绵羊组织中呈游离态的多潜能干细胞的分离培养方法及培养液技术

本发明专利技术提供了绵羊组织中呈游离态的多潜能干细胞的分离培养方法及培养液，属于细胞培养技术领域。培养液是以DMEM为基础培养液，还包括L‑谷氨酰胺、非必需氨基酸、丙酮酸钠、β‑巯基乙醇和LIF、bFGF和FBS。分离培养方法，将绵羊胚层组织块清洗后置于培养液中，对所述组织块针刺，挤压后收集培养液、离心，收集上清液再次离心，收集沉淀，重悬细胞，培养。分离的多潜能干细胞能稳定表达与多潜能干细胞特性相关标志基因，同时不表达或弱表达Cx40和Cx43。该方法的建立无论对干细胞的进一步深入研究还是对器官组织发育、疫病机理研究及其防控都具有重要的意义。

Isolation and culture of free multipotential stem cells in sheep tissues

【技术实现步骤摘要】
绵羊组织中呈游离态的多潜能干细胞的分离培养方法及培养液
本专利技术属于细胞培养
，具体涉及绵羊组织中呈游离态的多潜能干细胞的分离培养方法及培养液。
技术介绍
干细胞是生命科学研究领域的炙热点，人们之所以对干细胞在发育、种质资源保护和疫病防控以及药物筛选都给予期望，是因为干细胞的生物学特性决定的。干细胞具有克隆性，自我更新性同时又是一种未成熟的可分化为多种细胞谱系的细胞。利用干细胞，可以给人类健康所面临的一系列重大挑战，如艾滋病、乙肝以及肿瘤防控等带来现实希望。在畜牧兽医领域，干细胞具有更加广阔的前景和经济价值，如在遗传育种以及在种质资源多样性中作为种子细胞，在动物疫病模型和药物筛选中作为理想的靶细胞。干细胞尤其是胚胎干细胞的来源一直是干细胞深入和系统研究的巨大障碍，ShinyaYamanaka等人创立了iPS细胞极大的拓展了干细胞的合理获得途径，因此荣获了2012年度诺贝生理医学奖。遗憾的是，科研人员均把注意力集中在干细胞的获得以及相关应用，对干细胞在机体组织中存在的状态鲜有研究和关注。专利技术内容有鉴于此本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于分离绵羊组织中呈游离态的多潜能干细胞的培养液，其特征在于，以DMEM为基础培养液，还包括以下含量的组分：体积百分含量1％～5％L-谷氨酰胺、体积百分含量1％～5％非必需氨基酸、体积百分含量1％～5％丙酮酸钠、体积百分含量0.01％～0.05％β-巯基乙醇和500～1000μg/mL白血病抑制因子、5～10ng/mL碱性成纤维因子和体积百分含量10％～18％胎牛血清。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于分离绵羊组织中呈游离态的多潜能干细胞的培养液，其特征在于，以DMEM为基础培养液，还包括以下含量的组分：体积百分含量1％～5％L-谷氨酰胺、体积百分含量1％～5％非必需氨基酸、体积百分含量1％～5％丙酮酸钠、体积百分含量0.01％～0.05％β-巯基乙醇和500～1000μg/mL白血病抑制因子、5～10ng/mL碱性成纤维因子和体积百分含量10％～18％胎牛血清。


2.根据权利要求1所述的培养液，其特征在于，还包括以下含量的组分：体积百分含量1％L-谷氨酰胺、体积百分含量1％非必需氨基酸、体积百分含量1％丙酮酸钠、体积百分含量0.01％β-巯基乙醇和600μg/mL白血病抑制因子、5ng/mL碱性成纤维因子和体积百分含量15％胎牛血清。


3.一种绵羊组织中呈游离态的多潜能干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)切割绵羊胚层组织至组织块；
2)将所述组织块清洗后置于权利要求1或2所述培养液中，对所述组织块针刺，挤压后收集培养液；
3)将步骤2)中收集的培养液离心，收集上清液；
4)将所述上清液再次离心，收集沉淀，用权利要求1或2所述培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：王凤武，金海，李晓奇，张琼琳，耿万恒，云伏雨，
申请(专利权)人：内蒙古自治区农牧业科学院，
类型：发明
国别省市：内蒙;15