【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及核酸提取，具体涉及一种磁珠法核酸提取试剂盒及核酸提取方法。
技术介绍
1、核酸提取是从生物样本中提取dna(脱氧核糖核酸)或rna(核糖核酸)的过程，是分子生物学中一项基础而重要的技术。高效的核酸提取技术为基因组分析、疾病诊断、遗传多样性研究、个性化医疗、疫苗开发和分子克隆等提供纯净和高质量的核酸材料，有助于深入了解细菌生物学特性、疾病的发生机制以及开展相关的检测和研究工作，对生物学研究、医学诊断、生物技术等众多领域具有至关重要的意义。
2、传统的细菌核酸提取方法主要包括酚氯仿抽提法、煮沸法和trlzol法等。酚氯仿抽提法是早期较为常用的方法，但操作繁琐、耗时较长，且对实验人员的技术要求较高，同时有机溶剂的使用存在一定的安全风险。煮沸法虽然简单快速，但提取的核酸纯度和质量往往不够理想，容易受到杂质的干扰。trlzol法提取效率高效，是一种广泛用于核酸提取的试剂，但高成本和耗时长成为大规模核酸提取和高通量实验限制因素。随着科技的不断进步，出现了一系列更为先进和高效的核酸提取技术。
3、磁珠法逐渐成为一种备受青睐的方法。磁珠法基于磁珠表面特定的化学修饰，能够特异性地结合核酸分子。磁珠具有超顺磁性，在磁场作用下可以快速聚集和分离，从而实现核酸与其他细胞组分的有效分离。磁珠法作为传统提取方法的延伸，弥补了传统核酸提取劣势，具有以下优点：
4、第一方面，磁珠法具有极高的核酸提取效率，磁珠表面的特异性结合位点能够高效地捕获目标核酸分子，大大减少了核酸的损失。第二方面，磁珠法具有良好的特异性和
5、现有的磁珠法核酸提取虽有众多益处，却也不乏局限性：第一，现有磁珠法在裂解过程需要生物活性酶辅助裂解，生物酶成本高，易失活，不便于试剂盒的常温储存和运输。第二，在裂解结合过程中通常需额外加入异丙醇，促进核酸与磁珠结合，异丙醇对人体会产生一定危害，人体吸入或皮肤接触异丙醇会引起头痛、恶心或呼吸困难等。第三，提取裂解时间长，核酸降解风险高，影响核酸提取效率。
6、因此，有必要开发一种低成本、高通量、高效率的磁珠法核酸提取试剂盒和核酸提取方法。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的上述技术问题，本专利技术提供一种磁珠法核酸提取试剂盒和核酸提取方法，裂解成本低，对操作人员的危害性低。
2、本专利技术第一方面公开了磁珠法核酸提取试剂盒，包括磁珠液、裂解结合液、第一洗涤液、第二洗涤液和洗脱液，其中，所述裂解结合液包括：盐酸胍、柠檬酸钠、硫酸葡聚糖钠盐和氯化钠。
3、优选的，裂解结合液还包括triton x-100、tcep、氢氧化钠和edta，裂解结合液的ph为5.5-6.8。
4、优选的，裂解结合液各成分的含量为：2-6m盐酸胍、0.01-0.1m柠檬酸钠、0.5m-3m氯化钠、0.05-0.1％w/v硫酸葡聚糖钠盐、0.1-1m氢氧化钠、0.01-0.5m edta、1-10％v/vtriton x-100和0.01-0.5m tcep，ph 5.5-6.8。
5、优选的，第一洗涤液的组成为：0.01m-0.1m edta、0.01m-0.1m tris、0.5m-4m盐酸胍和50％乙醇溶液，ph 6.5-7.0。
6、优选的，第二洗涤液的组成为：70％乙醇溶液，ph 7.0-7.5。
7、优选的，磁珠液包括10-100mg/ml磁珠和去离子水，所述磁珠为硅羟基磁珠、粒径为200nm。
8、优选的，裂解结合液由以下组分组成：2.5m盐酸胍、0.01m柠檬酸钠、2m氯化钠、0.05％硫酸葡聚糖钠盐、0.1m氢氧化钠、0.05m edta、0.5％ triton x-100、0.05m tcep；
9、第一洗涤液由以下组分组成：0.02m edta、0.03m tris、0.5m盐酸胍、20％乙醇溶液；
10、第二洗涤液由以下组分组成：70％乙醇溶液；
11、洗脱液为depc水。
12、本专利技术第二方面提供基于上述试剂盒的核酸提取方法，包括以下步骤：
13、将200-400μl样本加入到800-1000μl裂解结合液中；
14、取100μl磁珠液加入到裂解结合液中，混匀并孵育，孵育结束后分离磁珠，弃上清；
15、加入800-1000μl第一洗涤液漂洗后，分离磁珠，弃上清；
16、加入800-1000μl第二洗涤液漂洗后，分离磁珠，弃上清；
17、加入80-100μl洗脱液，分离磁珠，取洗脱上清。
18、优选的，裂解结合液的孵育温度为60℃，孵育时长为600-1800秒；第一洗涤液与磁珠的孵育时长为100-200秒；第二洗涤液与磁珠的孵育时长时长为60-150秒；洗脱液与磁珠的孵育时长为180-600秒，孵育温度为60℃。
19、优选的，通过磁珠纯化仪提取样本的核酸，核酸提取方法为：
20、在多孔深孔板中依次加入以下试剂：第一列孔位中加入磁珠液、第二列孔位中加入裂解结合液、第三列孔位中加入第一洗涤液、第四列孔位中加入第二洗涤液、以及第五列孔位中加入洗脱液；
21、将样本加入到第二列孔位后，将多孔深孔板放入磁珠纯化仪内，并安装磁棒套；
22、设定并运行提取程序；
23、取出多孔深孔板，并从第五列孔位中取出洗脱上清；
24、所述提取程序的步骤包括：
25、步骤1：30秒内，将第一列孔位的磁珠转移到第二列孔位内，并混匀；
26、步骤2-a：在60℃下保持600-1800秒；
27、步骤2-b：30秒内，将磁珠从第二列孔位转移到第三列孔位中，并混匀；
28、步骤3-a：保持120秒；
29、步骤3-b：30秒内，将磁珠从第三列孔位转移到第四列孔位中，并混匀；
30、步骤4-a：保持90秒；
31、步骤4-b：30秒内，将磁珠从第四列孔位转移到第五列孔位中，并混匀；
32、步骤5：在60℃下保持180-600秒；
33、步骤6：在30秒内，将磁珠从第五列孔位转移到第四列孔位中。
34、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：细胞裂解与磁珠结合同步进行，有效缩短提取时间，提高了本申请磁珠法核酸提取试剂盒的效率；无需本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，包括磁珠液、裂解结合液、第一洗涤液、第二洗涤液和洗脱液，
2.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，裂解结合液还包括Triton X-100、TCEP、氢氧化钠和EDTA，
3.根据权利要求2所述的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，裂解结合液各成分的含量为：2-6M盐酸胍、0.01-0.1M柠檬酸钠、0.5M-3M氯化钠、0.05-0.1％w/v硫酸葡聚糖钠盐、0.1-1M氢氧化钠、0.01-0.5M EDTA、1-10％v/vTriton X-100和0.01-0.5M TCEP，pH 5.5-6.8。
4.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，第一洗涤液的组成为：0.01M-0.1M EDTA、0.01M-0.1M Tris、0.5M-4M盐酸胍和50％乙醇溶液，pH 6.5-7.0。
5.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，第二洗涤液的组成为：70％乙醇溶液，pH 7.0-7.5。
6.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取试剂
7.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，裂解结合液由以下组分组成：2.5M盐酸胍、0.01M柠檬酸钠、2M氯化钠、0.05％w/v硫酸葡聚糖钠盐、0.1M氢氧化钠、0.05M EDTA、0.5％v/v Triton X-100和0.05M TCEP；
8.一种基于权利要求1-7任一项所述磁珠法核酸提取试剂盒的核酸提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的核酸提取方法，其特征在于，裂解结合液的孵育温度为60℃，孵育时长为600-1800秒；
10.根据权利要求9所述所述的核酸提取方法，其特征在于，通过磁珠纯化仪提取样本的核酸，核酸提取方法为：
...【技术特征摘要】
1.一种磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，包括磁珠液、裂解结合液、第一洗涤液、第二洗涤液和洗脱液，
2.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，裂解结合液还包括triton x-100、tcep、氢氧化钠和edta，
3.根据权利要求2所述的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，裂解结合液各成分的含量为：2-6m盐酸胍、0.01-0.1m柠檬酸钠、0.5m-3m氯化钠、0.05-0.1％w/v硫酸葡聚糖钠盐、0.1-1m氢氧化钠、0.01-0.5m edta、1-10％v/vtriton x-100和0.01-0.5m tcep，ph 5.5-6.8。
4.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，第一洗涤液的组成为：0.01m-0.1m edta、0.01m-0.1m tris、0.5m-4m盐酸胍和50％乙醇溶液，ph 6.5-7.0。
5.根据权利要求1所述的磁珠法核酸提取试剂盒...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡伶飞，郑宜文，丁佳女，
申请(专利权)人：杭州百迈生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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