【技术实现步骤摘要】
RNA核酸释放剂和PCR扩增试剂的冻干微球制备方法及其应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种RNA核酸释放剂和PCR扩增试剂的冻干微球制备方法及其应用。
技术介绍
核酸检测由于其灵敏度高、特异性强、操作简便、所需时间短等特点，已广泛应用于临床医学、检验检疫等多个领域，尤其在聚合酶链式反应(英文：PolymeraseChainReaction，简称：PCR)、等温扩增等核酸扩增技术中。然而，核酸扩增技术对于临床或直接获得的标本中的干扰物质较为敏感，会造成检测结果的假阴性，故在核酸扩增前需进行样品核酸提取与纯化。但一直以来，样本中核酸的提取和纯化是整个实验中最耗时，最繁琐的过程，严重影响样本检测的速度以及现场应用。迄今为止，核酸提取方法主要有煮沸法、离心柱法以及磁珠法。煮沸法提取时需要多次换管离心等步聚，样本处理时间长，且仍存在少量抑制扩增物质，对后续扩增会有抑制效应。离心柱法提取效果较好，但步聚繁多，且该过程中存在核酸容易丢失或污染的不足。磁珠法提取步聚简单，回收率高，易于自动化提取，但产品价格十分昂贵，目前应用并不广...
【技术保护点】
1.一种RNA核酸释放剂的冻干微球制备方法，其特征在于，所述方法包括：/n按比例将RNA核酸释放剂各组分加入无核酶的离心管中，并混合均匀，得到混合溶液；/n将液氮倒入无菌的药杯中，利用移液枪将所述混合溶液以10μL体积滴入所述液氮中，凝结成圆形小球；/n采用无菌膜对所述药杯进行封口，并在所述无菌膜上扎出数个孔；/n将所述药杯放入已预冷的冻干机中，所述冻干机的冷阱温度设置为-69℃，真空冻干6h以上，得到RNA核酸释放剂的冻干微球。/n
【技术特征摘要】
1.一种RNA核酸释放剂的冻干微球制备方法，其特征在于，所述方法包括：
按比例将RNA核酸释放剂各组分加入无核酶的离心管中，并混合均匀，得到混合溶液；
将液氮倒入无菌的药杯中，利用移液枪将所述混合溶液以10μL体积滴入所述液氮中，凝结成圆形小球；
采用无菌膜对所述药杯进行封口，并在所述无菌膜上扎出数个孔；
将所述药杯放入已预冷的冻干机中，所述冻干机的冷阱温度设置为-69℃，真空冻干6h以上，得到RNA核酸释放剂的冻干微球。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述RNA核酸释放剂包括：基础组分和冻干保护组分；
所述基础组分包括：裂解剂、RNA酶抑制剂和消泡剂；
所述裂解剂包括：NaOH、NP40、Triton100、明胶、DMSO、EDTA、Tween20、LLS、沙凡婷和NAC中的一种或多种的组合；
所述RNA酶抑制剂包括：异硫氰酸胍，SDS和尿素中的一种或多种的组合；
所述消泡剂包括：异丙醇、乙醇和Foamban中的一种或多种的组合；
所述冻干保护组分包括：明胶、甘油、DMSO、BSA、PVP、海藻糖、葡萄糖、蔗糖、消泡剂和防腐剂中的两种或多种的组合。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述裂解剂采用NaOH、NP40和LLS的组合，所述RNA酶抑制剂采用异硫氰酸胍和SDS的组合，所述消泡剂采用Foamban，所述冻干保护组分采用PVP和海藻糖的组合。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述NaOH的摩尔浓度为0.1M-0.5M，所述NP40的体积百分比为0.5％-3％，所述LLS的质量体积百分比为0.2％-2％；
所述异硫氰酸胍的摩尔浓度为0.02M-1M，所述SDS的质量体积百分比为0.1％-2％；
所述Foamban的质量体积百分比为0.05％-1％；
所述PVP的质量体积百分比为2％-5％，所述海藻糖的质量体积百分比为4％-8％。
5.一种如权利要求1～4任一项所述的RNA核酸释放剂的冻干微球制备方法所制备的RNA核酸释放剂的冻干微球在检测领域的应用。
6.一种PCR扩增试剂的冻干微球制备方法，其特征在于，所述方法包括：
按比例将PCR扩增试剂各组分加入无核酶的离心管中，并混合均匀，得到混合溶液；
将液氮倒入无菌的药杯中，利用移液枪将所述混合溶液以20μL体积滴入所述液氮中，凝结成圆形小球；
采用无菌膜对所述药杯进行封口，并在所述无菌膜上扎出数个孔；
将所述药杯放入已预冷的冻干机中，所述冻干机的冷阱温度设置为-69℃，真空...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏恩本，沈欢，孙家振，闵超，潘荣芳，谢玉丹，徐漫，卜蓉蓉，高阳，张国秀，
申请(专利权)人：基蛋生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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