污水中游离态DNA的提取及检测方法技术

本发明专利技术涉及污水处理技术领域，尤其涉及污水中游离态DNA的提取及检测方法。本发明专利技术提供的污水中游离态DNA的提取方法及定量检测方法，在提取过程中，以采用乙醇‑乙酸铵沉淀法浓缩分离滤液中游离态DNA，整个提取过程仅需1次沉淀和两次洗涤，过程操作简洁，且能够提高DNA的收率和纯度；而在检测步骤中，利用高灵敏性Picogreen荧光染料检测游离态DNA的浓度。本方法可有效屏蔽污水中常见盐类和有机物等污染物的干扰，为污水中痕量游离态DNA研究提供了灵敏、可靠的分析手段。

【技术实现步骤摘要】
污水中游离态DNA的提取及检测方法
本专利技术涉及污水处理
，尤其涉及污水中游离态DNA的提取及检测方法。
技术介绍
游离态DNA因富含氮、磷等元素，被视作水环境中微生物的重要营养来源之一。大量研究报道了海水、湖水、河水和池塘水等自然水体中游离态DNA的存在，其浓度范围为pg/mL～ng/mL级。除了在各种水体中普遍检出游离态DNA外，也有研究证明水环境中游离态DNA能够被细菌自然转化，这说明游离态DNA也是水环境中基因水平转移的潜在载体。更为重要的是，最新研究发现自然水体(包括河水、井水、饮用水、湖泊水和水库等)中游离态DNA携带着高丰度的新兴污染物抗生素抗性基因。鉴于此，环境中游离态DNA越来越受到研究者的重视。与自然水体不同，目前仍鲜见研究关注污水中的游离态DNA。最近，中国学者张衍等采用乙醇/乙酸钠浓缩-分光光度法首次考察了实际污水处理厂污水中的游离态DNA，结果显示进水、出水中游离态DNA分别为5.7±1.5ng/mL、1.6±1.7ng/mL。然而，该研究尚存一定局限：一方面，本团队验证性实验显示，采用乙醇+乙酸钠浓缩本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.污水中游离态DNA的提取方法，其特征在于，包括：/n污水经过滤，滤液与乙酸铵溶液混合后，加入无水乙醇，0℃～4℃静置，离心取沉淀；所述沉淀以乙醇溶液清洗2次，获得污水游离态DNA。/n

【技术特征摘要】
1.污水中游离态DNA的提取方法，其特征在于，包括：
污水经过滤，滤液与乙酸铵溶液混合后，加入无水乙醇，0℃～4℃静置，离心取沉淀；所述沉淀以乙醇溶液清洗2次，获得污水游离态DNA。


2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述乙酸铵溶液的浓度为6～8mol/L。


3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述乙酸铵溶液与滤液的体积比为1∶2。


4.根据权利要求1～3任一项所述的提取方法，其特征在于，所述无水乙醇与滤液的体积比为3∶1。


5.根据权利要求1～4任一项所述的提取方法，其特征在于，所述静置的时间为1h。


6.根据权利要求1～5任一项所述的提取方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：周帅，熊聪，高媛媛，唐振平，刘迎九，
申请(专利权)人：南华大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43