用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物及应用制造技术

本发明专利技术公开用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物及应用。本发明专利技术的组合物包含(1)IL‑15/IL‑15Rα复合物、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；(2)TGF‑β调节肽、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；和(3)CD80复合物、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸。本发明专利技术的组合物的各成分之间能够协同作用解除免疫细胞衰竭。

Composition and application for synergistically relieving immune cell failure

【技术实现步骤摘要】
用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物及应用
本专利技术涉及免疫学以及医药领域，具体地涉及用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物及应用。
技术介绍
肿瘤具有免疫逃逸的特点，虽然一些肿瘤细胞在生长过程中存在细胞凋亡被外周抗原递呈细胞所获取，但同时会伴随免疫抑制因子的释放。肿瘤疫苗具有低毒性、持久和特异性强的特点成为国内外研究的热点。其中，DNA疫苗以独特的肿瘤抗原提供方式以及树突状细胞(DC)在抗原递呈中的重要作用，成为肿瘤疫苗重要的工具。例如，2017年4月14日，一项针对11例胶质母细胞瘤患者的Ⅰ期临床研究发现，患者接受在研DC疫苗和替莫唑胺的联合治疗后，其生存期超过了五年，而这种结果相当罕见的，相关试验结果发表在《ClinicalCancerResearch》期刊上。再例如，DanielaVerthelyi等人通过研究发现，在DNA质粒中加入CpG片段或寡聚核苷酸与疫苗同时应用，能增加IL-1β、IL-10、IL-18表达，增加肿瘤成熟DC和NK细胞浸润，诱导特异性T细胞反应，增强免疫应答[VerthelyiD.AdjuvantPropertiesofCpGOligonucleotidesinPrimates[J].Methodsinmolecularmedicine,2006,127:139-158.]。目前有大量的使用负载了抗原的DC疫苗治疗肿瘤的报道，从报道的数据来看，DC疫苗似乎代表了一种用于改善的肿瘤免疫治疗的新的非常有潜力的方法。然而，单独的DC疫苗的使用通常不能导致所期待的免疫治疗效果的改善，不能得到令人满意的临床效果。目前的临床实验表明，DC治疗性疫苗的应答率很少超过15％，总体应答率偏低。
技术实现思路
为解决现有技术中的至少部分技术问题，本专利技术提供一种组合物，其与DC疫苗联合使用，能够增强DC疫苗致敏T细胞的能力，提高DC疫苗治疗肿瘤的效果。经过大量筛选实验，本专利技术发现IIL-15/IL-15Rα复合物、TGF-β调节肽和sCD80之间能够发挥协同作用，大大增强抗原递呈细胞致敏T细胞能力，诱导产生更多的有抗肿瘤活性的CD4T淋巴细胞和CD8T淋巴细胞。至少部分地基于此完成了本专利技术。具体地，本专利技术包括以下内容。本专利技术的第一方面，提供一种用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物，该组合物包含(1)IL-15/IL-15Rα复合物、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；(2)TGF-β调节肽、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；和(3)sCD80、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸。在某些具体实施方案中，所述TGF-β调节肽具有SEQIDNo.3所示的基因编码的氨基酸序列。sCD80具有SEQIDNo.4所示的基因编码的氨基酸序列。在某些具体实施方案中，所述IL-15/IL-15Rα复合物的编码核酸为编码IL-15和IL-15Rα两者的核酸，其中，编码IL-15的核酸序列包括SEQIDNo.1所示的序列，编码IL-15Rα的核酸序列包括SEQIDNo.2所示的序列。在某些具体实施方案中，所述IL-15和IL-15Rα复合物的编码核酸为同时编码IL-15和IL-15Rα两者的核酸。在某些具体实施方案中，所述TGF-β调节肽的编码核酸序列包括SEQIDNo.3所示的序列。在某些具体实施方案中，所述TGF-β调节肽为RGFBR3在金属蛋白酶作用下进行裂解后产生的可溶性功能片段sTGFBR3。在某些具体实施方案中，sCD80的编码核酸序列包括SEQIDNo.4所示的序列。本专利技术的第二方面，提供一种抗原递呈细胞，所述抗原递呈细胞包含抗原或能够产生所述抗原的前体，和第一方面所述的组合物。本专利技术的第三方面，提供一种用于协同解除免疫细胞衰竭的方法，其包括使第二方面所述的抗原递呈细胞与T细胞接触的步骤。在某些具体实施方案中，所述用于协同解除免疫细胞衰竭的方法包括以下步骤：(1)制备核酸构建体，所述构建体包括编码相应抗原的核酸、编码sCD80的抗原、编码TGF-β调节肽的核酸和编码IL-15/IL-15Rα复合物的核酸；(2)进行体外转录以获得用于协同解除免疫细胞衰竭组合物的核糖核酸分子；(3)进行体外诱导培养以获得用于表达步骤(2)核糖核酸分子的抗原递呈细胞和(4)通过转染使步骤(2)的核糖核酸分子导入步骤(3)的抗原递呈细胞并进行表达的步骤。本专利技术通过利用IL15/IL15Rα调节T细胞活化和增殖的能力，协同TGF-β调节肽和sCD80多通路协同作用促使DC细胞诱导产生的特异的细胞毒性T细胞持续扩增，产生更多的有抗肿瘤活性的淋巴细胞，提高治疗肿瘤，例如DC疫苗在治疗肿瘤的效果。附图说明图1为使用编码本专利技术组合物各组分蛋白的mRNA以及GPC3抗原mRNA转染DC细胞后，在体外致敏T细胞的实验中CD8T细胞免疫应答结果。图1的各组柱中，从左到右分别为CD8IFN-γ+、CD8IFN-γ+,TNF-α+、CD8TNF-α+细胞占总CD8T细胞的比例。图2为使用编码本专利技术组合物各组分蛋白的mRNA以及GPC3抗原mRNA转染DC细胞后，在体外致敏T细胞的实验中CD4T细胞免疫应答结果。图2的各组柱中，从左到右分别为CD4IFN-γ+、CD4IFN-γ+,TNF-α+、CD4TNF-α+细胞占总CD4T细胞的比例。具体实施方式现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。[组合物]本专利技术的第一方面，提供一种用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物，本文有时也简称为“本专利技术的组合物”。本专利技术的组合物包含(1)IL-15/IL-15Rα复合物、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；(2)TGF-β调节肽、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；和(3)CD80复合物、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸。本专利技术中，白介素-15(interleukin-15,IL-15)是指天然存在或野生型白细胞介素-15，包括不同的剪接变体和天然生成的变体。IL-15可以是任何物种的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物，其特征在于，包含(1)IL-15/IL-15Rα复合物、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；(2)TGF-β调节肽、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；和(3)sCD80、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物，其特征在于，包含(1)IL-15/IL-15Rα复合物、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；(2)TGF-β调节肽、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸；和(3)sCD80、其突变体或其功能片段，或者它们的编码核酸。


2.根据权利要求1所述的用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物，其特征在于，所述IL-15/IL-15Rα复合物的编码核酸为编码IL-15和IL-15Rα两者的核酸，其中，编码IL-15的核酸序列包括SEQIDNo.1所示的序列，编码IL-15Rα的核酸序列包括SEQIDNo.2所示的序列。


3.根据权利要求1所述的用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物，其特征在于，所述IL-15和IL-15Rα复合物的编码核酸为同时编码IL-15和IL-15Rα两者的核酸。


4.根据权利要求1所述的用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物，其特征在于，所述TGF-β调节肽具有SEQIDNo.3所示的基因编码的氨基酸序列。


5.根据权利要求4所述的用于协同解除免疫细胞衰竭的组合物，其特征在于，所述TGF-β调节...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙圣楠，吴斐然，文高柳，
申请(专利权)人：北京启辰生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11