一种含泥土检材中微量DNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种含泥土检材中微量DNA的提取方法，包括如下步骤：(1)将含泥土检材放入离心管中，加入裂解液进行90‑100℃裂解处理，离心后得到上清液；(2)加入羧酸基阳离子树脂，混匀后60‑90℃金属浴加热处理，离心后吸取上清液；(3)加入吸附液、磁珠悬浊液，混匀，磁吸后吸弃所有液体；(4)向离心管中加入洗涤液Ⅰ，洗涤，磁吸，弃上清，之后使用洗涤液II重复上述操作，再使用洗涤液III重复上述操作；(5)离心管彻底干燥后，加入高纯水震荡混匀，65℃金属浴温浴10分钟，混匀，磁吸后得到DNA溶液。本方法可以有效地从含泥土检材中提取微量DNA，灵敏度高、抗杂质干扰能力强、检出率高，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种含泥土检材中微量DNA的提取方法
本专利技术属于生物和医学检验
，尤其涉及一种含泥土检材中微量DNA的提取方法。
技术介绍
DNA检验技术是目前法医检验技术的重要组成，通过对案件现场采集的DNA样本进行测序分析，短串联重复序列(STR)分型是法医学个体识别和亲子鉴定的主要技术手段。目前，法医DNA检验包含DNA样本的采集、DNA提取和纯化、PCR扩增和分型检测等步骤，其中微量DNA的提取和纯化是后续检验的前提，对能否获得有效STR分型起到至关重要的作用。目前各种常用的DNA纯化方法可分成两类：液相纯化和固相纯化。液相纯化法包括有机试剂提取法、Chelex-100法等，有机试剂提取法步骤繁琐、耗时、检材易污染。Chelex-100法不足的是提取的DNA纯化不高，易受检材泥土中的金属离子、深色燃料等PCR抑制物的干扰。近年来，DNA固相提取方法发展迅速，在DNA提取领域占有非常重要的地位。这类方法一般需要四个主要步骤：1、裂解细胞使细胞膜、核膜破裂以释放DNA；2、释放的DNA与固相载体结合；3、通过洗涤去除杂质；4、洗脱得到纯化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含泥土检材中微量DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)裂解：将20mg含泥土检材放入离心管中，加入200-400μL裂解液，90-100℃金属浴裂解5-15分钟，10000-12000rpm离心2-4分钟后吸取上清液至另一个离心管中，所述裂解液包括3.0-7.0mol/L异硫氰酸胍、10-40mmol/L Tris-HCl、5-15mmol/L吐温80、2-5mmol/L EDTA和0.05-0.5mmol/L氨基磷酸酯衍生物，所述裂解液用1mol/L NaOH溶液将pH值调至7.5-8.5；/n(2)向步骤(1)得到的上清液中加入10-20mg羧酸基阳离子树脂，混匀后...

【技术特征摘要】
1.一种含泥土检材中微量DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)裂解：将20mg含泥土检材放入离心管中，加入200-400μL裂解液，90-100℃金属浴裂解5-15分钟，10000-12000rpm离心2-4分钟后吸取上清液至另一个离心管中，所述裂解液包括3.0-7.0mol/L异硫氰酸胍、10-40mmol/LTris-HCl、5-15mmol/L吐温80、2-5mmol/LEDTA和0.05-0.5mmol/L氨基磷酸酯衍生物，所述裂解液用1mol/LNaOH溶液将pH值调至7.5-8.5；
(2)向步骤(1)得到的上清液中加入10-20mg羧酸基阳离子树脂，混匀后，60-90℃金属浴10-20分钟，7000-10000rpm离心2-4分钟，吸取上清液转到另一个离心管中；
(3)DNA吸附：向步骤(2)得到的上清液中加入300-600μL吸附液和10-20μL磁珠悬浊液，混匀，磁吸1分钟，吸弃所有液体，所述吸附液包括2.0-5.0mol/L盐酸胍、10-40mmol/LTris-HCl和1.5-2.5mol/L乙二醇，并且所述吸附液通过醋酸-醋酸钠缓冲溶液将pH值调至3-4之间，所述磁珠悬浊液包含分散在高纯水中质量百分比浓度为9％的、尺寸为100-2000nm的二氧化硅磁性复合微粒，所述二氧化硅磁性复合微粒是由两个或更多个铁氧体-二氧化硅核壳纳米粒子交联而成的交联体，并且...

【专利技术属性】
技术研发人员：车鑫，王占海，鲁斌，李军，
申请(专利权)人：宁波市博坤生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33