一种适用于峨眉锥栗基因组DNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种适用于峨眉锥栗基因组DNA的提取方法，具体为：用细胞核分离液和DTT处理峨眉锥栗组织粉末样品，收集细胞核；再使用裂解液、有机溶液等试剂提取细胞核DNA从而获得高质量DNA。实验数据表明，通过本发明专利技术提供的细胞核分离液和DTT能够有效消除峨眉锥栗中次级代谢产物的干扰，使所得DNA样本不粘稠，且产量高、成本低，能够满足三代DNA建库测序的要求。求。求。

【技术实现步骤摘要】
10mM DTT混匀以清洗粉末，离心去上清，收集沉淀；
[0016]S22、向沉淀中加入15mL细胞核分离液和15μL 10mM DTT，匀浆后于冰上孵育10
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20min，离心收集细胞核。
[0017]更为优选地，在上述处理过程中，S21所述离心的转速为3000rpm，S22所述离心的条件为7500rpm离心10
‑
20min。
[0018]在上述提取方法中，裂解液优选为100mM pH 8.0Tris
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HCl、20mM EDTA、1.4M NaCl、2％(w/v)CATB、20％(w/v)PVP、0.4％(v/v)β
‑
ME(β
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巯基乙醇)。
[0019]在上述提取方法中，优选使用氯仿∶异戊醇＝24:1抽提DNA。
[0020]在上述提取方法中，用异丙醇沉淀DNA的过程具体可以为：加入0.7倍体积的异丙醇，上下混匀后，
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20℃沉淀10min，再13000rpm 4℃离心，收集DNA沉淀。
[0021]在上述提取方法中，S4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适用于峨眉锥栗基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取峨眉锥栗组织样本，并于液氮下研磨成粉末；S2、利用细胞核分离液和DTT处理粉末，收集细胞核；S3、向S2收集的细胞核中加入裂解液反应后，用氯仿和异戊醇的混合液抽提，离心取上清，再加入氯仿抽提，离心取上清，用异丙醇沉淀，离心收集DNA沉淀；S4、用乙醇溶液洗涤DNA沉淀，最后加入含RNase A的缓冲液溶解DNA；所述细胞核分离液的pH＝8.0，且每1L细胞核分离液中含有：10mM Tris，8mM KCl，140mM NaCl，0.5M蔗糖，2mM亚精胺，2mM精胺，10mM EDTA，0.5％v/v Triton X
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100，1％w/v PVP，10％v/v PEG8000。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述峨眉锥栗组织样本为峨眉锥栗的叶片。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤S2具体为：S21、将0.5
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1g粉末转入容器...

【专利技术属性】
技术研发人员：简文雄，易欣欣，
申请(专利权)人：武汉菲沙基因信息有限公司，
类型：发明
国别省市：