一种适用于PCR实验的免提取念珠菌核酸样本的制备方法技术

一种适用于PCR实验的免提取念珠菌核酸样本的制备方法为酶裂解和热裂解相结合的方式，包括如下步骤：酶裂解液的配制：将酵母裂解酶lyticase、蜗牛酶、β‑巯基乙醇混合，并添加生理盐水至混合液体积为100μL；酶裂解：将念珠菌标本置于eppendorf管中，以PBS洗涤后离心，去除上清，向其中加入步骤a配制的酶裂解液100μL，水浴加热裂解；热裂解：将完成酶裂解水浴的eppendorf管置金属浴中，加热裂解，念珠菌样本经过酶裂解和热裂解后，10000转/分钟低温高速离心10分钟，上清即为制备好的念珠菌DNA样本。本发明专利技术采用酶裂解和热裂解相结合的方式制备DNA样本，裂解时间短，免除了提取DNA过程，使裂解产物简单处理后可直接用于PCR实验，提高了PCR扩增的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种适用于PCR实验的免提取念珠菌核酸样本的制备方法
本专利技术涉及一种适用于PCR实验的免提取念珠菌核酸样本的制备方法，属于生物

技术介绍
人类面临侵袭性念珠菌病(invasivecandidiasis,IC)的挑战越来越大，许多地区IC发病率持续上升，即使患者接受了抗真菌治疗，死亡率亦高达40％。尤其是近期引起全球关注的耳念珠菌感染，美国CDC已将其列入紧急威胁名单。据通报，全美耳念珠菌感染病例达587宗，近50％的感染者在90天内死亡。早期检测是降低IC病死率的关键。目前实验室检测主要采用包括微生物培养的传统检验手段、以及近年来发展较快的血清学检测技术，后者成为传统IC检测方法的重要补充。这些技术主要包括G试验、GM试验、GXM试验(隐球菌荚膜多糖)、Mn试验(念珠菌甘露聚糖)以及各种属特异性IgM、IgG抗体检测等。真菌病血清学检测的缺点在于：①无法实现精确的菌种鉴定；②容易出现假阳性结果；③部分人的检测准确性、敏感性有较大的不确定性；④不同循环抗体和抗原之间可能存在交叉反应。随着分子生物学和生物传感器技术的不本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种适用于PCR实验的免提取念珠菌核酸样本的制备方法，其特征在于：所述制备方法为酶裂解和热裂解相结合的方式，包括如下步骤：/na、酶裂解液的配制：将酵母裂解酶lyticase、蜗牛酶、β-巯基乙醇混合，并添加生理盐水至混合液体积为100μL，得到酶裂解液；/nb、酶裂解：将念珠菌标本置于eppendorf管中，以PBS洗涤后离心，去除上清，向其中加入步骤a配制的酶裂解液100μL，水浴加热裂解；/nc、热裂解：将完成酶裂解水浴的eppendorf管置金属浴中，加热裂解，念珠菌样本经过酶裂解和热裂解后，10000转/分钟低温高速离心10分钟，上清即为制备好的念珠菌DNA样本。/n

【技术特征摘要】
1.一种适用于PCR实验的免提取念珠菌核酸样本的制备方法，其特征在于：所述制备方法为酶裂解和热裂解相结合的方式，包括如下步骤：
a、酶裂解液的配制：将酵母裂解酶lyticase、蜗牛酶、β-巯基乙醇混合，并添加生理盐水至混合液体积为100μL，得到酶裂解液；
b、酶裂解：将念珠菌标本置于eppendorf管中，以PBS洗涤后离心，去除上清，向其中加入步骤a配制的酶裂解液100μL，水浴加热裂解；
c、热裂解：将完成酶裂解水浴的eppendorf管置金属浴中，加热裂解，念珠菌样本经过酶裂解和热裂解后，10000转/分钟低温高速离心10分钟，上清即为制备好的念珠菌DNA样本。


2.根据权利要求1所述的适用于PCR实验的免提取念珠菌核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺政新，
申请(专利权)人：中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院，
类型：发明
国别省市：河北;13