【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体上涉及细菌二核苷酸环化酶及其在哺乳动物中的治疗用途。
技术介绍
1、sting途径是针对细菌、dna病毒和肿瘤细胞的主要先天免疫防御。在哺乳动物中，sting信号传导途径在抗微生物免疫和基因组完整性中发挥非常重要的作用。sting进化成结合称为环二核苷酸(cdn)的次级信使分子家族。这些分子在细菌世界中是普遍存在的，其中细菌使用它们作为重要的信号传导分子来调节许多重要的生命过程。细菌具有专门的酶，称为产生cdn的二核苷酸环化酶。在细菌感染期间，sting识别并且结合至微生物cdn，因此启动信号转导级联，信号转导级联驱动产生防御细菌感染所需的i型干扰素和其他促炎分子。环二核苷酸也是哺乳动物蛋白eradp的配体，哺乳动物蛋白eradp如sting在被这些分子激活时引发抗微生物免疫应答。
2、哺乳动物细胞还具有称为cgas的二核苷酸环化酶。该酶在细胞质中检测到病原体衍生的或自身dna时催化环gmp-amp(cgamp)的合成。内源cgamp类似地通过结合和激活sting刺激免疫应答。核酸在具有受损dna的恶性细胞的胞质溶胶中的不适当出现也可以激活cgamp的cgas产生。事实上，环二核苷酸(如cgamp)被癌细胞连续输出并且可以介导肿瘤免疫原性。肿瘤衍生的cgamp被转移至肿瘤免疫浸润物并且可以驱动免疫区室(包括树突状细胞)中的i型ifn信号传导。i型ifn信号传导已显示在驱动抗癌免疫中发挥关键性作用。
3、最近的工作表明驱动内皮细胞中的环二核苷酸摄取也有助于基于sting激动剂的治疗的成功。p>
4、其结果是，许多人类癌症获得cgas-sting信号传导途径中的缺陷以便逃避免疫检测，并且还比正常细胞更易受溶瘤dna病毒感染。
5、sting激动的cdn具有增加肿瘤的免疫原性的潜力。在临床前模型中，合成cdn的瘤内注射已经显示出驱动全身性抗癌反应。因此，合成的cdn作为抗癌治疗剂获得广泛关注，其中一些sting激动剂候选物实现临床发展。然而，在临床试验中已经观察到有限的功效和不利作用，这些临床试验已经部分地归因于在产生不良患者耐受性的非癌组织中的全身性sting激活。此外，有限的临床适应症仍然适用于sting激动剂，因为它们主要瘤内给予。
6、希望开发在治疗上利用细菌环二核苷酸的方法。
技术实现思路
1、本专利技术鉴定了细菌二核苷酸环化酶，细菌二核苷酸环化酶可以在哺乳动物细胞中表达，并且在这些细胞的细胞质中保持组成性功能，连续产生环二核苷酸。此外，表达细菌二核苷酸环化酶的转基因可通过将这些转基因引入靶哺乳动物细胞(例如肿瘤细胞)中以增强此类细胞的免疫原性而在治疗上使用。
2、因此，在本专利技术的一个方面，提供了在哺乳动物细胞中组成性表达细菌二核苷酸环化酶的方法，包括将编码细菌二核苷酸环化酶的转基因引入哺乳动物细胞并使哺乳动物细胞经受合适的生长条件的步骤。
3、在本专利技术的另一个方面，提供了在癌症或肿瘤细胞中表达细菌二核苷酸环化酶的方法，包括向癌症或肿瘤细胞施用编码二核苷酸环化酶的转基因。
4、在本专利技术的另一个方面，提供了治疗哺乳动物癌症的方法，包括向哺乳动物给予表达二核苷酸环化酶的载体。
5、在本专利技术的另一个方面，提供了可表达地掺入编码细菌二核苷酸环化酶的转基因的溶瘤病毒载体。
6、在本文中通过参考以下附图详细描述本专利技术的这些和其他方面。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种在哺乳动物细胞中组成性表达细菌二核苷酸环化酶或其功能结构域的方法，包括用编码所述细菌二核苷酸环化酶的转基因转染所述哺乳动物细胞，以及使所述哺乳动物细胞经受合适的生长条件。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述哺乳动物细胞是选自嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞和淋巴细胞的免疫细胞。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述哺乳动物细胞是癌细胞或肿瘤细胞。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述细菌二核苷酸环化酶催化环二核苷酸的合成，所述环二核苷酸选自c-di-GMP、c-di-AMP和cGAMP。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述细菌二核苷酸环化酶来自霍乱弧菌、单核细胞增生李斯特菌或结核分枝杆菌。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，所述功能结构域包括所述细菌二核苷酸环化酶的催化结构域。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，将所述转基因掺入质粒、粘粒或病毒载体中。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述病毒载体是DNA病毒或RNA病毒。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中，所述病毒载体是溶瘤病毒。
11.一种在肿瘤细胞或癌细胞中表达细菌二核苷酸环化酶的方法，包括向所述细胞中引入编码所述二核苷酸环化酶的转基因。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，将所述转基因掺入病毒载体中。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其中，所述病毒载体具有复制能力。
14.根据权利要求11-13中任一项所述的方法，其中，所述病毒载体是溶瘤病毒。
15.一种治疗哺乳动物中癌症的方法，包括向哺乳动物给予表达二核苷酸环化酶的载体。
16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述载体是具有复制能力的病毒载体。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中，所述载体是溶瘤病毒。
18.根据权利要求15-17中任一项所述的方法，其中，所述载体静脉内、肌内、瘤内或鼻内给予。
19.根据权利要求15-18中任一项所述的方法，其中，所述载体与免疫治疗药物一起给予。
20.一种可表达地掺入编码细菌二核苷酸环化酶的转基因的溶瘤病毒载体。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种在哺乳动物细胞中组成性表达细菌二核苷酸环化酶或其功能结构域的方法，包括用编码所述细菌二核苷酸环化酶的转基因转染所述哺乳动物细胞，以及使所述哺乳动物细胞经受合适的生长条件。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述哺乳动物细胞是选自嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞和淋巴细胞的免疫细胞。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述哺乳动物细胞是癌细胞或肿瘤细胞。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述细菌二核苷酸环化酶催化环二核苷酸的合成，所述环二核苷酸选自c-di-gmp、c-di-amp和cgamp。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述细菌二核苷酸环化酶来自霍乱弧菌、单核细胞增生李斯特菌或结核分枝杆菌。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，所述功能结构域包括所述细菌二核苷酸环化酶的催化结构域。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，将所述转基因掺入质粒、粘粒或病毒载体中。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，所述病毒载体具有复制能力。
9.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：B·利克蒂，F·王，M·阿瑟尔顿，J·拜尔，R·辛加拉韦卢，C·伊利科维，
申请(专利权)人：麦克马斯特大学，
类型：发明
国别省市：
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