环糊精葡萄糖基转移酶突变体T168A及其制备方法技术

本发明专利技术公开了环糊精葡萄糖基转移酶突变体T168A及其制备方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明专利技术通过对环糊精葡萄糖基转移酶进行突变，得到了环糊精葡萄糖基转移酶歧化活力更高的突变体。突变体T168A的摇瓶发酵酶歧化活力分别为野生酶的1.21倍。本发明专利技术对环糊精葡萄糖基转移酶工业化生产具有一定意义，并提高了该酶的在食品、医药、化工行业中的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】
环糊精葡萄糖基转移酶突变体T168A及其制备方法
本专利技术涉及环糊精葡萄糖基转移酶突变体T168A及其制备方法，属于基因工程和酶工程领域。
技术介绍
环糊精葡萄糖基转移酶(CyclodextrinGlycosyltransferase，简称CGTase，EC2.4.1.19)是α-淀粉酶家族(GH13)中的主要成员。它作为一种多功能酶，可催化四种不同的反应，包括三种转糖基(transfructosylation，又称转糖苷)反应-歧化反应、环化反应和偶合反应以及一种水解反应。其中，歧化反应占据主导地位，该反应是将直链低聚糖被切断的部分转移到另一受体上，是一种分子外转糖基反应；环化反应作为一种分子内转糖基反应，这是CGTase的特征反应，其原理是将直链麦芽低聚糖上非还原端的O4或C4上的糖苷转移到同一直链还原端的C1或O1上。环化反应的逆反应就是偶合反应，它可以打开环糊精的环，将糖苷转移到直链麦芽低聚物上。CGTase同时具备催化环化反应和耦合反应的活性，是导致其在催化淀粉发生反应的过程中，随着时间延长，产物逐渐由α-环糊精向β-环糊精转变的原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种环糊精葡萄糖基转移酶的突变体，其特征在于，将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第168位的苏氨酸突变为丙氨酸，命名为T168A。/n

【技术特征摘要】
1.一种环糊精葡萄糖基转移酶的突变体，其特征在于，将氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第168位的苏氨酸突变为丙氨酸，命名为T168A。


2.表达权利要求1所述突变体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)根据确定的突变位点，设计定点突变的突变引物，以携带环糊精葡萄糖基转移酶基因的载体为模板进行定点突变；构建含编码突变体的基因的质粒载体；
(2)将突变体质粒转化进宿主细胞；
(3)挑选阳性克隆进行发酵培养，离心上清即为环糊精葡萄糖基转移酶突变体的粗酶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬，宿玲恰，杜立，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32