一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒，所述试剂盒包括：金黄色葡萄球菌的扩增引物和探针，包括：如SEQ ID NO.1所示的nuc

【技术实现步骤摘要】
一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及病毒检测
，特别涉及一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒。

技术介绍

[0002]金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)被认为是引起广泛感染的主要的人类病原菌，同时该菌共生定殖于人的皮肤和其他黏膜组织上。金黄色葡萄球菌感染可不仅可以引发皮肤伤口感染及脓肿，还可造成危及生命的疾病，如肺炎，脑膜炎，心内膜炎，败血症等。该菌既存在于医院内感染，也存在于医院外的公共区域比如社区感染。在抗生素治疗时代之前，金黄色葡萄球菌对于所有的抗生素都表现出敏感的表型。但随着抗生素的广泛使用，金黄色葡萄球菌在抗生素的压力下进化出了抗性，几乎90％的金黄色葡萄球菌菌株都对青霉素产生了抗性。随后在二十世纪60年代初甲氧西林成为新的药物治疗金黄色葡萄球菌感染，然而一年后，第一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin
‑
Resistant Staphylococcus aureus，MRSA)就被分离出来。金黄色葡萄球菌属于葡萄球菌属(staphylococcus)，是一种兼性厌氧的革兰氏阳性球菌。金黄色葡萄球菌在6.5～50℃温度范围之间pH4.5～9.3的范围内都能生长，最适生长温度是37℃，最适pH为7.4。可在10～15％NaCl肉汤中生长。对热有较高抗性，可以抵御70℃加热1h，80℃加热30min。能够干燥环境下可存活数月。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛、大多数无荚膜，在显微镜下排列成葡萄串状，且平板上菌落厚、有金色光泽。血平板菌落呈圆形凸起，周围可形成透明的溶血环。
[0003]MRSA抗性的获得来自于mecA基因编码一种称为PBP 2a或PBP 2
’
的青霉素结合蛋白，对大多数半合成青霉素(如甲氧西林)以及全部β
‑
内酰胺类抗生素表现出低亲和性而保持活性，细菌细胞壁合成不受不受抑制，从而使得MRSA产生耐药性。即使少数mecA基因阳性的葡萄球菌属在药敏试验中表现为对甲氧西林敏感，但与β
‑
内酰胺类药物接触后均可转变为耐β
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内酰胺类药物的菌株
[0004]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测方法主要包括分离培养法、生化检测法、免疫学方法及分子生物学方法。分离培养法、生化检测法操作复杂并且培养周期较长，免疫学方法操作简单、特异性强，但是敏感度低。
[0005]因此，如何开发一种特异性强、灵敏度高的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒，成为亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术目的是提供一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒，特异性强、检测灵敏度高，抗干扰能力强。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒，所述试剂盒包括：
[0009]金黄色葡萄球菌的扩增引物和探针，包括：如SEQ ID NO.1所示的nuc
‑
F引物、如SEQ ID NO.2所示的nuc
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R引物和如SEQ ID NO.3所示的nuc探针；
[0010]甲氧西林抗性基因的扩增引物和探针，包括：如SEQ ID NO.4所示的mecA
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F引物、如SEQ ID NO.5所示的mecA
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R引物和如SEQ ID NO.6所示的mecA探针；
[0011]内参基因的扩增引物和探针，包括：如SEQ ID NO.7所示的内参
‑
F引物、如SEQ ID NO.8所示的内参
‑
R引物和如SEQ ID NO.9所示的内参探针。
[0012]进一步地，所述nuc探针、mecA探针和内参探针的5
’
端均标记有荧光基团，3
’
端标记均有猝灭基团；所述荧光基团选自FAM、VIC、HEX、TRT、Cy3、Cy5、ROX、JOE和Texas Red中的一种，所述猝灭基团选自TAMRA、DABCYL、MGB、Bio/BHQ
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1、BHQ
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2和BHQ
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3中的一种。
[0013]进一步地，所述试剂盒还包括Taq DNA聚合酶。
[0014]进一步地，所述试剂盒还包括阴性对照品
[0015]本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
[0016]1、本专利技术提供的一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒，本专利技术在设计引物时同时经过多轮测试，保证了各单项引物扩增效率高、不同引物彼此之间无干扰，整体扩增效果好。
[0017]2、本专利技术通过实时荧光定量PCR方法在同一管内能够同时扩增金黄色葡萄球菌、甲氧西林抗体基因和人内参基因三种指标，在1.5h内实现96个样本的检测通量。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0019]图1是本专利技术试剂盒的实时荧光PCR扩增原理图。
具体实施方式
[0020]下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本专利技术，本专利技术的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本专利技术，而非限制本专利技术。
[0021]在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
[0022]除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得。本专利技术的“第一”、“第二”等词不代表顺序，可以理解为名词。
[0023]下面将结合实施例及实验数据对本申请的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒进行详细说明。
[0024]实施例1
[0025]一、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸试剂盒，包括：
[0026]1、扩增反应液：含25mM Tris
‑
HCl(pH 8.3)，2mM MgCl2，50mM KCl，2mM DTT，每种dNTP各0.2mM，扩增引物各0.25μM，荧光探针各0.2μM。其中扩增引物及荧光探针包括三对：金黄色葡萄球菌特异基因、甲氧西林抗性基因和人内参基因。具体的：
[0027](1)金黄色葡萄球菌(nuc基因一段保守区序列)的扩增引物：
[0028]nuc
‑
F引物(5
’‑3’
)：GTTTACCATTTTTCCATCAGCATAAATA(SEQ ID NO.1)...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：金黄色葡萄球菌的扩增引物和探针，包括：如SEQ ID NO.1所示的nuc
‑
F引物、如SEQ ID NO.2所示的nuc
‑
R引物和如SEQ ID NO.3所示的nuc探针；甲氧西林抗性基因的扩增引物和探针，包括：如SEQ ID NO.4所示的mecA
‑
F引物、如SEQ ID NO.5所示的mecA
‑
R引物和如SEQ ID NO.6所示的mecA探针；内参基因的扩增引物和探针，包括：如SEQ ID NO.7所示的内参
‑
F引物、如SEQ ID NO.8所示的内参
‑
R引物和如SEQ ID NO.9所示的内参探针。2.根据权利要求1所述的一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒，其特征在于，所述nuc探针、mecA探针和...

【专利技术属性】
技术研发人员：李先强，姜昕，吕阳，
申请(专利权)人：武汉中帜生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：