一种呼吸道传染病毒核酸快速富集扩增方法技术

本发明专利技术公开了一种呼吸道传染病毒核酸快速富集扩增方法，包括以下步骤：S1、受试者将呼吸气体通过呼气管呼入装有消化裂解液的核酸提取管内，其中，所述呼气管内壁设有核酸富集载体，呼气管的末端位置位于核酸提取管液面下；S2、将呼气管转移固定至装有核酸洗脱液和核酸扩增液的核酸扩增管内，充分混匀，其中，呼气管的末端位置位于核酸扩增管液面下；S3、去除恒温加热套的封套，将核酸扩增管放置于恒温加热套内，进行扩增反应；通过直接采集受试者气溶胶，即可快速完成气溶胶样品中核酸提取富集、洗脱、扩增，扩增产物的沉淀可提供可视化定性依据，加入荧光探针后，还可进一步进行精准定量的分子诊断工作。

【技术实现步骤摘要】
一种呼吸道传染病毒核酸快速富集扩增方法
本专利技术涉及病毒核酸提纯富集放大
，更具体地，涉及一种呼吸道传染病毒核酸快速富集扩增方法。
技术介绍
对于呼吸道传染病毒，拭子采样法是目前常用的病毒采集策略，如咽拭子和鼻咽拭子采样法，以口腔唾液、咽部痰液或鼻咽部粘液为采样对象，这类策略虽然采样方法简单，但在实际应用上有较为明显的缺陷：（1）样本有效性较差。对于潜伏期较长但发病迅猛的呼吸道传染病，如2019新型冠状病毒（Novelcoronaviruspneumonia，NCP,2019-nCoV），在口腔唾液中能够发现病毒的时间并不是最早的预防期，不能最快地在患者潜伏期中明确疾病的定性结果，而可以产生咽部痰液的时间则已处于发病期，更不利于疾病的早期快速诊断。（2）处理流程较长。拭子采样法在拭子上收集的样品需要经过解离、洗脱的处理才能进行样品中细胞裂解、蛋白脂质消化等过程，仅这一过程一般需要花去60min左右的时间，此后才能进行核酸提取纯化等操作。此外，处理过程中，拭子对处理溶液的吸收能力较强，从而降低了核酸的提取效率。（3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种呼吸道传染病毒核酸快速富集扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、受试者将呼吸气体通过呼气管呼入装有消化裂解液的核酸提取管内，其中，所述呼气管内壁设有核酸富集载体，呼气管的末端位置位于核酸提取管液面下；/nS2、将呼气管转移固定至装有核酸洗脱液和核酸扩增液的核酸扩增管内，充分混匀，其中，呼气管的末端位置位于核酸扩增管液面下；/nS3、去除恒温加热套的封套，将核酸扩增管放置于恒温加热套内，进行扩增反应。/n

【技术特征摘要】
1.一种呼吸道传染病毒核酸快速富集扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、受试者将呼吸气体通过呼气管呼入装有消化裂解液的核酸提取管内，其中，所述呼气管内壁设有核酸富集载体，呼气管的末端位置位于核酸提取管液面下；
S2、将呼气管转移固定至装有核酸洗脱液和核酸扩增液的核酸扩增管内，充分混匀，其中，呼气管的末端位置位于核酸扩增管液面下；
S3、去除恒温加热套的封套，将核酸扩增管放置于恒温加热套内，进行扩增反应。


2.根据权利要求1所述的呼吸道传染病毒核酸快速富集扩增方法，其特征在于，步骤S1中，所述呼气管的末端位置位于核酸提取管液面下三分之二处。


3.根据权利要求1所述的呼吸道传染病毒核酸快速富集扩增方法，其特征在于，步骤S1中，所述消化裂解液包括含有800mM盐酸胍、质量分数为1%的Tween-20、质量分数为0.5%的TritonX-100和浓度为20mg/mL的蛋白酶K的50mMTris-HCl缓冲溶液，其中Tris-HCl缓冲溶液的pH值为8.0。


4.根据权利要求1所述的呼吸道传染病毒核酸快速富集扩增方法，其特征在于，步骤S1中，所述核酸富集载体为阳离子滤膜。
...

【专利技术属性】
技术研发人员：周建华，刘廙人，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44