【技术实现步骤摘要】
专利
本申请涉及癌症的组合免疫治疗方法。
技术介绍
0、专利技术背景
1、癌症和常规癌症治疗剂目前造成很大的社会经济负担，表现在精神/身体压力、失去生命和增加的医疗保健成本方面。常规疗法显示出一些有益的临床结果，但具有往往会降低患者的生活质量的有害副作用[1]。需要更有效的癌症疗法，其具有更少和更轻的有害副作用。
2、众所周知，免疫系统可以有效地消除恶性肿瘤，而免疫疗法代表了一种有前景的癌症替代疗法[2]。
3、免疫细胞(例如对肿瘤相关抗原(taa)具有特异性的t细胞)具有摧毁肿瘤的潜力。由于天然肿瘤细胞更新或通过施用治疗性疫苗，可以在癌症患者中诱导这些细胞。但是，当这些细胞渗入肿瘤时经常被证明是无效的，并且它们通常表现出耗尽的(exhausted)和/或功能失调的表型，并且由于肿瘤诱导的局部免疫抑制而缺乏减少或破坏肿瘤所必需的细胞溶解功能[3-5]。因此，免疫抑制性肿瘤环境仍然是阻碍常规癌症免疫治疗剂诱导的反应的重要障碍。
4、基于检查点抑制剂的疗法已被用来减轻对肿瘤浸润淋巴细胞(til)的抑制性信号传导并激活内源性抗肿瘤反应[6,7]。检查点抑制剂在临床试验中已显示出疗效，但未在所有治疗的受试者中均观察到反应[8]。检查点抑制剂治疗依赖于既有的taa特异性t细胞的活化，但一些患者没有足够的既有taa特异性t细胞以在治疗诱导的再激活后导致肿瘤完全消退[9,10]。
5、taa特异性t细胞的过继细胞转移(act)是用于治疗恶性肿瘤的检查点抑制剂疗法的优异替代方案(
6、临床证据表明act在非实体癌(如b细胞淋巴瘤)中具有良好的抗肿瘤功效。事实上，人乳头瘤病毒反应性t细胞的输注也可以诱导hpv阳性转移性宫颈癌的消退[14]。该策略正在扩展至靶向非病毒肿瘤相关抗原，但仍有待改善以提高肿瘤浸润和实体瘤消退。
7、先前涉及act的工作已经表明，act的治愈潜力要求转移的细胞以足够的量和长期持久性渗入肿瘤才能杀死所有恶性细胞。临床证据表明，这些要求可以通过高剂量的过继转移的细胞(数十亿)来实现，这些细胞具有维持复制能力的最小分化表型[15]。但是，这两个目标相互冲突；产生高剂量的t细胞需要大量的体外扩增，这也会导致t细胞的终末分化和复制衰老[16]。实际上，常规act疗法使用终末分化的效应t细胞，并且需要对患者进行预先放疗或化疗以耗竭淋巴细胞群并允许更好地移植需要输注的数十亿细胞[17,18]。此外，需要进行il2治疗，以维持输注细胞的持久性和活化[19]。
8、最近的研究表明，较低分化的细胞(如中枢记忆t细胞)在act中显示出更好的成功率，表现在移植细胞的持久性和临床结果方面[15,20]。已经发表了一种从pbmc样品中产生taa特异性中枢记忆t细胞培养物的方法[21]，但该方案需要临床级细胞分选仪(这是劳动力密集型的和资源密集型的)以富集抗原特异性细胞(也参见美国专利申请公开号us2015/0023938)。本专利技术提供了一种产生抗原特异性中枢记忆t细胞的大的离体扩增的方法和一种从针对表达该抗原的肿瘤细胞的该抗原特异性中枢记忆t细胞引起侵袭性细胞溶解反应的体内方法。结合起来，这些方法构成了用于治疗癌症的过继性细胞疗法，其不需要使用细胞分选器或耗尽受试者的内源性t细胞群，因此代表了对现有疗法的显著改善。
技术实现思路
0、专利技术概述
1、本专利技术提供一种治疗哺乳动物(例如人)的癌症的方法，其包括过继性细胞转移以及随后进行的溶瘤病毒疫苗施用。在一些实施方案中，本专利技术提供了在有需要的受试者中治疗癌症的组合疗法，其包括(i)将肿瘤抗原特异性中枢记忆t(tcm)细胞过继细胞转移到受试者中，然后(ii)用表达被过继细胞转移(act)t细胞靶向的相同抗原的重组溶瘤病毒(ov)疫苗接种受试者，以诱导癌症破坏和消除。在优选的实施方案中，对act t细胞进行遗传修饰以表达对肿瘤抗原特异的一种或多种重组t细胞受体(tcr)或嵌合抗原受体(car)。在一些实施方案中，act t细胞是源自待治疗受试者的自体t细胞。优选地，该组合疗法不包括受试者被免疫耗竭(immunodepleted)的步骤。
2、本文描述的方法可用于治疗哺乳动物的癌症。本文所用的术语“癌症”包括任何癌症，包括但不限于黑素瘤、肉瘤、淋巴瘤、癌、脑癌(例如神经胶质瘤)、乳腺癌、肝癌、肺癌、肾癌、胰腺癌、食道癌、胃癌、结肠癌、结直肠癌、膀胱癌、前列腺癌和白血病。在一些方面，所述癌症是实体瘤。在其他方面，癌症是转移癌。
3、本文所使用的术语“哺乳动物”是指人类以及非人类哺乳动物，术语“过继性细胞转移”意在包括通过离体培养从外周血或肿瘤组织样本中提取的淋巴细胞而产生的细胞产物的输注。
4、在一个实施方案中，提供了产生肿瘤抗原特异性中枢记忆cd8+t细胞的方法，其包括离体细胞培养步骤，该步骤包括在存在肿瘤抗原、抗原呈递细胞(如树突细胞)、il21、il15和雷帕霉素并且优选不存在il12的条件下，培养来自pbmc或til的淋巴细胞。优选地，在培养之前从pbmc中除去cd25+细胞(调节性t细胞和活化的t细胞和b细胞)。肿瘤抗原可以是例如肿瘤相关抗原(taa)，它是肿瘤细胞中产生的在哺乳动物中引发免疫应答的物质。在一些实施方案中，肿瘤抗原是自身抗原。在其他实施方案中，肿瘤抗原是肿瘤特异性抗原，其对于该肿瘤是独特的并且不在正常细胞中表达或在正常细胞中以非常低的量表达(例如新生抗原(neo-antigen))。
5、在相关实施方案中，肿瘤抗原是组织特异性肿瘤抗原，与正常细胞相比，其在癌细胞中具有更高的表达，其非限制性实例包括酪氨酸酶、mart-1、gp100、trp-1/gp75和trp-2蛋白。在其他实施方案中，肿瘤抗原是肿瘤特异性共有抗原，其在肿瘤和睾丸中表达但在其他正常组织中不表达或以非常少的量表达(肿瘤睾丸抗原或ct抗原)，其非限制性实例包括bage、camel、mage-a1和ny-eso-1。在其他实施方案中，肿瘤抗原是肿瘤特异性独特抗原(新生抗原)，其仅在肿瘤细胞中表达，其非限制性实例包括cdk4、连环蛋白、半胱天冬酶-8、mum-1、mum-2、mum-3、mart-2、os-9、p14arf、gas7、gapdh、sirt2、gpnmb、snrp116、rbaf600、snrpd1、prdx5、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于治疗有此需要的受试者的癌症的组合疗法，其包括(i)向受试者施用包含CD8+T细胞群的过继细胞治疗剂(ACT)，其中至少约50％、优选至少约60％或至少约70％的CD8+T细胞显示中枢记忆表型并且对所述癌症表达的肿瘤抗原具有特异性，并且(ii)随后向受试者施用表达所述肿瘤抗原的复制性溶瘤病毒(OV)疫苗，优选溶瘤弹状病毒或痘苗病毒。
2.根据权利要求1所述的组合疗法，其中所述CD8+T细胞群是通过以下方法制备的：离体培养具有与所述受试者组织相容性表型的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)或外周血单核细胞(PBMC)、更优选自体PBMC，所述离体培养在存在IL-21组合物、所述肿瘤抗原和抗原呈递细胞(APC)的情况下进行以富集和编程抗原特异性CD8+T细胞，然后是包含抗CD3抗体和抗CD28抗体和IL2的快速扩增方案(REP)。
3.根据权利要求1的组合疗法，其中CD8+T细胞群是通过以下方法制备的：在存在所述肿瘤抗原、APC和包含IL21、IL15和雷帕霉素或基本上由IL21、IL15和雷帕霉素组成的组合物的情况下体外培养PBMC或TIL，优选培养约一至三周，
4.根据权利要求3的组合疗法，其中包含IL21、IL15和雷帕霉素的组合为或基本上由IL21、IL15和雷帕霉素组成的组合物不包含IL2。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合疗法，其中通过用对所述肿瘤抗原特异性的重组T细胞受体(TCR)或CAR转导PBMC并离体培养转导的PBMC来产生CD8+T细胞群。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的组合疗法，其中所述CD8+T细胞群通过离体培养CD25耗竭的PBMC产生。
7.根据权利要求3至6中任一项所述的组合疗法，其中IL21和IL15以约1ng/ml至约20ng/ml，优选约10ng/ml的浓度存在，并且雷帕霉素以约10ng/ml至约30ng/ml，优选约20ng/ml的浓度存在。
8.根据权利要求2至7中任一项所述的组合疗法，其中用于抗原特异性T细胞富集和编程的PBMC或TIL的离体培养之后是所述细胞在培养物中的离体扩增，优选在包含抗CD3抗体和抗CD28抗体和IL2的组合物中离体扩增，优选扩增至少一周至至少四周，其中在离体培养后不进行T细胞纯化步骤(例如细胞分选)。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合疗法，其中所述受试者未施用IL-2。
10.根据权利要求1-9中任一项的组合疗法，其中所述复制型溶瘤病毒是弹状病毒，优选是水泡病毒。
11.根据权利要求10的组合疗法，其中所述弹状病毒是重组或野生型Maraba病毒，优选Maraba MG1，或重组或野生型VSV，优选VSVdelta51。
12.根据权利要求10或11的组合疗法，其中所述弹状病毒通过血管内、优选静脉内给药于受试者。
13.根据权利要求1至9中任一项所述的组合疗法，其中所述复制型溶瘤病毒是野生型或重组痘苗病毒。
14.根据权利要求13的组合疗法，其中所述痘苗病毒是Wyeth株、Western Reserve株或Copenhagen株，优选具有胸苷激酶缺失和/或痘苗病毒生长因子基因缺失。
15.根据权利要求13或14的组合疗法，其中痘苗病毒通过血管内、肿瘤内或肌肉内或腹膜内给药。
16.根据权利要求1-15中任一项的组合疗法，其中在ACT疗法约1小时至约31天，优选约1天至约4周，更优选约1天至约3周，约1小时至约2周，约12小时至约48小时，约20小时至约28小时，或约24小时后将OV给予受试者。
17.根据权利要求1-16中任一项的组合疗法，其中所述受试者在接受ACT之前不经历淋巴细胞耗竭。
18.根据权利要求1-17中任一项的组合疗法，其中所述肿瘤抗原选自甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、CA 125、Her2、多巴色素互变异构酶(DCT)、GP100、Melan-A/MART-1、MAGE蛋白、BAGE蛋白、GAGE蛋白、NY-ESO1、WT-1、存活蛋白、酪氨酸酶、SSX2、细胞周期蛋白-A1、KIF20A、MUC5AC、Meloe、Lengsin、激肽释放酶4、IGF2B3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、HPV E6和HPV E7。
19.根据权利要求1-18中任一项...
【技术特征摘要】
1.用于治疗有此需要的受试者的癌症的组合疗法，其包括(i)向受试者施用包含cd8+t细胞群的过继细胞治疗剂(act)，其中至少约50％、优选至少约60％或至少约70％的cd8+t细胞显示中枢记忆表型并且对所述癌症表达的肿瘤抗原具有特异性，并且(ii)随后向受试者施用表达所述肿瘤抗原的复制性溶瘤病毒(ov)疫苗，优选溶瘤弹状病毒或痘苗病毒。
2.根据权利要求1所述的组合疗法，其中所述cd8+t细胞群是通过以下方法制备的：离体培养具有与所述受试者组织相容性表型的肿瘤浸润淋巴细胞(til)或外周血单核细胞(pbmc)、更优选自体pbmc，所述离体培养在存在il-21组合物、所述肿瘤抗原和抗原呈递细胞(apc)的情况下进行以富集和编程抗原特异性cd8+t细胞，然后是包含抗cd3抗体和抗cd28抗体和il2的快速扩增方案(rep)。
3.根据权利要求1的组合疗法，其中cd8+t细胞群是通过以下方法制备的：在存在所述肿瘤抗原、apc和包含il21、il15和雷帕霉素或基本上由il21、il15和雷帕霉素组成的组合物的情况下体外培养pbmc或til，优选培养约一至三周，或至少约一周，或至少约两周，或至少约三周，任选地随后在包含il21、il15和雷帕霉素的组合物或基本上由il21、il15和雷帕霉素组成的组合物中，且在不存在所述肿瘤抗原和apc的情况下，离体培养pbmc或til优选约一周，以富集和编程抗原特异性cd8+t细胞。
4.根据权利要求3的组合疗法，其中包含il21、il15和雷帕霉素的组合为或基本上由il21、il15和雷帕霉素组成的组合物不包含il2。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合疗法，其中通过用对所述肿瘤抗原特异性的重组t细胞受体(tcr)或car转导pbmc并离体培养转导的pbmc来产生cd8+t细胞群。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的组合疗法，其中所述cd8+t细胞群通过离体培养cd25耗竭的pbmc产生。
7.根据权利要求3至6中任一项所述的组合疗法，其中il21和il15以约1ng/ml至约20ng/ml，优选约10ng/ml的浓度存在，并且雷帕霉素以约10ng/ml至约30ng/ml，优选约20ng/ml的浓度存在。
8.根据权利要求2至7中任一项所述的组合疗法，其中用于抗原特异性t细胞富集和编程的pbmc或til的离体培养之后是所述细胞在培养物中的离体扩增，优选在包含抗cd3抗体和抗cd28抗体和il2的组合物中离体扩增，优选扩增至少一周至至少四周，其中在离体培养后不进行t细胞纯化步骤(例如细胞分选)。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合疗法，其中所述受试者未施用il-2。
10.根据权利要求1-9中任一项的组合疗法，其中所述复制型溶瘤病毒是弹状病毒，优选是水泡病毒。
11.根据权利要求10的组合疗法，其中所述弹状病毒是重组或野生型maraba病毒，优选maraba mg1，或重组或野生型vsv，优选vsvdelta51。
12.根据权利要求10或11的组合疗法，其中所述弹状病毒通过血管内、优选静脉内给药于受试者。
13.根据权利要求1至9中任一项所述的组合疗法，其中所述复制型溶瘤病毒是野生型或重组痘苗病毒。
14.根据权利要求13的组合疗法，其中所述痘苗病毒是wyeth株、western reserve株或copenhagen株，优选具有胸苷激酶缺失和/或痘苗病毒生长因子基因缺失。
15.根据权利要求13或14的组合疗法，其中痘苗病毒通过血管内、肿瘤内或肌肉内或腹膜内给药。
16.根据权利要求1-15中任一项的组合疗法，其中在act疗法约1小时至约31天，优选约1天至约4周，更优选约1天至约3周，约1小时至约2周，约12小时至约48小时，约20小时至约28小时，或约24小时后将ov给予受试者。
17.根据权利要求1-16中任一项的组合疗法，其中所述受试者在接受act之前不经历淋巴细胞耗竭。
18.根据权利要求1-17中任一项的组合疗法，其中所述肿瘤抗原选自甲胎蛋白(afp)、癌胚抗原(cea)、ca 125、her2、多巴色素互变异构酶(dct)、gp100、melan-a/...
【专利技术属性】
技术研发人员：万永红，斯科特·沃尔什，陈岚，奥马尔·塞勒姆，鲍里斯·西莫维奇，
申请(专利权)人：麦克马斯特大学，
类型：发明
国别省市：
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