一种铁皮石斛基因组DNA的高效提取方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种铁皮石斛基因组DNA的高效提取方法。该方法优化了经典CTAB法中抽提缓冲液的配方、增加了一步果胶酶裂解并优化了提取工艺。对比于经典的CTAB法，本发明专利技术DNA提取方法中的抽提缓冲液处理过程可以较好地抑制酚的自发氧化并防止多酚氧化物引起的DNA褐变反应，促进多糖在高盐条件下与高浓度的CTAB结合从而利于抽提去除；果胶酶处理过程进一步溶解铁皮石斛中的难溶物质使得提取的DNA不再粘稠，也显著简化了后续DNA样本建库、测序的流程。本发明专利技术的提取方法显著提高了DNA提取效率和DNA纯度。

【技术实现步骤摘要】
一种铁皮石斛基因组DNA的高效提取方法
本专利技术涉及分子生物学
，更具体地，涉及一种铁皮石斛基因组DNA的高效提取方法。
技术介绍
铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKimuraetMigo)为兰科石斛属多年草本附生植物，是名贵中药西枫斗的原植物，具有养阴生津，温胃明目，润喉护嗓，补肾益力的功效，是养阴要药，唐代医学经典《道藏》中，其被誉为“中华九大仙草之首”，1987年被列入国家重点保护的濒危珍稀植物名录。铁皮石斛富含多糖等有效成分，现代医学研究表明其对咽喉疾病、心脑血管疾病、糖尿病、白内障等具有不错的疗效，还具有抗肿瘤，抗衰老，增强人体免疫力及抗炎等作用。基因组DNA的提取是分子生物学实验很重要的一个环节。基因组DNA的质量和产量，直接影响分子生物实验中与DNA有关的后续实验的进行。由于不同植物体内次生代谢物及比例不同，它们可以与DNA结合形成复合物，因此，应根据所研究植物的不同情况需要进行实验，以获得高质量的DNA样品。经典的植物基因组的提取方法主要为CTAB法，而类似于石斛属这种含有多糖多酚等次生代谢产物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种铁皮石斛基因组DNA的高效提取方法，其特征在于，包括：/n(1)液氮研磨铁皮石斛叶片至粉末；/n(2)向粉末中加入抽提缓冲液，混匀后60-70℃加热20-30min获得混合液a；所述抽提缓冲液配方为：100mMTris-HCl(pH8.0)、20mMEDTA、1.4MNaCl、2％(W/V)CATB、20％(W/V)PVP、0.4％(V/V)β-巯基乙醇；/n(3)向混合液a中加入果胶酶，30-40℃恒温孵育10-20min获得混合液b；/n(4)向混合液b中加入酚、氯仿和异戊醇的混合溶液，充分混匀后离心获得上清液a；/n(5)向上清液a加入氯仿和异戊醇的混合溶液，充分混匀后离心获得上...

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛基因组DNA的高效提取方法，其特征在于，包括：
(1)液氮研磨铁皮石斛叶片至粉末；
(2)向粉末中加入抽提缓冲液，混匀后60-70℃加热20-30min获得混合液a；所述抽提缓冲液配方为：100mMTris-HCl(pH8.0)、20mMEDTA、1.4MNaCl、2％(W/V)CATB、20％(W/V)PVP、0.4％(V/V)β-巯基乙醇；
(3)向混合液a中加入果胶酶，30-40℃恒温孵育10-20min获得混合液b；
(4)向混合液b中加入酚、氯仿和异戊醇的混合溶液，充分混匀后离心获得上清液a；
(5)向上清液a加入氯仿和异戊醇的混合溶液，充分混匀后离心获得上清液b；
(6)向上清液b中加入异丙醇，充分混匀后静置、离心获得沉淀a；
(7)乙醇清洗沉淀a获得铁皮石斛基因组DNA。


2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛基因组DNA的高效提取方法，其特征在于，控制每克铁皮石斛粉末加入6-10mL所述的抽提缓冲液。


3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛基因组DNA的高效提取方法，其特征在于，混合液a中加入果胶酶后，所述果胶酶的终浓度为30-50U/mg。


4.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛基因组DNA的高效提取方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴冬晴，
申请(专利权)人：武汉菲沙基因信息有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42