具有Y182T突变的T细胞-抗原偶联物及其方法和用途技术

提供了一种三功能分子，其包含靶标特异性配体、结合与TCR复合物缔合的蛋白质的配体和T细胞受体信号传导域多肽。所述结合与TCR复合物缔合的蛋白质的配体是具有Y182T突变的UCHT1。具有该新型受体的工程化T细胞引起包括细胞因子产生、脱粒和细胞溶解在内的许多T细胞功能的抗原特异性激活。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有Y182T突变的T细胞-抗原偶联物及其方法和用途交叉引用本申请要求于2017年10月12日提交的第62/571,354号美国临时申请的权益，该临时申请通过引用并入本文。序列表本申请含有序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用整体并入本文。创建于2018年10月11日的所述ASCII副本被命名为0034923-00006_SL.txt，大小为40,435个字节。
本公开涉及通过具有针对特定靶细胞的高细胞毒性和降低的脱靶毒性的工程化T细胞来治疗癌症的方法。具体地，本公开涉及表达触发自然T细胞活化过程的新型生物剂的工程化T细胞。
技术实现思路
在一些实施方案中，本文公开了编码三功能T细胞-抗原偶联物(Tri-TAC)的核酸序列，其包含：(a)编码选择性结合靶抗原的配体的第一多核苷酸序列；(b)编码具有Y182T突变的UCHT1配体的第二多核苷酸序列，该UCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:26具有至少80％的序列同一性；以及(c)编码TCR信号传导域多肽的第三多核苷酸序列。在一些实施方案中，所述氨基酸序列包含SEQIDNO:26。在一些实施方案中，所述配体特异性结合靶抗原。在一些实施方案中，所述配体是锚蛋白重复序列(DARPin)多肽。在一些实施方案中，所述配体是单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，所述靶抗原是肿瘤抗原。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原是HER-2抗原。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原是BCMA抗原。在一些实施方案中，所述与TCR复合物缔合的蛋白质是CD3，优选CD3ε。在一些实施方案中，所述TCR信号传导域多肽包含跨膜域和胞质域。在一些实施方案中，所述TCR信号传导域多肽包含TCR共受体的跨膜域和胞质域。在一些实施方案中，所述TCR共受体是CD4。在一些实施方案中，所述TCR共受体是CD8，优选CD8α。在一些实施方案中，所述第一多肽、所述第二多肽和所述第三多肽直接融合。在一些实施方案中，所述第一多肽和所述第二多肽直接融合，并且通过连接体与所述第三多肽连接。在一些实施方案中，所述第二多肽和所述第三多肽直接融合，并且通过连接体与所述第一多肽连接。在一些实施方案中，所述连接体是肽连接体，优选包含5至30个氨基酸、更优选5个氨基酸、10个氨基酸或15个氨基酸的肽连接体。在一些实施方案中，该肽连接体包括G4S3连接体。在一些实施方案中，本文公开了编码T细胞-抗原偶联物(Tri-TAC)的核酸序列，其包含：(a)编码选择性结合靶抗原的配体的第一多核苷酸序列；(b)编码人源化UCHT1变体(huUCHT1)配体的第二多核苷酸序列，该huUCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:29具有至少80％的序列同一性；以及(c)编码TCR信号传导域多肽的第三多核苷酸序列。在一些实施方案中，所述氨基酸序列包含SEQIDNO:29。在一些实施方案中，所述配体特异性结合靶抗原。在一些实施方案中，所述配体是锚蛋白重复序列(DARPin)多肽。在一些实施方案中，所述配体是单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，所述靶抗原是肿瘤抗原。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原是HER-2抗原。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原是BCMA抗原。在一些实施方案中，所述与TCR复合物缔合的蛋白质是CD3，优选CD3ε。在一些实施方案中，所述TCR信号传导域多肽包含跨膜域和胞质域。在一些实施方案中，所述TCR信号传导域多肽包含TCR共受体的跨膜域和胞质域。在一些实施方案中，所述TCR共受体是CD4。在一些实施方案中，所述TCR共受体是CD8，优选CD8α。在一些实施方案中，所述第一多肽、所述第二多肽和所述第三多肽直接融合。在一些实施方案中，所述第一多肽和所述第二多肽直接融合，并且通过连接体与所述第三多肽连接。在一些实施方案中，所述第二多肽和所述第三多肽直接融合，并且通过连接体与所述第一多肽连接。在一些实施方案中，所述连接体是肽连接体，优选包含5至30个氨基酸、更优选5个氨基酸、10个氨基酸或15个氨基酸的肽连接体。在一些实施方案中，该肽连接体包括G4S3连接体。在一些实施方案中，本文公开了编码T细胞-抗原偶联物(Tri-TAC)的核酸序列，其包含：(a)编码选择性结合靶抗原的配体的第一多核苷酸序列；(b)编码具有Y177T突变的人源化UCHT1变体(huUCHT1)配体的第二多核苷酸序列，该huUCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:28具有至少80％的序列同一性；以及(c)编码TCR信号传导域多肽的第三多核苷酸序列。在一些实施方案中，所述氨基酸序列包含SEQIDNO:28。在一些实施方案中，所述配体特异性结合靶抗原。在一些实施方案中，所述配体是锚蛋白重复序列(DARPin)多肽。在一些实施方案中，所述配体是单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，所述靶抗原是肿瘤抗原。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原是HER-2抗原。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原是BCMA抗原。在一些实施方案中，所述与TCR复合物缔合的蛋白质是CD3，优选CD3ε。在一些实施方案中，所述TCR信号传导域多肽包含跨膜域和胞质域。在一些实施方案中，所述TCR信号传导域多肽包含TCR共受体的跨膜域和胞质域。在一些实施方案中，所述TCR共受体是CD4。在一些实施方案中，所述TCR共受体是CD8，优选CD8α。在一些实施方案中，所述第一多肽、所述第二多肽和所述第三多肽直接融合。在一些实施方案中，所述第一多肽和所述第二多肽直接融合，并且通过连接体与所述第三多肽连接。在一些实施方案中，所述第二多肽和所述第三多肽直接融合，并且通过连接体与所述第一多肽连接。在一些实施方案中，所述连接体是肽连接体，优选包含5至30个氨基酸、更优选5个氨基酸、10个氨基酸或15个氨基酸的肽连接体。在一些实施方案中，该肽连接体包括G4S3连接体。在一些实施方案中，本文公开了编码抗-HER-2三功能T细胞-抗原偶联物(抗-HER-2Tri-TAC)的核酸序列，其包含：(a)编码选择性结合HER-2抗原的配体的第一多核苷酸序列；(b)编码具有Y182T突变的UCHT1配体的第二多核苷酸序列，该UCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:26具有至少80％的序列同一性；以及(c)编码TCR信号传导域多肽的第三多核苷酸序列。在一些实施方案中，该氨基酸序列包含SEQIDNO:26。在一些实施方案中，该氨基酸序列包含SEQIDNO:29。在一些实施方案中，该氨基酸序列包含SEQIDNO:28。在一些实施方案中，所述配体特异性结合HER-2抗原。在一些实施方案中，所述配体是锚蛋白重复序列(DARPin)多肽。在一些实施方案中，所述HER-2抗原在癌细胞上表达。在一些实施方案中，所述与TCR复合物缔合的蛋白质是CD3，优选CD3ε。在一些实施方案中，所述TCR信号传导域多肽包含跨膜域和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.编码三功能T细胞-抗原偶联物(Tri-TAC)的核酸序列，其包含：/n(a)编码选择性结合靶抗原的配体的第一多核苷酸序列；/n(b)编码具有Y182T突变的UCHT1配体的第二多核苷酸序列，/n该UCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQID NO:26具有至少80％的序列同一性；以及/n(c)编码TCR信号传导域多肽的第三多核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171012 US 62/571,3541.编码三功能T细胞-抗原偶联物(Tri-TAC)的核酸序列，其包含：
(a)编码选择性结合靶抗原的配体的第一多核苷酸序列；
(b)编码具有Y182T突变的UCHT1配体的第二多核苷酸序列，
该UCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:26具有至少80％的序列同一性；以及
(c)编码TCR信号传导域多肽的第三多核苷酸序列。


2.根据权利要求1所述的核酸序列，其中所述氨基酸序列包含SEQIDNO:26。


3.编码T细胞-抗原偶联物(Tri-TAC)的核酸序列，其包含：
(a)编码选择性结合靶抗原的配体的第一多核苷酸序列；
(b)编码人源化UCHT1变体(huUCHT1)配体的第二多核苷酸序列，该huUCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:29具有至少80％的序列同一性；以及
(c)编码TCR信号传导域多肽的第三多核苷酸序列。


4.根据权利要求3所述的核酸序列，其中所述氨基酸序列包含SEQIDNO:29。


5.编码T细胞-抗原偶联物(Tri-TAC)的核酸序列，其包含：
(a)编码选择性结合靶抗原的配体的第一多核苷酸序列；
(b)编码具有Y177T突变的人源化UCHT1变体(huUCHT1)配体的第二多核苷酸序列，该huUCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:28具有至少80％的序列同一性；以及
(c)编码TCR信号传导域多肽的第三多核苷酸序列。


6.根据权利要求5所述的核酸序列，其中所述氨基酸序列包含SEQIDNO:28。


7.根据权利要求1-6中任一项所述的核酸序列，其中所述配体特异性结合靶抗原。


8.根据权利要求1-7中任一项所述的核酸序列，其中所述配体是锚蛋白重复序列(DARPin)多肽。


9.根据权利要求1-7中任一项所述的核酸序列，其中所述配体是单链可变片段(scFv)。


10.根据权利要求1-9中任一项所述的核酸序列，其中所述靶抗原是肿瘤抗原。


11.根据权利要求1-10中任一项所述的核酸序列，其中所述肿瘤抗原是HER-2抗原。


12.根据权利要求1-10中任一项所述的核酸序列，其中所述肿瘤抗原是BCMA抗原。


13.根据权利要求1-13中任一项所述的核酸序列，其中所述与TCR复合物缔合的蛋白质是CD3，优选CD3ε。


14.根据权利要求1-13中任一项所述的核酸序列，其中所述TCR信号传导域多肽包含跨膜域和胞质域。


15.根据权利要求1-14中任一项所述的核酸序列，其中所述TCR信号传导域多肽包含TCR共受体的跨膜域和胞质域。


16.根据权利要求15所述的核酸序列，其中所述TCR共受体是CD4。


17.根据权利要求16所述的核酸序列，其中所述TCR共受体是CD8，优选CD8α。


18.根据权利要求1-17中任一项所述的核酸序列，其中所述第一多肽、所述第二多肽和所述第三多肽直接融合。


19.根据权利要求1-17中任一项所述的核酸序列，其中所述第一多肽和所述第二多肽直接融合，并且通过连接体与所述第三多肽连接。


20.根据权利要求1-17中任一项所述的核酸序列，其中所述第二多肽和所述第三多肽直接融合，并且通过连接体与所述第一多肽连接。


21.根据权利要求19-20中任一项所述的核酸序列，其中所述连接体是肽连接体，优选包含5至30个氨基酸、更优选5个氨基酸、10个氨基酸或15个氨基酸的肽连接体。


22.根据权利要求21所述的核酸序列，其中所述肽连接体包括G4S3连接体。


23.编码抗-HER-2三功能T细胞-抗原偶联物(抗-HER-2Tri-TAC)的核酸序列，其包含：
(a)编码选择性结合HER-2抗原的配体的第一多核苷酸序列；
(b)第二多核苷酸序列，其编码：
(i)具有Y182T突变的UCHT1配体，该UCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:26具有至少80％的序列同一性，
(ii)人源化UCHT1变体(huUCHT1)配体，该huUCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:29具有至少80％的序列同一性，或
(iii)具有Y177T突变的人源化UCHT1变体(huUCHT1)配体，该huUCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:28具有至少80％的序列同一性；以及
(c)编码TCR信号传导域多肽的第三多核苷酸序列。


24.根据权利要求23所述的核酸序列，其中所述氨基酸序列包含SEQIDNO:26。


25.根据权利要求23所述的核酸序列，其中所述氨基酸序列包含SEQIDNO:29。


26.根据权利要求23所述的核酸序列，其中所述氨基酸序列包含SEQIDNO:28。


27.根据权利要求23-26中任一项所述的核酸序列，其中所述配体特异性结合所述HER-2抗原。


28.根据权利要求23-27中任一项所述的核酸序列，其中所述配体是锚蛋白重复序列(DARPin)多肽。


29.根据权利要求23-28中任一项所述的核酸序列，其中所述HER-2抗原在癌细胞上表达。


30.根据权利要求23-29中任一项所述的核酸序列，其中所述与TCR复合物缔合的蛋白质是CD3，优选CD3ε。


31.根据权利要求23-30中任一项所述的核酸序列，其中所述TCR信号传导域多肽包含跨膜域和胞质域。


32.根据权利要求23-31中任一项所述的核酸序列，其中所述TCR信号传导域多肽包含TCR共受体的跨膜域和胞质域。


33.根据权利要求32所述的核酸序列，其中所述TCR共受体是CD4。


34.根据权利要求32所述的核酸序列，其中所述TCR共受体是CD8，优选CD8α。


35.根据权利要求23-34中任一项所述的核酸序列，其中所述第一多肽、所述第二多肽和所述第三多肽直接融合。


36.根据权利要求23-34中任一项所述的核酸序列，其中所述第一多肽和所述第二多肽直接融合，并且通过连接体与所述第三多肽连接。


37.根据权利要求23-34中任一项所述的核酸序列，其中所述第二多肽和所述第三多肽直接融合，并且通过连接体与所述第一多肽连接。


38.根据权利要求35-37中任一项所述的核酸序列，其中所述连接体是肽连接体，优选包含5至30个氨基酸、更优选5个氨基酸、10个氨基酸或15个氨基酸的肽连接体。


39.根据权利要求38所述的核酸序列，其中所述肽连接体包括G4S3连接体。


40.编码抗-BCMA三功能T细胞-抗原偶联物(抗-BCMATri-TAC)的核酸序列，其包含：
(a)编码选择性结合BCMA抗原的配体的第一多核苷酸序列；
(b)第二多核苷酸序列，其编码：
(i)具有Y182T突变的UCHT1配体，该UCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:26具有至少80％的序列同一性，
(ii)人源化UCHT1变体(huUCHT1)配体，该huUCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:29具有至少80％的序列同一性，或
(iii)具有Y177T突变的人源化UCHT1变体(huUCHT1)配体，该huUCHT1配体包含的氨基酸序列与结合与T细胞受体(TCR)复合物缔合的蛋白质的SEQIDNO:28具有至少80％的序列同一性；以及
(c)编码TCR信号传导域多肽的第三多核苷酸序列。


41.根据权利要求40所述的核酸序列，其中所述氨基酸序列包含SEQIDNO:26。


42.根据权利要求40所述的核酸序列，其中所述氨基酸序列包含SEQIDNO:29。


43.根据权利要求40所述的核酸序列，其中所述氨基酸序列包含SEQIDNO:28。


44.根据权利要求40-43中任一项所述的核酸序列，其中所述配体特异性结合所述BCMA抗原。


45.根据权利要求40-44中任一项所述的核酸序列，其中所述配体是单链可变片段(scFv)。


46.根据权利要求44所述的核酸序列，其中所述BCMA抗原在癌细胞上表达。


47.根据权利要求40-46中任一项所述的核酸序列，其中所述与TCR复合物缔合的蛋白质是CD3，优选CD3ε。


48.根据权利要求40-47中任一项所述的核酸序列，其中所述TCR信号传导域多肽包含跨膜域和胞质域。


49.根据权利要求40-48中任一项所述的核酸序列，其中所述TCR信号传导域多肽包含TCR共受体的跨膜域和胞质域。


50.根据权利要求49所述的核酸序列，其中所述TCR共受体是CD4。


51.根据权利要求49所述的核酸序列，其中所述TCR共受体是CD8，优选CD8α。


52.根据权利要求40-51中任一项所述的核酸序列，其中所述第一多肽、所述第二多肽和所述第三多肽直接融合。


53.根据权利要求40-51中任一项所述的核酸序列，其中所述第一多肽和所述第二多肽直接融合，并且通过连接体与所述第三多肽连接。


54.根据权利要求40-51中任一项所述的核酸序列，其中所述第二多肽和所述第三多肽直接融合，并且通过连接体与所述第一多肽连接。


55.根据权利要求53-54中任一项所述的核酸序列，其中所述连接体是肽连接体，优选包含5至30个氨基酸、更优选5个氨基酸、10个氨基酸或15个氨基酸的肽连接体。


56.根据权利要求56所述的核酸序列，其中所述肽连接体包括G4S3连接体。


57.一种载体，其包含权利要求1-56中任一项的核酸序列。


58.根据权利要求57所述的载体，其进一步包含启动子，优选在哺乳动物细胞中具有功能的启动子。


59.用权利要求57-58中任一项的载体转染的T细胞。


60.一种工程化T细胞，其包含权利要求1-56中任一项的核酸序列或权利要求57-58中任一项的载体。


61.一种药物组合物，其包含权利要求60的工程化T细胞和药学上可接受的载剂。


62.一种治疗有需要的个体中表达靶抗原的癌症的方法，其包括向该个体施用工程化T细胞，该工程化T细胞包含编码三功能T细胞-抗原偶联物(Tri-TAC)的核酸序列，该核酸序列包含：
(a)编码选择性结合所述靶抗原的配体的第一多核苷酸序列；
(b)编码...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托弗·W·赫尔森，乔纳森·布拉姆森，安娜·德沃尔金赫瓦，嘉琳娜·F·丹尼索瓦，克塞尼娅·贝兹韦尔布纳亚，肯尼斯·安东尼·牧瓦瓦司，
申请(专利权)人：麦克马斯特大学，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA