一种使用分子筛离心柱的方法获取动物组织RFPs的方法技术

本发明专利技术提供一种使用分子筛离心柱的方法获取动物组织RFPs的方法，包括以下步骤：对动物组织进行除血、冷冻和研磨等预处理，然后细胞裂解液进行裂解，得到预处理物；将预处理物进行分阶段高速离心处理，收集上清液；将上清液加入到预处理的分子筛离心柱，然后低速离心，得到初提物RNC；在初提物RNC中加入核酸酶进行酶切，然后加入反应中止试剂和RNA提取试剂，得到动物组织RFPs。本发明专利技术所述的方法得到的动物组织RFPs，特别是动物心脏组织中的RFPs，较其它提取方法，可节省大量提取时间，并且其中可用有效数据质量高，核糖体占比低，可排除因无效数据对心血管疾病在翻译组学方面的研究上的干扰。

【技术实现步骤摘要】
一种使用分子筛离心柱的方法获取动物组织RFPs的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种使用分子筛离心柱的方法获取动物组织RFPs的方法。
技术介绍
翻译组学，连接着转录组和蛋白质组，是生物信息学层次传递过程中的一个重要枢纽。翻译并不是简单的对基因表达信息进行传递，而是在传递的过程中对有效信息进行广泛而精细的重新调控，是幅度最大的调控步骤，对蛋白的折叠，蛋白的定位、功能以及产量均起到至关重要的作用。对该方面的研究，也越来越引起同行业的科学家和专家日益的重视。2009年，Weissman课题组首次提出ribosomalprofiling（Ribo-seq）技术。从此，Ribo-seq技术逐渐在科研领域占据重要位置。Ribo-seq技术主要采用二代测序技术检测被核糖体的保护的约22-30bp的RNA小片段，也称之为Ribosomefootprints(RFPs)。通常针对Ribosomeprofiling进行研究的方法中，基本都是对组织或者细胞进行裂解，酶切去除非核糖体富集的游离mRNA后，采用蔗糖密度梯度离心分离单核糖体，再根据不用实验要求本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种使用分子筛离心柱的方法获取动物组织RFPs的方法，其特征在于，所述的方法包括：/n步骤一、动物组织预处理：将采集的动物组织洗净血液后，放入液氮中冷冻至少2~5min，将冷冻后的动物组织研磨至颗粒度5~10目的粉末，然后加入细胞裂解液在10~35℃温度条件裂解20~30min，得到预处理物；/n步骤二、将步骤一所得的预处理物高速离心，收集上清液，然后将所述的上清液滴加到预先处理的分子筛离心柱中，得到处理后分子筛离心柱，将所述的处理后分子筛离心柱低温低速离心，收集滤液，得到初提物RNC；/n步骤三、在初提物RNC中加入核酸酶进行酶切作用，酶切作用温度为20-30℃，反应时间为10~60mi...

【技术特征摘要】
1.一种使用分子筛离心柱的方法获取动物组织RFPs的方法，其特征在于，所述的方法包括：
步骤一、动物组织预处理：将采集的动物组织洗净血液后，放入液氮中冷冻至少2~5min，将冷冻后的动物组织研磨至颗粒度5~10目的粉末，然后加入细胞裂解液在10~35℃温度条件裂解20~30min，得到预处理物；
步骤二、将步骤一所得的预处理物高速离心，收集上清液，然后将所述的上清液滴加到预先处理的分子筛离心柱中，得到处理后分子筛离心柱，将所述的处理后分子筛离心柱低温低速离心，收集滤液，得到初提物RNC；
步骤三、在初提物RNC中加入核酸酶进行酶切作用，酶切作用温度为20-30℃，反应时间为10~60min；所述的核酸酶的添加体积V=（A260RNC－A260buffer）×VE×800／VE，A260buffer和A260RNC分别为使用分光光度计测定得到的核酸酶的酶解缓冲液和步骤二所得的初提物RNC在260nm处的吸光值，VE为初提物RNC的体积（mL)，CE为核酸酶的浓度（U/ml)；
步骤四、在步骤三所得的产物里加入RNA提取试剂，得到RFPs。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤一所述的细胞裂解液的添加体积为所述的冷冻后的动物组织的体积的3~20倍，所述的细胞裂解液包括20mM磷酸二氢钾(pH7.4)、15mMMgCl2、200mMKCl、2mMDTT、100ug/mL放线菌酮和1%（v/v）TritonX-100。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
步骤二所述的高速离心的温度为0~5℃，步骤二所述的高速离心的速度为13000~24000g，步骤二所述的高速离心的时间为3~30min；
步...

【专利技术属性】
技术研发人员：何慧琼，董鸣，彭龙，
申请(专利权)人：武汉承启医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42