一种(R)-ω-转氨酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种(R)‑ω‑转氨酶突变体及其应用，该突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸、第79位精氨酸、第51位的谷氨酰胺、第149位的缬氨酸、第235位亮氨酸和第216位甘氨酸，经多点突变得到。本发明专利技术通过基因挖掘技术筛选新型的(R)‑ω‑TA酶，并通过蛋白质工程技术进行分子改造，获得了高酶活、高底物耐受性和高立体选择性的(R)‑ω‑TA突变体催化剂，该突变体能够生物催化前体酮类似物1‑(3‑氧吡咯烷‑1‑基)‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑1,3‑丁二酮合成西他列汀中间体(R)‑1‑[3‑氨基‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)丁酰基]吡咯‑3‑酮，且转化率较高，最高可达到95.4％，对于突破西他列汀生物催化制备技术具有里程碑意义。

【技术实现步骤摘要】
一种(R)-ω-转氨酶突变体及其应用
本专利技术涉及生物化工
，尤其涉及一种(R)-ω-转氨酶突变体及其应用，尤其是(R)-ω-转氨酶突变体在制备西他列汀中间体(R)-1-[3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基]吡咯-3-酮中的应用。
技术介绍
西他列汀，英文名称sitagliptin，全称(3R)-3-氨基-1-[3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡嗪-7-基]-4-(2,4,5-三氟苯基)丁-1-酮，是由Merck和Codexis公司研制和开发的一种二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制药，可通过保护内源性肠降血糖素和增强其作用而控制血糖水平，是一种有巨大潜力Ⅱ型糖尿病的治疗药物。制备西他列汀主要是不对称合成法，通常使用转氨酶为生物催化剂进行生物转化。转氨酶(transaminase，简称TA，EC2.6.1.X)是辅酶型PLP(5’-磷酸吡哆醛)依赖型酶。在反应过程中PLP与5’-磷酸吡哆胺(PMP)会相互进行转换，同时催化氨基从合适的供体到羰基受体的可逆转移。TA可以被分为α-TA和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种(R)-ω-转氨酶突变体，其特征在于，该突变体为下列之一：/n(1)由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸，第79位精氨酸突变为丙氨酸，第51位的谷氨酰胺突变为苏氨酸、组氨酸或丝氨酸；/n(2)由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸，第79位精氨酸突变为丙氨酸，第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸，第149位的缬氨酸突变为丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸或甘氨酸；/n(3)由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸，第79位精氨酸突变为丙氨酸，第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸，第149位的缬氨酸突变为天冬...

【技术特征摘要】
1.一种(R)-ω-转氨酶突变体，其特征在于，该突变体为下列之一：
(1)由SEQIDNO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸，第79位精氨酸突变为丙氨酸，第51位的谷氨酰胺突变为苏氨酸、组氨酸或丝氨酸；
(2)由SEQIDNO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸，第79位精氨酸突变为丙氨酸，第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸，第149位的缬氨酸突变为丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸或甘氨酸；
(3)由SEQIDNO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸，第79位精氨酸突变为丙氨酸，第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸，第149位的缬氨酸突变为天冬氨酸，第235位亮氨酸突变为赖氨酸或谷氨酸；
(4)由SEQIDNO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸，第79位精氨酸突变为丙氨酸，第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸，第149位的缬氨酸突变为天冬氨酸，第235位亮氨酸突变为谷氨酸，第216位甘氨酸突变为丙氨酸、苯丙氨酸或色氨酸；
(5)由SEQIDNO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸，第79位精氨酸突变为丙氨酸，第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸，第149位的缬氨酸突变为天冬氨酸，第235位亮氨酸突变为谷氨酸，第216位甘氨酸突变为丙氨酸。


2.如权利要求1所述的(R)-ω-转氨酶突变体，其特征在于，由SEQIDNO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸，第79位精氨酸突变为丙氨酸，第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸，第149位的缬氨酸突变为天冬氨酸，第235位亮氨酸突变为谷氨酸，第216位甘氨酸突变为丙氨酸。


3.一种如权利要求1所述(R)-ω...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳志强，贾东旭，彭晨，李军良，程峰，张晓健，郑裕国，何人宝，金逸中，林娇华，
申请(专利权)人：浙江工业大学，浙江永太科技股份有限公司，浙江永太药业有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33