一种融合蛋白及其高效表达方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种融合蛋白及其高效表达方法与应用。属于融合蛋白技术领域。该融合蛋白为AtSUS1‑RsUGT72B14融合蛋白，包含拟南芥蔗糖合酶AtSUS1和高山红景天尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶RsUGT72B14的核心片段。本发明专利技术根据大肠杆菌密码子偏好性，结合AtSUS1和RsUGT72B14基因序列特点，通过设计酶切位点相连法引入GGSG四个氨基酸连接肽序列，获得了AtSUS1‑RsUGT72B14融合蛋白的优化基因序列，并实现了AtSUS1‑RsUGT72B14融合蛋白的高效表达，该融合蛋白可用于催化合成红景天苷。

【技术实现步骤摘要】
一种融合蛋白及其高效表达方法与应用
本专利技术涉及融合蛋白
，更具体的说是涉及一种融合蛋白及其高效表达方法与应用。
技术介绍
蔗糖合酶(Sucrosesynthase,SUS)，是蔗糖代谢的关键酶之一，可催化蔗糖和UDP生成果糖和UDPG的可逆反应，偏向于蔗糖裂解反应方向，如SUS1可高效催化蔗糖分解生成UDPG。尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶(Uridinediphosphateglucosyltransferase,UGT)，是催化糖基转移的修饰反应，将糖基从活化的供体分子转移到受体分子上。糖基化修饰通常是天然化合物生物合成的最后一步，能够提高天然产物的水溶性、稳定性和生物活性。UGT是糖基类植物次生代谢产物合成途径中的重要酶，如UGT72B14可催化酪醇和UDPG合成红景天苷(及副产物UDP)。融合蛋白是通过DNA重组技术将多个原本单独的基因编码的蛋白质实现分子水平的连接而获得的多功能新型蛋白质。如可以利用融合技术获得蔗糖合酶(SUS)和尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶(UGT)的催化体系，即建立UDPG的循环再生体系。拟南芥蔗糖合酶At本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其特征在于，该融合蛋白为AtSUS1-RsUGT72B14融合蛋白，其基因编码序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于，该融合蛋白为AtSUS1-RsUGT72B14融合蛋白，其基因编码序列如SEQIDNO.1所示。


2.如权利要求1所述的融合蛋白的高效表达方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)AtSUS1-RsUGT72B14融合蛋白基因的合成；
(2)AtSUS1-RsUGT72B14融合蛋白基因与表达载体连接，构建重组质粒；
(3)重组质粒转化至宿主大肠杆菌进行表达。


3.如权利要求2所述的融合蛋白的高效表达方法，其特征在于，所述步骤(2)为将AtSUS1-RsUGT72B14融合蛋白基因连接至大肠杆菌表达载体pET-28a，获得重组载体pET28a-AtSUS1-4a-RsUGT...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛飞燕，马兰青，杨明峰，姜梦嫣，黄丽娜，彭程，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京;11