【技术实现步骤摘要】
一种诱导型滋养层干细胞及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物医学
，具体而言，涉及一种诱导型滋养层干细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
滋养层干细胞CT是一类具有自我更新能力，并能分化为各种类型滋养层细胞(合体滋养层细胞，绒毛外细胞滋养层细胞等)的特殊细胞。1998年首次成功分离了鼠的原代滋养层干细胞，2015年发现可将鼠的纤维细胞诱导为滋养层干细胞，而人原代滋养层干细胞于2018年首次从囊胚和早孕期胎盘中分离获得。跟当前采用的各种研究滋养层细胞发育的细胞模型相比，人滋养层干细胞具有以下优势：1)永生化滋养层细胞株如HTR8和JEG-3等，为变异的滋养层细胞株或者癌性滋养层细胞，不能真实反映人滋养层细胞的正常发育途径和导致疾病的原因，而人滋养层干细胞向各亚型滋养层细胞分化跟体内自然发育过程一致；2)鼠等动物模型、其滋养层干细胞和诱导型滋养层干细胞跟人滋养层干细胞存在着种属差异，如着床前后细胞状态不同，分化后得到的亚型滋养层细胞形态、基因表达谱及功能也有明显差异，人滋养层细胞发育障碍导致的疾病如子...
【技术保护点】
1.一种诱导型滋养层干细胞的制备方法，其特征在于，其包括采用细胞培养基将人多能干细胞培养为具有无限增殖和分化成亚型滋养层细胞的诱导型滋养层干细胞；/n所述人多能干细胞包括人胚胎干细胞和/或诱导多能干细胞；/n所述细胞培养基包括基础培养液，且所述细胞培养基中至少还含有以下组分：0.5～2.5μg/mL维生素C、20～70ng/mL表皮生长因子、1～5μM WNT通路激活剂、0.3～1.9μM TGF-β通路抑制剂、3～7μM ROCK通路抑制剂以及0.6～1.1mM组蛋白去乙酰化酶抑制剂。/n
【技术特征摘要】
1.一种诱导型滋养层干细胞的制备方法，其特征在于，其包括采用细胞培养基将人多能干细胞培养为具有无限增殖和分化成亚型滋养层细胞的诱导型滋养层干细胞；
所述人多能干细胞包括人胚胎干细胞和/或诱导多能干细胞；
所述细胞培养基包括基础培养液，且所述细胞培养基中至少还含有以下组分：0.5～2.5μg/mL维生素C、20～70ng/mL表皮生长因子、1～5μMWNT通路激活剂、0.3～1.9μMTGF-β通路抑制剂、3～7μMROCK通路抑制剂以及0.6～1.1mM组蛋白去乙酰化酶抑制剂。
2.根据权利要求1所述的诱导型滋养层干细胞的制备方法，其特征在于，所述细胞培养基中还包括以下一种或多种组分：0.5～1.5％胰岛素样转铁蛋白添加剂、0.05～0.15mMβ-巯基乙醇和0.1％～0.5％BSA；
优选地，所述细胞培养基还包括0.1～0.7％青链霉素混合液和/或0.1～0.4％FBS；
优选地，所述WNT通路的激活剂为CHIR99021；
优选地，所述ROCK通路抑制剂为Y-27632；
优选地，所述TGF-β通路抑制剂包括A83-01和/或SB431542；
优选地，所述TGF-β通路抑制剂包括A83-01和SB431542，在所述细胞培养基中，A83-01的终浓度为0.3～0.7μM，SB431542的终浓度为0.8～1.2μM；
优选地，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂为丙戊酸钠；
优选地，所述基础培养液选自以下培养基中的至少一种：DMEM/F12、RPMI1640和HamsF-12。
3.根据权利要求2所述的诱导型滋养层干细胞的制备方法，其特征在于，所述亚型滋养层细胞包括绒毛外细胞滋养层细胞和/或合体滋养层细胞；
优选地，所述人胚胎干细胞包括H1hESC和/或HN10hESC；
优选地，所述诱导多能干细胞选自以下细胞中的至少一种：尿液细胞来源的iPS细胞UE005-iPS、绒毛外间充质细胞来源的iPS细胞hAMC-iPS、hAMC002-iPS以及hAMC004-iPS。
4.根据权利要求1～3任一项所述的诱导型滋养层干细胞的制备方法，其特征在于，采用细胞培养基培养时，人胚胎干细胞和/或诱导多能干细胞的接种密度为(1～9)×105个cell/mL；
优选地，所述制备方法包括将制备得到的诱导型滋养层干细胞进行传代培养；
优选地，所述传代培养的细胞融合度为90～100％；
优选地，当细胞融合度达到90～100％时，所述传代培养包括采用消化酶与细胞共孵育，以获得细胞溶液，所述消化酶为0.3～0.7mMEDTA；
优选地，所述传代培养的比例为1：(2～4)；
优选地，所述传代培养的培养基为所述细胞培养基；
优选...
【专利技术属性】
技术研发人员：卫焱星，余艳红，单永礼，马丽诗，肖露，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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