一种基因测序文库的构建方法技术

提供了一种基因测序文库的构建方法，具体涉及基因测序领域，本发明专利技术的方法包括将磁性粒子与转座酶包埋复合物结合形成复合体，并用该复合体与待测序的靶DNA样品孵育，产生两端带有接头的DNA文库。

【技术实现步骤摘要】
一种基因测序文库的构建方法
本专利技术涉及测序
，尤其涉及一种基因测序文库的构建方法。
技术介绍
二代测序技术(NextGenerationSequence，NGS)以高通量、低成本的优势，自出现之日起就倍受欢迎。随着技术的发展，新一代测序技术在许多科学研究和临床检测方面都有应用。目前很多科学研究与临床应用需要快速对目标的全基因组进行测序，或者对感兴趣的目标区域进行深度测序；利用RNA-seq发现新的转录组水平上的变异，或者精确定量mRNA的表达量；分析表观遗传学因素，例如DNA的各种甲基化、DNA与蛋白之间的相互作用；对癌症进行准确测序，寻找变异位点，以便用于精准医疗，个体化治疗癌症。测序技术方面，Illumina公司研发的Miseq、Nextseq和Hiseq等测序仪，采用边合成边测序(SequencingbySynthesis,SBS)技术，支持大规模平行测序，以高通量、低成本、周期短的优势得到了广泛的欢迎。在实际利用测序的完成过程中，很多时候对时效性要求相当高，需要在基因检测的每一个环节都尽可能缩短时间。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种构建基因测序文库的方法，所述方法包括：/n(1)将磁性粒子与转座酶包埋复合物接触，使得磁性粒子与转座酶包埋复合物形成复合体；/n其中，每个转座酶包埋复合物包含(a)转座酶及(b)第一接头序列和/或第二接头序列；所述第一接头序列包含第一测序接头序列和转座酶识别序列，所述第二接头序列包含第二测序接头序列和转座酶识别序列；/n其中，复合体中的磁性粒子与转座酶之间通过镍离子(Ni

【技术特征摘要】
1.一种构建基因测序文库的方法，所述方法包括：
(1)将磁性粒子与转座酶包埋复合物接触，使得磁性粒子与转座酶包埋复合物形成复合体；
其中，每个转座酶包埋复合物包含(a)转座酶及(b)第一接头序列和/或第二接头序列；所述第一接头序列包含第一测序接头序列和转座酶识别序列，所述第二接头序列包含第二测序接头序列和转座酶识别序列；
其中，复合体中的磁性粒子与转座酶之间通过镍离子(Ni2+)-组氨酸相互作用结合；
(2)将(1)中得到的复合体与靶DNA样品孵育，产生两端带有接头的DNA文库。


2.根据权利要求1所述的方法，其中该方法不包括对靶DNA样品中所含的靶DNA定量的步骤。


3.根据权利要求1或2所述的方法，所述磁性粒子为螯合二价镍离子(Ni2+)的磁珠，优选地，磁性粒子通过偶联匹配位的氮川三乙酸(NAT)螯合二价镍离子。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述转座酶包埋复合物在与磁性粒子接触之前是未经纯化的。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述转座酶带有多聚组氨酸标签；优选地，所述转座酶为Tn5转座酶。


6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊隆，夏俊秋，刘家栋，蒋浩君，吴政宪，
申请(专利权)人：江苏金斯瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32