一种基于双扩增技术联合检测甲、乙型流感病毒的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于双扩增技术联合检测甲、乙型流感病毒的试剂盒及其应用。将采集的样本经细胞裂解液裂解后释放病原体核酸，经过逆转录和转录过程，实现病原体核酸片段的扩增。扩增后的RNA产物加入到包被有包被探针的微孔中，同时加入特异探针及放大探针，其中包被探针可与特异探针CES的一端结合固定扩增产物RNA；特异探针LES的一端结合到RNA产物上，另一端与放大探针结合，实现信号放大。标记有多生物素的放大探针随后与链霉亲和素‑HRP酶联物结合，最后加入HRP酶化学发光底物，在化学发光仪上进行检测。本发明专利技术无需RNA提取，在检测中不易污染，灵敏度高、特异性强，可广泛用于甲、乙型流感病毒核酸检测。

A kit based on double amplification for the detection of influenza A and B viruses and its application

【技术实现步骤摘要】
一种基于双扩增技术联合检测甲、乙型流感病毒的试剂盒及其应用
本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种基于双扩增(RNA恒温扩增+多生物素信号放大)技术联合检测甲、乙型流感病毒核酸的试剂盒及其应用。
技术介绍
流感病毒包括甲、乙、丙三型，甲型最容易引起流行，乙型次之，丙型极少引起流行。依据病毒颗粒外膜血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白抗原性的不同，甲型流感病毒目前可分为18个H亚型(H1-H18)和11个N亚型(N1-N11)，目前已有H1、H2、H3、H5、H7和H9等亚型有感染人的报道。由于编码HA和(或)NA的核苷酸序列容易发生突变，致使HA和(或)NA的抗原表位发生改变，这种抗原性的改变使人群原有的特异性免疫力失效，故甲型流感病毒常引起较大规模甚至世界性的流感流行。按照流行特点，造成人间流感流行的流感病毒可区分为季节性流感病毒和新型甲型流感病毒。季节性流感病毒通常在年度间发生小范围的基因变异，这种基因变异会导致微小的抗原性改变，称为抗原漂移(antigenicdrift)。因此，季节性流感病毒虽具有年度特异性且抗原性的改变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于RNA恒温扩增-多生物素信号放大技术联合检测甲、乙型流感病毒核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：/n1）扩增反应液：含40 mM Tris-HCl (pH 8.0)，12 mM MgCl

【技术特征摘要】
1.一种基于RNA恒温扩增-多生物素信号放大技术联合检测甲、乙型流感病毒核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
1）扩增反应液：含40mMTris-HCl(pH8.0)，12mMMgCl2，70mMKCl，15%DMSO，5mMDTT，每种dNTP各1mM，每种NTP各2mM，扩增引物各0.2µM，其中扩增引物包括三对：甲型流感病毒、乙型流感病毒和人内参基因，具体的：
（1）甲型流感病毒的扩增引物：
FluA-R引物（5’-3’）：TAATACGACTCACTATAGGGAGATGTCHTTCCAGGGGCGGG；其中，H=A/T/C；
FluA-F引物（5’-3’）：TACTCCTCTGCATTGTCTCC；
（2）乙型流感病毒的扩增引物：
FluB-R引物（5’-3’）：TAATACGACTCACTATAGGGAGACACTGTTGGTTCGGTGGGA；
FluB-F引物（5’-3’）：TTCCTGGTCTTTGGGTTTT；
3）内参基因的扩增引物：
内参-R引物（5’-3’）：TAATACGACTCACTATAGGGAGACACCAGACTTGCCCTCCA；
内参-F引物（5’-3’）：AGAAACGGCTACCACATCC；
2）扩增酶：包含三种，逆转录酶、T7RNA聚合酶和RnaseH；优选地，所述逆转录酶为AMV或M-MLV；
3）细胞裂解液：购至美国Signosis公司，货号CL-0001；
4）放大探针：一种标有生物素的核酸序列，该探针可以和特异探针的LES系列的一端结合，具体序列（5’-3’）为:AGAAGGCGTCCGTCTTTGAGGC-Biotin-ACCCGATGGATAGGTCGGTGAA-Biotin-TAAGCATCGTGCCCTTTCGCAG-biotin-ACCACGTTCGCGTTCTCACATG；
5）特异探针：每个指标特异探针有两种，分别为CES系列和LES系列，其中CES系列和LES系列又可以设计多条，具体（5’-3’）如下：
（1）甲型流感病毒特异探针
甲流CES1：TTCCAGGGGCGGGGAGttttCTGTACGTATGTATGT；
甲流CES2：TCTTYGAGCTCTCGGAttttCTGTACGATTGTATGT；
其中，Y=T/C；
甲流LES1：CGAAARGGCARCGARCttttCATGAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：李先强，姜昕，黄永伟，陈巨，
申请(专利权)人：武汉中帜生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42