一种基于MB-PCR快速检测柱状黄杆菌的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于MB‑PCR快速检测柱状黄杆菌的试剂盒及检测方法，属于生物技术领域。所述试剂盒包括MB‑PCR反应液、酶混合液、阴性质控品、阳性质控品，其中所述MB‑PCR反应液包括MgCl<subgt;2</subgt;、dNTP、(NH<subgt;4</subgt;)<subgt;2</subgt;SO<subgt;4</subgt;、Tri‑HCl、dNTP、水以及核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物、如SEQ ID NO.2所示的下游引物、如SEQ ID NO.3所示的MB探针。同时本发明专利技术还提供了使用该试剂盒检测柱状黄杆菌的方法，不仅在27min内就能快速检测柱状黄杆菌，该试剂盒还具有高灵敏度、高特异性的特点，检测结果准确可靠。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体涉及一种基于mb-pcr快速检测柱状黄杆菌的试剂盒及检测方法。

技术介绍

1、柱状黄杆菌（flavobacterium cloumnare）属于属黄杆菌目、黄杆菌科、黄杆菌属，是一种严格需氧的革兰阴性菌，广泛存在于世界各地的水体和土壤环境中，能感染多种淡水鱼类，包括鲑科、鲤科、鲇科、鲈科等种属，形成烂鳃和体表溃疡的典型症状，带来高死亡率，给水产养殖业带来了重大经济损失。为了治疗柱状黄杆菌感染，滥用抗生素从而导致病原菌产生了耐药性，使鱼病治疗更加困难，同时耐药细菌还可能通过食物链传递到更高等的动物，甚至威胁人类健康。

2、目前，对于柱状黄杆菌的鉴定，一般有细菌生长形态观察、生化鉴定法和血清凝集反应等方法，然而这些方法对细菌纯度和含量要求较高，结果准确度不高，操作繁琐，应用有限。随着细菌鉴定技术的发展以及对检测结果准确度的需求，分子生物学方法逐渐应用到细菌的鉴定中，包括dna同源比对法、dna-rrna原位杂交法、多重pcr技术等，这些方法虽然特异性高，且操作十分简单，对仪器设备要求低，能快速准确的鉴定出病原，但是杂交不稳定本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于MB-PCR快速检测柱状黄杆菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括MB-PCR反应液、酶混合液、阴性质控品、阳性质控品，其中所述MB-PCR反应液包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物、如SEQ ID NO.2所示的下游引物、如SEQ ID NO.3所示的MB探针。

2.根据权利要求1所述的一种基于MB-PCR快速检测柱状黄杆菌的试剂盒，其特征在于，所述上游引物和下游引物的工作浓度为0.2μM，MB探针的工作浓度为0.1μM。

3.根据权利要求1所述的一种基于MB-PCR快速检测柱状黄杆菌的试剂盒，其特征在于，所MB探针的3’端标记有荧光...

【技术特征摘要】

1.一种基于mb-pcr快速检测柱状黄杆菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括mb-pcr反应液、酶混合液、阴性质控品、阳性质控品，其中所述mb-pcr反应液包括核苷酸序列如seq id no.1所示的上游引物、如seq id no.2所示的下游引物、如seq id no.3所示的mb探针。

2.根据权利要求1所述的一种基于mb-pcr快速检测柱状黄杆菌的试剂盒，其特征在于，所述上游引物和下游引物的工作浓度为0.2μm，mb探针的工作浓度为0.1μm。

3.根据权利要求1所述的一种基于mb-pcr快速检测柱状黄杆菌的试剂盒，其特征在于，所mb探针的3’端标记有荧光淬灭基团，5’端分别标记有荧光报告基团；所述荧光报告基团为fam，所述荧光淬灭基团为dabcyl。

4.根据权利要求1所述的一种基于mb-pcr快速检测柱状黄杆菌的试剂盒，其特征在于，所述mb-pcr反应液还包括工作浓度为10-100mm kcl、1-50mm且ph为7.5-8.5的tri-hcl、1-3mm mgcl2、1-15mm mgso4、1-2 mm dn...

【专利技术属性】
技术研发人员：付英豪，谭杰峰，马铃铃，凌嘉慧，徐艳琼，
申请(专利权)人：广州奕昕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：