催化发夹组装介导脂质体编码磁珠双重放大策略即时检测蓖麻毒素B链的方法技术

本发明专利技术涉及一种催化发夹组装介导脂质体编码磁珠双重放大策略即时检测蓖麻毒素B链的方法，先利用磁珠‑核酸适配体‑blocker杂交探针与蓖麻毒素B链孵育释放blocker，然后将H1修饰的磁珠、H2功能化脂质体与blocker反应得到MBs‑H1‑H2‑L

【技术实现步骤摘要】
催化发夹组装介导脂质体编码磁珠双重放大策略即时检测蓖麻毒素B链的方法
本专利技术属于新的分析传感技术的开发，涉及一种催化发夹组装介导脂质体编码磁珠双重放大策略即时检测蓖麻毒素B链的方法。
技术介绍
蓖麻毒素是从蓖麻籽中提取的II型核糖体失活蛋白(RIPII)，是已知最致命的毒素之一。蓖麻毒素由A、B两条链通过二硫键连接而成，B链(RTB)与细胞膜上的糖蛋白或糖脂结合后A链与B链分离并进入细胞中的核糖体发挥毒性作用，它能够1分钟灭活1500个核糖体从而抑制蛋白质合成并最终导致细胞死亡。人体通过吸入蓖麻毒素的半数致死量(LD50)约为5-10μg/kg，通过摄取约为1-20mg/kg或8颗蓖麻种子，且目前无有效的解毒剂。由于其毒性极强，易获取，稳定性高，已被列入化学武器公约(CWC)和生物武器公约(BWC)，其生产、拥有、转让和使用受到严格管制。现有蓖麻毒素的检测方法主要包括基于抗体的免疫技术和基于核酸适配体的技术。前者以抗体为识别单元，如：酶联免疫吸附技术(ELISA)，免疫聚合酶链反应(IPCR)，免疫胶体金技术，免疫磁性微球技本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.催化发夹组装介导脂质体编码磁珠双重放大策略即时检测蓖麻毒素B链的方法，其特征在于，先利用磁珠-核酸适配体-blocker杂交探针与RTB孵育释放blocker，然后将H1修饰的磁珠MBs-H1、H2功能化包裹葡萄糖氧化酶的脂质体H2-L

【技术特征摘要】
1.催化发夹组装介导脂质体编码磁珠双重放大策略即时检测蓖麻毒素B链的方法，其特征在于，先利用磁珠-核酸适配体-blocker杂交探针与RTB孵育释放blocker，然后将H1修饰的磁珠MBs-H1、H2功能化包裹葡萄糖氧化酶的脂质体H2-LGOD与blocker反应得到MBs-H1-H2-LGOD，再将葡萄糖溶液加入MBs-H1-H2-LGOD中，反应使得脂质体膜被破坏释放GOD催化氧化葡萄糖产生H2O2，利用PTS和手持式H2O2检测器实现蓖麻毒素B链裸眼定性和定量同时检测；
其中，核酸适配体、blocker、H2的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3所示，H1的核苷酸序列选自SEQIDNO.4、SEQIDNO.5、SEQIDNO.6、SEQIDNO.7中的任一个。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，MBs-H1的制备方法如下：先将3’端生物素化的H1加热至95℃退火1分钟后并静置30分钟冷却至室温，然后加入链霉亲和素修饰的磁珠室温摇动孵育30分钟；随后，用1×TNaK洗涤MBs-H1三次；最后，将MBs-H1重悬在1×TNaK中并储存在4℃待使用。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，H2-LGOD是将胆固醇分子嵌入到脂质双分子层中以实现H2在脂质体表面的功能化连接，具体方法如下：先将3’端胆固醇修饰的H2和脂质体在HEPES缓冲液中室温混合轻摇孵育1小时，然后使用300kDa的透析袋在PBS中4℃过夜透析除去未结合的H2，即得。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述包裹葡萄糖氧化酶的脂质体，是通过薄膜水化法制备得到的，...

【专利技术属性】
技术研发人员：甄淑君，门晨，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50