TRPV2拮抗剂制造技术

本发明专利技术涉及如下发现，即荜茇酰胺化合物如荜茇酰胺及其类似物、衍生物和前药是瞬时受体电位香草素2通道(TRPV2)的可逆的别构拮抗剂。提供了使用荜茇酰胺化合物治疗特征为TRPV2表达的病况的方法以及用于此类治疗的荜茇酰胺化合物。

TRPV2 antagonists

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TRPV2拮抗剂领域本专利技术涉及使用荜茇酰胺化合物抑制瞬时受体电位香草素2通道(TRPV2)。这可用于例如癌症的治疗。背景天然产物(NP)，尤其是其片段样子集，为药物发现和用于研究生物系统的探针提供了极好的起点1-4。考虑到合成途径的挑战性，它们的生物预验证的架构通常包含未被完全合成的化学物质覆盖或仅被完全合成的化学物质少量利用的支架5。此外，NP靶标受体的事实知识仍然有限，并严重阻碍了以天然产物为灵感的分子设计在化学生物学和分子医学中的合理方法的运用6。以配体为中心的信息学提供了将表型测定读数去卷积到大分子水平的可行平台。特别地，使用“模糊”药效团描述符的工具已被证明可用于NP空间中的脱孤(orphanization)和靶标鉴定7-10。(-)-EnglerinA-一种有效的抗癌剂11和TRP调节剂12-14，最近已被报道是一种Cav1.2拮抗剂15。自从荜茇酰胺作为一种选择性抗癌剂被披露以来，人们已经做出了巨大的努力来发现哪些大分子靶标可以被荜茇酰胺接合16,17。最近，这些研究以显示直接抑制STAT3的报道告终18。然而，已显示片段样NP可以接合多个靶标，从而形成复杂的多重药理学网络2,9。概述本申请的专利技术人已发现片段样抗癌生物碱荜茇酰胺(1，图1A)是瞬时受体电位香草素2通道(TRPV2)的选择性的别构拮抗剂，并且荜茇酰胺的抗癌活性与癌细胞中TRPV2的表达相关。本专利技术的一个方面提供了治疗特征为瞬时受体电位香草素2通道(TRPV2)表达的癌症的方法，其包括向有需要的患者施用荜茇酰胺化合物。优选的荜茇酰胺化合物包括荜茇酰胺及其类似物、衍生物和前药。荜茇酰胺化合物可以具有以下式1及其盐、溶剂化物和保护的形式：其中Q1是O或S，-Ar是任选取代的芳基，-D-选自-C(O)-、-C(S)-、-CH(OH)-和-CH(SH)-，并且-R1和-R2连同它们所连接的-N-D-一起形成任选取代的杂环，或者-R1和-R2各自独立地选自氢和任选取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基和芳基。本专利技术的另一方面提供了荜茇酰胺化合物，其用于治疗特征为瞬时受体电位香草素2通道(TRPV2)表达的癌症的方法中。本专利技术的另一方面提供了荜茇酰胺化合物在制备用于治疗特征为瞬时受体电位香草素2通道(TRPV2)表达的癌症的方法的药物中的用途。本专利技术的方面和实施方案在下文中有更详细的描述。附图简述图1A显示了荜茇酰胺，1和(-)-englerinA，2的结构，以及相互的靶标接合(engagement)关系。图1B是荜茇酰胺对癌细胞的效果的图示。图2显示了荜茇酰胺，1调节TRPV2。a)使用基于荧光的测定的1对TRPV2的浓度-反应曲线。IC50＝4.6±0.13log单位，n＝2；对照：曲尼司特，IC50＝2.3±0.25log单位，n＝2。b)HepG2细胞(0.5％DMSO)中1(5μM)抑制大麻二酚(CBD,20μM)引起的钙流入。为了定量，分析了每个孔中(n＝35-45个细胞)五个最强的应答细胞，并归一化为基线。示出了五个最强的应答细胞的平均值。**单因素方差分析和TukeyHSD事后检验：刺激后120s，对照与1之间(p<0.01)以及对照与曲尼司特(p<0.01)之间的显著差异。1和曲尼司特之间没有显著差异。c)HepG2细胞(0.5％DMSO)中1(5μM)抑制CBD(4μM)引起的钙流入。在所有样品之间均未观察到统计学上显著的差异。d)HEK293细胞(0.5％DMSO)中1(5μM)抑制CBD(4μM)引起的钙流入。阴性对照：用CBD(4μM)刺激的未转染的HEK293。为了定量，分析了十个最强应答者/孔，并归一化为基线(转染细胞：n＝70-80，未转染细胞：n＝20)。示出了十个最强应答细胞的平均值。**单因素方差分析和TukeyHSD事后检验：刺激后300s，对照和1之间(p<0.001)、对照和未转染的HEK293细胞之间(p<0.001)以及未转染的HEK293细胞和1之间(p<0.001)的显著差异。e)用人TRPV2-RFP融合蛋白转染的HEK293的钙成像，校正基线水平。f)4μMCBD刺激5分钟后的钙水平(颜色代码-蓝色＝低钙水平；绿色＝中等；黄色＝中高；红色＝高)。未转染的细胞用点标记。显示伪像(例如钙振荡)的细胞用箭头标记。没有未转染的细胞显示出强的钙流入。g)用方形标记的十个最强应答细胞以中等水平表达TRPV2-RFP。h)人工增强的RFP信号：所有十个选定的细胞均表达TRPV2-RFP。i)使用膜片钳测定的1对TRPV2的浓度-反应曲线。IC50＝1μM±0.52log单位，n＝2，刺激物：4μMCBD。j)使用膜片钳测定的1对TRPV2的浓度-反应曲线。IC50>100μM，n＝2，刺激物：10μMCBD。图3显示了荜茇酰胺，1是一种选择性的人TRPV2别构拮抗剂。a)示例性的膜片钳时程轨迹，显示了1(100μM)对大麻二酚(CBD)活化的(4μM)人TRPV2电流的抑制作用。完成了清洗出1，并可以恢复全部的TRPV2活性；n＝2。b)药物洗出实验的归一化反应。c)在递增浓度的1的情况下，CBD的EC50图。d)1的Michaelis-Menten分析。e)1的Schild图。图4显示了NCI-60筛选和生物信息学分析。a)通过组织来源分组的NCI-60癌细胞系中荜茇酰胺，1，GI50值(-z分数)的分布。水平虚线表示图平均值。b)通过组织来源分组的NCI-60癌细胞系中1的IC50值(-z分数)的分布。水平虚线表示图平均值。c)NCI-60图中TRPV2mRNA转录水平(log强度)作为1的GI50(-z分数)的函数。表达TRPV2的细胞系对1更为敏感(斯皮尔曼相关系数(Spearmancorrelationcoefficient)(ρ)＝0.28，p<0.05)。d)NCI-60图中TRPV2mRNA转录水平(log强度)作为1的IC50(-z分数)的函数。表达TRPV2的细胞系对1更为敏感(ρ＝0.29，p<0.05)。e)与1的活性相关的基因的基因集富集分析(GSEA)。对根据斯皮尔曼相关系数排序的基因运行GSEA分析。错误发现率低于5％，41个基因集被认为是显著的。显示了与1的活性正(深灰色)和负(浅灰色)相关的前10个基因集。图5显示了利用HepG2细胞的伤口愈合测定。a)浓度为5μM的荜茇酰胺，1，以Ca2+依赖性方式抑制癌细胞迁移。C–0.5％DMSO对照；Tr-曲尼司特(10μM)。****p<0.0001；**p<0.01，未配对的双尾t检验。C：n＝5-7；1：n＝13-17；Tr：n＝4-6。DMSO对照之间没有发现显著性差异。b)划痕的示例性图像(40x)。c)显示组成型TRPV2表达的HepG2细胞的荧光辅助细胞分选数据。红色：未染色对照(平均荧光强度，MFI＝5)，蓝色：仅二抗(MFI＝62)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.治疗特征为瞬时受体电位香草素2通道(TRPV2)表达的癌症的方法，其包括：/n向有需要的患者施用荜茇酰胺化合物。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170918 GB 1715008.71.治疗特征为瞬时受体电位香草素2通道(TRPV2)表达的癌症的方法，其包括：
向有需要的患者施用荜茇酰胺化合物。


2.如权利要求1所述的方法，其中所述荜茇酰胺化合物是TRPV2的可逆拮抗剂。


3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述荜茇酰胺化合物是荜茇酰胺或其类似物、衍生物或前药。


4.如权利要求3所述的方法，其中所述荜茇酰胺化合物具有以下式1及其盐、溶剂化物和保护的形式：



其中Q1是O或S，
Ar是任选取代的芳基，
-D-选自-C(O)-、-C(S)-、-CH(OH)-和-CH(SH)-，并且
-R1和-R2连同它们所连接的-N-D-一起形成任选取代的杂环，或者-R1和-R2各自独立地选自氢和任选取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基和芳基。


5.如权利要求4所述的方法，其中Q1是O。


6.如权利要求3或权利要求5所述的方法，其中-D-是-C(O)-或-C(S)-，如-C(O)-。


7.如权利要求4-6中任一项所述的方法，其中-R1和-R2连同它们所连接的-N-D-一起形成任选取代的杂环，如杂环。


8.如权利要求7所述的方法，其中所述杂环是部分不饱和的。


9.如权利要求8所述的方法，其中-D-是-C(O)-或-C(S)-，并且所述不饱和部分与-C(O)-或-C(S)-缀合。


10.如权利要求7-9中任一项所述的方法，其中所述杂环是单环，如4-9元环，如4-6元环，如5元环或6元环，如6元环。


11.如权利要求7-10中任一项所述的方法，其中-R1和-R2连同它们所连接的-N-D-一起形成α,β-不饱和的δ-内酰胺，如其中-R1和-R2连同它们所连接的-N-D-一起形成5,6-二氢吡啶-2-酮-1-基。


12.如权利要求4-11中任一项所述的方法，其中Ar-是任选取代的碳芳基，如苯基，或者任选取代的杂芳基，如吡啶基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基和吡咯基。


13.如权利要求12所述的方法，其中Ar-是任选取代的苯基。


14.如权利要求4-13中任一项所述的方法，其中Ar-是任选地被一个或多个基团，如一个、两个或三个基团取代的芳基，所述基团选自：卤素、氰基、-RS1、-OH、-ORS1、-SH、-SRS1、-NH2、-NHRS1、-NRS1RS2、-COOH、-CONH2、-CONHRS1、-CONRS1RS2、-NHCORS1、-N(RS1)CORS1，其中每个-RS1和每个-RS2独立地是任选地被卤素取代的烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基，或者-RS1和-RS2可以一起形成杂环。


15.如权利要求14所述的方法，其中Ar-是任选地被一个或多个基团，如一个、两个或三个基团取代的芳基，所述基团选自：-OH、-ORS1、-SH和-SRS1，如-SRS1和-ORS1，如-ORS1。


16.如权利要求4-15中任一项所述的方法，其中Ar-是三烷氧基苯基，如三甲氧基苯基。


17.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：冈卡洛·伯纳德，蒂亚戈·罗德里格斯，若昂·康德，夏洛特·贝克，
申请(专利权)人：乔奥洛博安图内斯分子医学研究院，
类型：发明
国别省市：葡萄牙;PT