现思路
在此，专利技术人开发了一种包括具有至少TRAC基因的缺失的工程化的原代人类T细胞的新的有效治疗(“UCART22”)，被赋予靶向CD22的嵌合抗原受体和安全标记，允许在体内控制所述细胞数量从而控制所述细胞的活性。在包括具有至少TRAC基因的缺失的工程化的原代人类T细胞的新的有效治疗(“UCART22”)中，考虑在CD52、dCK、β2微球蛋白基因中的至少一个另外的缺失。这些新的UCART22对于患有CD22介导的病理的患者的过继性转移特别有效，无论所述患者是否为免疫细胞的初始供体，并且无论所述患者是否已经接受影响免疫的治疗。本专利技术的UCART22细胞对通常用于治疗CD22介导的病理学的至少一种化学或抗体药物如CAMPATH和/或嘌呤核苷酸类似物(PNA)具有耐受性。本专利技术的UCART22细胞在以杀死多于80％的细胞的剂量使用的所述药物的存在下能够存活并具有活性。已观察到工程化分离的原代免疫细胞UCART22显著且出乎意料的临床优势，包括低细胞因子释放、无或非常轻微的移植物抗宿主病，以及对血液癌症细胞的难治性复发形式的显著活性。将在本研究中披露其他优点。本研究提供：1、一种工程化的人T细胞受体敲除(TCRKO)细胞(UCART22)，具有对CD22特异的嵌合抗原受体(CAR)，安全开关，优选地在细胞表面表达，所述抗CD22CAR(CD22CAR)包含：i)至少一个胞外结构域，包含：-来自CD8α的铰链结构域，-对CD22特异的抗原结合结构域，可选地是前导序列，ii)来自CD8α的跨膜结构域，以及iii)胞内信号转导结构域，所述CD22CAR具有与SEQIDN°15具有至少80％同一性的多肽序列，所述安全开关包括：-由肽2A暂时连接到CD22CAR的RQR8，或者-连接到CD22CAR的至少两个利妥昔单抗mAb特异性表位，优选位于VH与铰链结构域之间，或者3个利妥昔单抗mAb特异性表位或3个利妥昔单抗mAb特异性表位和QBEN-10mAb特异性表位。2.根本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种工程化的人T细胞受体敲除(TCR KO)细胞(UCART22)，具有对CD22特异的嵌合抗原受体(CAR)，安全开关，优选地在细胞表面表达，所述抗CD22 CAR(CD22 CAR)包含：/ni)至少一个胞外结构域，包含：/n-来自CD8α的铰链结构域，/n-对CD22特异的抗原结合结构域，可选地前导序列，/nii)来自CD8α的跨膜结构域，以及/niii)胞内信号转导结构域，/n所述CD22 CAR具有与SEQ ID N°15具有至少80％同一性的多肽序列，/n所述安全开关包括：/n-由肽2A暂时连接到所述CD22 CAR的RQR8，或者/n-连接到所述CD22 CAR的至少两个利妥昔单抗mAb特异性表位，优选位于VH与所述铰链结构域之间，或者3个利妥昔单抗mAb特异性表位或3个利妥昔单抗mAb特异性表位和QBEN-10mAb特异性表位。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170331 DK PA201770239;20170331 DK PA201770240;201.一种工程化的人T细胞受体敲除(TCRKO)细胞(UCART22)，具有对CD22特异的嵌合抗原受体(CAR)，安全开关，优选地在细胞表面表达，所述抗CD22CAR(CD22CAR)包含：
i)至少一个胞外结构域，包含：
-来自CD8α的铰链结构域，
-对CD22特异的抗原结合结构域，可选地前导序列，
ii)来自CD8α的跨膜结构域，以及
iii)胞内信号转导结构域，
所述CD22CAR具有与SEQIDN°15具有至少80％同一性的多肽序列，
所述安全开关包括：
-由肽2A暂时连接到所述CD22CAR的RQR8，或者
-连接到所述CD22CAR的至少两个利妥昔单抗mAb特异性表位，优选位于VH与所述铰链结构域之间，或者3个利妥昔单抗mAb特异性表位或3个利妥昔单抗mAb特异性表位和QBEN-10mAb特异性表位。


2.根据权利要求1所述的UCART22，其中与SEQIDN°11具有至少80％同一性的多核苷酸序列被插入到基因组中，并且还包含在SEQIDN°18内具有插入、缺失或突变的经失活的TRAC基因，在所述细胞表面具有通过流式细胞术测量的不可检测水平的T细胞受体(TCR)，以及通过引导序列技术测量的不可检测水平的位点外事件。


3.根据权利要求2所述的UCART22，其中，所述抗CD22CAR优选插入到所述TRAC基因中，优选具有SEQIDN°18。


4.根据权利要求1至2中任一项所述的UCART22，包含另一个失活的基因，选自dCK基因、B2M基因、CD52基因，优选是CD52基因。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的UCART22，其中至少一个另外的基因是失活的，所述基因选自编码以下各项的基因：芳香烃受体(AHR)、转化生长因子β受体(TGFβ受体)、白细胞介素10受体(IL-10R)、程序性细胞死亡蛋白1，它们的组合。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的UCART22，包含对选自以下各项的肿瘤相关表面抗原特异的另外的scfv：CD19、CD20、CD30、主要组织相容性复合物(MHC)分子、免疫球蛋白(Ig)、CD3、CD5、CD34、CD79优选CD79b、CD138、B7-1(CD80)、BCMA(CD269，TNFRSF17)、FLT-3或PAX5，优选CD19。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的UCART22，其中所述CD22CAR还包含对CD19特异的抗原结合结构域，或者其中所述UCART22还包含CD19CAR，优选与SEQIDN°25或SEQIDN°26具有至少80％同一性的CD19CAR。


8.根据权利要求1至7中任一项所述的UCART22，其中所述抗CD22CAR是单链CAR或多链CAR。


9.根据权利要求6或7中任一项所述的UCART22，其中所述抗CD19CAR是单链CAR或多链CAR。


10.一种UCART细胞的群体，包含根据权利要求1至9中任一项所述的UCART22。


11.根据权利要求10所述的UCART细胞的群体，包含UCART19，优选在所述细胞表面表达包含SEQIDN°25或SEQIDN°26的序列的抗CD19CAR的UCART19。


12.一种试剂盒，包含UCART22和UCART19，用于在需要其的患者中连续地(至少一次)、或者伴随地、或连续地(至少一次)随后伴随地给予。


13.根据权利要求12所述的试剂盒，其中首先使用所述UCART19至少一次、两次、三次、四次或若干次，随后单独或与所述UCART19一起使用所述UCART22。


14.根据权利要求12或13所述的试剂盒，其中首先使用所述UCART22至少一次、两次、三次、四次或若干次，随后单独或与所述UCART22一起使用所述UCART19。


15.根据权利要求12至14中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱莉安娜·史密斯，菲利普·迪沙泰奥，米里耶勒·德里耶，
申请(专利权)人：塞勒克提斯公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR