【技术实现步骤摘要】
一种快速制备单分子光学图谱标记文库的方法和试剂盒
本专利技术涉及一种快速制备单分子光学图谱标记文库的方法，以及适用于此方法的试剂盒。
技术介绍
人类许多疾病是由于染色体结构变异引起的。现在常用的染色体结构分析的方法有核型分析、芯片杂交等。然而，这些技术均存在一定局限性，比如分辨率低、成本高、不能覆盖全基因组等。长片段单分子光学图谱技术的发展弥补了上述技术的局限。BioNano公司推出的Irys和Saphyr系统利用限制性切刻酶或甲基化转移酶对DNA进行识别并标记荧光1，再利用纳米通道把DNA单分子线性化展开，并进行超长单分子高分辨率荧光成像，即可生成一幅特异酶位点分布图。单分子光学图谱技术可以辅助基因组组装、检测染色体结构变异和基因遗传病的检测2。然而，现阶段的单分子光学图谱标记文库的制备存在耗时长、制备过程繁琐等缺点，并不适用于临床检测。此外，光学图谱技术的优势是可以在单分子水平上标记DNA，因此基因组DNA片段的长度是决定光学图谱标记效果的重要因素之一。一般要求DNA片段的平均长度大于200Kb，最长的DNA片段...
【技术保护点】
1.一种快速制备单分子光学图谱标记文库的方法，包括以下步骤：/n(1)提取长片段基因组DNA；/n(2)标记提取的基因组DNA；/n(3)纯化标记的基因组DNA，和/n(4)将基因组DNA的骨架染色，获得单分子光学图谱标记文库。/n
【技术特征摘要】
1.一种快速制备单分子光学图谱标记文库的方法，包括以下步骤：
(1)提取长片段基因组DNA；
(2)标记提取的基因组DNA；
(3)纯化标记的基因组DNA，和
(4)将基因组DNA的骨架染色，获得单分子光学图谱标记文库。
2.权利要求1所述的方法，其中步骤(1)进一步包括以下子步骤：
a)向样品中加入裂解液和蛋白酶K，使细胞裂解并释放基因组DNA；
b)向步骤a)的反应体系中加入沉淀剂，获得基因组DNA的沉淀；
c)用清洗液洗涤所得的基因组DNA的沉淀；
d)用溶解液溶解基因组DNA。
3.权利要求1或2所述的方法，其中步骤(1)在单反应管中进行。
4.权利要求2所述的方法，其中所述裂解液包含NaCl、Tris-HCl、EDTA和SDS。
5.权利要求4所述的方法，其中所述SDS的浓度为0.1％-8％。
6.权利要求2所述的方法，其中所述裂解液包含RNaseA。
7.权利要求2所述的方法，其中所述蛋白酶K的浓度为0.005-4mg/ml。
8.权利要求2所述的方法，其中所述沉淀剂包含至少一种无机盐和至少一种醇类。
9.权利要求2所述的方法，其中所述清洗液包含70％乙醇。
10.权利要求2所述的方法，其中所述溶解液选自去离子水、Tris-HCl和TE缓冲液。
11.权利要求1所述的方法，其中步骤(2)包括在标记酶存在下，将染料与步骤(1)提取的基因组DNA一起孵育。
12.权利要求11所述的方法，其中所述标记酶是限制性切刻酶或甲基化转移酶。
13.权利要求11所述的方法，其中所述染料选自BODIPY、FITC、罗丹明、香...
【专利技术属性】
技术研发人员：毛爱平，张海满，张建光，
申请(专利权)人：北京贝瑞和康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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