一种获取酵母中核糖体新生肽链复合物的方法技术

本发明专利技术涉及一种获取酵母中的核糖体新生肽链复合物的方法。所述方法包括以下步骤：（1）获取酵母样本并利用放线菌酮溶液进行前期处理；（2）将经过前期处理的酵母样本重悬于缓冲溶液II中并离心获得沉淀；（3）将步骤（2）中获得的沉淀重悬于酵母裂解液中并分装成第一份溶液和第二份溶液；（4）从步骤（3）中的第一份溶液中提取总RAN，从第二份溶液中提取RNC。利用根据本发明专利技术的方法，能够完整获取酵母中的核糖体新生肽链复合物，其与传统提取实验方法相比克服了提取酵母RNC提取操作复杂、浓度低、质量差、杂质多等缺陷。

【技术实现步骤摘要】
一种获取酵母中核糖体新生肽链复合物的方法
本专利技术涉及翻译组测序的
，尤其是涉及一种获取酵母中核糖体新生肽链复合物的方法。
技术介绍
巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达系统是近年来发展起来的较为完善的，被广泛用来表达外源蛋白的甲醇营养型酵母表达系统，外源蛋白在毕赤酵母中的过量表达，经常伴随着其他基因表达水平的改变，通过分析相关基因表达水平的差异，便于找到影响外源蛋白表达量的关键问题。然而，与其他细胞相比，毕赤酵母由于具有较坚固的细胞壁，尤其是处于稳定期的毕赤酵母细胞，其细胞壁更厚、通透性差，这些因素在去除细胞壁的方法中，都会对细胞内基因蛋白的表达情况造成影响。细胞壁的阻碍作用不仅增加了RNA的提取难度，而且低质量RNA直接会影响后续基因表达水平测定的准确性。翻译组学，是近年来新发现的一个机体内调控的重要学科。根据中心法则原理，DNA转录成mRNA，而mRNA再翻译成蛋白质多肽。在mRNA根据密码子信息进行翻译的过程中，结合在mRNA上的核糖体会在RNA链上进行移动，与tRNA逐渐结合形成蛋白质多肽链（新生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种获取酵母中核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n（1）获取酵母样本并利用放线菌酮溶液进行前期处理；/n（2）将经过前期处理的酵母样本重悬于缓冲溶液II中并离心获得沉淀；/n（3）将步骤（2）中获得的沉淀重悬于酵母裂解液中并分装成第一份溶液和第二份溶液；/n（4）从步骤（3）中的第一份溶液中提取总RAN，从第二份溶液中提取RNC。/n

【技术特征摘要】
1.一种获取酵母中核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）获取酵母样本并利用放线菌酮溶液进行前期处理；
（2）将经过前期处理的酵母样本重悬于缓冲溶液II中并离心获得沉淀；
（3）将步骤（2）中获得的沉淀重悬于酵母裂解液中并分装成第一份溶液和第二份溶液；
（4）从步骤（3）中的第一份溶液中提取总RAN，从第二份溶液中提取RNC。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酵母为毕赤酵母。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述前期处理包括将酵母样本在50-200ug/mL的放线菌酮溶液中室温孵育2-10min，然后在缓冲液I中孵育5-20min并离心获得沉淀。


4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述缓冲溶液I为含有10-30mMpH6-8的磷酸二氢钾和5-20mM二硫苏糖醇（DTT）和50-200ug/mL放线菌酮的溶液。


5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述缓冲溶液II为含有10-30mMpH6-8的磷酸二氢钾、1-2M山梨糖醇、0.2-1mMMgCl2、100-200U/mL酵母裂解酶、50-200ug/mL放线菌酮的溶液。


6...

【专利技术属性】
技术研发人员：董鸣，何慧琼，彭龙，
申请(专利权)人：武汉承启医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42