一株能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株制造技术

本发明专利技术公开了一株能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株。本发明专利技术提供了一株能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，将枯草芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶的基因AprE、中性蛋白酶的基因NprE以及sigF基因进行敲除，构建宿主菌株；将MTG酶原基因的表达框整合到宿主菌株中，得到能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株。利用本发明专利技术构建的工程菌株进行MTG发酵，MTG酶原在发酵过程中被宿主细胞的内源胞外蛋白酶激活，从而无需整合其他的外源蛋白酶进行后续的激活过程，可以在发酵上清中直接回收具有活性的MTG，简化提取工艺；且具有发酵时间短，过程中不需要添加抗生素等优点，极具有工业化价值。

【技术实现步骤摘要】
一株能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株及其在生产谷氨酰胺转氨酶中的应用。
技术介绍
谷氨酰胺转胺酶(Transglutaminase,EC2.3.2.13,TGase)，是一类具有酰胺基转移催化功能的蛋白，能够催化肽链内谷氨酰胺残基转化为γ-羧基酰胺基的酰基转移反应，特别是与赖氨酸残基的ε-酰基在蛋白质分子内、及分子间形成ε-(γ-Gln)-Lys交联键。TGase特殊的催化功能，使其在众多领域得到广泛应用，尤其在食品加工领域，TGase作为安全的食品交联剂，被应用于面制品、焙烤制品、肉制品及豆类品等行业。此外，TGase酶在纺织与皮革加工、组织工程、定点蛋白交联等方面具有较广泛的应用范围，因此引起人们的高度重视。与其它来源TGase相比，细菌来源的TGase(MTG)催化活性不依赖于钙离子，且作用底物广泛，是商品化TGase的最佳选择。日本AmanoEnzyme公司于1989年首次在茂原链轮丝菌(StreptoverticilliummobaraenseS-8112)中发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，将枯草芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶的基因AprE、中性蛋白酶的基因NprE以及sigF基因进行敲除，构建宿主菌株；然后将MTG酶原基因的表达框整合到宿主菌株中，得到能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株。/n

【技术特征摘要】
1.一株能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，将枯草芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶的基因AprE、中性蛋白酶的基因NprE以及sigF基因进行敲除，构建宿主菌株；然后将MTG酶原基因的表达框整合到宿主菌株中，得到能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株。


2.根据权利要求1所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述MTG酶原基因的表达框整合到所述宿主菌株的amyE位点。


3.根据权利要求1或2所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述MTG酶原基因的表达框包括启动子序列，核糖体结合位点序列，信号肽序列，proMTG编码序列以及终止子序列。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述MTG酶原基因的表达框是通过构建MTG酶原的整合质粒整合到所述宿主菌株中。


5.根据权利要求4所述的能够生产谷氨酰胺转氨酶的菌株，其特征在于，所述MTG酶原整合质粒的构建方法为：将枯草芽孢杆菌基因组中的amyE部分基因片段及其两侧序列整合到质粒pksB上，构建质粒pksB-amyFR；将MTG酶原基因的表达框插入质粒pksB-amyFR中，得到MTG酶原的整合质粒。


6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹国强，白挨玺，严婷，孙艳，徐红，
申请(专利权)人：南京百斯杰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32