用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物和方法技术

本发明专利技术提供了一种用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物及其应用和方法。试剂组合物包括尿素、十二烷基硫酸钠、反式‑1，CDTA、Tris‑HCl、抗坏血酸钠、对羟基苯甲酸丙酯、重氮烷基咪唑脲、乙醇、蔗糖和蛋白酶K。将所述试剂组合物与人体唾液混合均匀后常温保存。本发明专利技术所述试剂组合物和保存方法可以抑制核酸酶活性，避免其受到外界微生物的污染或自身氧化，从而保证基因组DNA的纯度和完整度，而且保存时间长，适用保存温度广，能够确保唾液样本在各采集地之间运输过程中的稳定性。

【技术实现步骤摘要】
用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物和方法
本专利技术涉及生物
，更为具体的是涉及用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物和方法。
技术介绍
目前分子生物学检测技术已日益用于法医、军事、人类医药以及科学研究等多项领域。如在人类健康方面，通过对检测者的血液、其他体液或细胞中的DNA提取，并进行核酸序列扩增，进而检测其目的序列或易感位点收集相关基因信息后，通过对已知信息的解读使人们了解自己的基因信息，预知身体患病的风险，从而改善自己的生活环境与习惯，避免或延缓疾病的发生。又如在法医鉴定领域，通过提取家属的DNA可对死者的身份进行辨认。目前用于提取基因组DNA的体液通常来自于血液，但使用血液作为检测来源具有很多缺点。首先，血液中的DNA主要来自于白细胞，而血液中存在大量不含有DNA的红细胞，所以在提取纯度较高的DNA时需要去除红细胞的影响。其次血液的采集需要经过训练的专业人员操作。此外，血液采集作为一种侵入性方式，经常给供试者带来一定程度的不适与疼痛，再者，血液采集过程还需要避免一些血源性病原体与细菌造成的感染，并且采集好的血液必须要冷藏或尽快进行DNA提取。而与其相比，唾液作为一种人体较易获得的体液，采集更为方便。纯净的唾液并不含有人体DNA，但由于口腔上皮细胞处于不断的新陈代谢，每时每刻都存在细胞脱落，因此，通过唾液可以得到DNA。相比于血液采集，唾液采集具有以下明显优势：1无刺痛，无伤害取样，避免了对供试者造成不必要的痛苦；2操作简便，采集人员不需要进行专业培训，可自行取样寄送；3适用广泛，一些人群不适合采血，例如老人与小孩等，另外一些人群则抗拒采血，如晕血和精神疾病患者；4廉价高效，节省了注射器与抗凝管等耗材的费用；5运输方便，若要进行大范围长距离的运输，唾液显然更适合在实验室与各个收集地之间传递。用于基因检测的DNA首先应保证其纯度与完整性，如果DNA发生断裂降解等损伤，则势必会直接影响到后续实验，进而影响分析结果的准确性；而唾液中含有的有机物与细菌等也会对细胞DNA的完整性造成一定影响；另外唾液保存液作为唾液DNA的保存介质，也存在被氧化和微生物污染的风险。微生物会将DNA作为养料，甚至分泌出促进DNA加速降解的酶，破坏DNA的完整性，进而导致后续实验数据的可信度大大降低。因此，将唾液较好的保存起来，对于唾液作为基因组DNA的来源应用于基因检测中将具有至关重要左右。而就目前市场上的大部分唾液保存液都无法很好的保证唾液DNA的纯度与完整性，而市面上较好的唾液保存液又无法对唾液DNA进行长期保存。因此，研究开发一种保存效果好，保存方便，保存时间长的人体唾液样本保存液具有十分重要的意义。
技术实现思路
为克服现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种保存人体体液如唾液中的DNA组合物以及其制备方法。本专利技术涉及从人类体液，如唾液的样品中提取核酸的试剂组合物，所述试剂组合物包括变性剂、去污剂、金属离子螯合剂、还原剂、抑菌剂以及缓冲剂和蛋白酶，使得样品中的核酸在室温条件下稳定保存至少24个月，并可直接用于聚合酶链反应、基因检测等下游实验而无需其他处理。具体的，所述组合物中包含尿素、十二烷基硫酸钠、反式-1，2-环已二胺四乙酸(CDTA)、Tris-HCl、抗坏血酸钠、对羟基苯甲酸丙酯、重氮烷基咪唑脲、乙醇、蔗糖和蛋白酶K。更为具体的，为实现上述专利技术目的，本专利技术采取的技术方案包括：提供一种用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物，包括变性剂、去污进一步的，包括Tris-HCl、尿素、SDS、CDTA、乙醇、NaAc、对羟基苯甲酸丙酯、重氮烷基咪唑脲、抗坏血酸钠、蔗糖和蛋白酶K。进一步的，包括CDTA1-10mmol/L；乙醇10％-50％；NaAc0.1-1mol/L；对羟基苯甲酸丙酯1-5mg/mL；重氮烷基咪唑脲1-5mg/mL；抗坏血酸钠0.01-0.5mol/L；蔗糖1％-10％。进一步的，包括PH为6.5-8.5的Tris-HCl0.05-0.5mol/L；尿素0.1-1mol/L；SDS0.1％-1％；CDTA1-10mmol/L；乙醇10％-50％；NaAc0.1-1mol/L；对羟基苯甲酸丙酯1-5mg/mL；重氮烷基咪唑脲1-5mg/mL；抗坏血酸钠0.01-0.5mol/L；蔗糖1％-10％；蛋白酶K10ug/mL，体系PH7-9。进一步的，包括PH8.0的Tris-HCl0.2mol/L；尿素0.45mol/L；SDS0.6％；CDTA3.6mmol/L；乙醇40％；对羟基苯甲酸丙酯2mg/mL；重氮烷基咪唑脲2mg/mL；醋酸钠0.67mol/L；抗坏血酸钠0.05mol/L；蔗糖4％；蛋白酶K10ug/mL；体系PH8.0。本专利技术还提供所述的试剂组合物在保存人类唾液中核酸完整性的应用。本专利技术还提供了一种用于保存人类唾液中核酸完整性的方法，包括提供所述的试剂组合物，并将所述试剂组合物与人体唾液样本混合。进一步的，试剂组合物与人体唾液样本混合按1:1混合均匀。进一步的，混合均匀后常温保存。本专利技术中提供的人体唾液保存组合物中引入的CDTA是强效金属离子螯合剂，一方面可以螯合唾液中本身含有的Mg、Ga等二价金属阳离子，抑制核酸酶的活性，防止DNA被降解，另一方面是抑制以金属离子为基础的氧化还原反应的发生；引入的醋酸钠可以沉淀部分裂解细胞释放的DNA防止悬浮断裂，同时可以提供保证DNA稳定的弱碱性环境；引入的对羟基苯甲酸丙酯和重氮烷基咪唑脲，能够较好的抑制微生物菌落的生长而不会破坏DNA，且两者配合使用，能够构成非常广谱的抗菌体系，有效抑菌杀菌，防止微生物的污染及对DNA的破坏，可以延长样本的保存时间；引入的乙醇，不仅能破坏蛋白质的结构，起到变性剂的作用而且同时在另一方面能抑制微生物的生长；引入的蔗糖，可以起到增加体系粘度，维持适当渗透压达到防止DNA受机械力损伤的作用；最关键的是引入了强还原剂抗坏血酸钠，它是一种内源性自由基清除剂，能够起到抗氧化作用，其本身在水溶液中随着时间的延长会发生变色反应，逐渐从无色变色为黄色，以此可以指示保存液的保存时间。综上，本专利技术通过引入上述组分，按照设定配比配合使用，达到了使人体唾液样本中的DNA不会被核酸酶以及其他外界条件产生的因素进行酶解或氧化从而导致DNA断裂不完整，或者被污染而导致DNA纯度低的问题，同时也能维持唾液样本处于适宜的条件下，如PH、体系粘度等而使唾液样本DNA能长期稳定保存，达到较好较长时间保存唾液样本的目的。本专利技术的人体唾液保存用组合物用于保存人体唾液样本，可以抑制核酸酶活性，避免其受到外界微生物的污染或自身氧化，从而保证基因组DNA的纯度和完整度，而且保存时间长，适用保存温度广，能够确保唾液样本在各采集地之间运输过程中的稳定性。附图说明图1为从实施例1制备的人体唾液保存用组合物于室温保存不同时间后的唾液样本中抽提的基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图，图中：M：HindIIIMarker；1：室温放置3d；2：室温放置7d；3：室温放置14d本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物，包括变性剂、去污剂、金属离子螯合剂、还原剂、抑菌剂以及缓冲剂和蛋白酶。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物，包括变性剂、去污剂、金属离子螯合剂、还原剂、抑菌剂以及缓冲剂和蛋白酶。


2.根据权利要求1所述的试剂组合物，其特在在于，包括Tris-HCl、尿素、SDS、CDTA、乙醇、NaAc、对羟基苯甲酸丙酯、重氮烷基咪唑脲、抗坏血酸钠、蔗糖和蛋白酶K。


3.根据权利要求2所述的试剂组合物，其特在在于，包括CDTA1-10mmol/L；乙醇10％-50％；NaAc0.1-1mol/L；对羟基苯甲酸丙酯1-5mg/mL；重氮烷基咪唑脲1-5mg/mL；抗坏血酸钠0.01-0.5mol/L；蔗糖1％-10％。


4.根据权利要求2所述的试剂组合物，其特征在于，包括PH为6.5-8.5的Tris-HCl0.05-0.5mol/L；尿素0.1-1mol/L；SDS0.1％-1％；CDTA1-10mmol/L；乙醇10％-50％；NaAc0.1-1mol/L；对羟基苯甲酸丙酯1-5mg/mL；重氮烷基咪唑脲1-5mg/mL；抗坏血酸钠0.01-0.5mol/L；...

【专利技术属性】
技术研发人员：林源吉，丁佳女，叶俊波，
申请(专利权)人：杭州百迈生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33