一种自然杀伤细胞体外培养方法技术

本发明专利技术涉及生物制药技术领域，具体涉及一种自然杀伤细胞体外培养方法，该方法将整个培养过程分为诱导培养和增殖培养两个阶段，诱导培养采用透明质酸和CD16抗体对培养瓶预包被，培养过程中加入维生素E和槲皮素；增殖培养采用芝麻素和RetroNectin对培养瓶预包被，培养过程中加入谷胱甘肽和卟啉‑α；培养瓶的包被成分、添加的助剂成分与各阶段培养基中的有效成分相互配合作用，协同增效促进NK细胞的活化和增殖，在提高NK细胞的扩增效率的同时，提高NK细胞的活性。

A culture method of natural killer cells in vitro

【技术实现步骤摘要】
一种自然杀伤细胞体外培养方法
本专利技术涉及生物制药
，具体涉及一种自然杀伤细胞体外培养方法。
技术介绍
人体免疫系统是由一个复杂的机制调节的，当免疫系统发生异常时，可能会引起免疫系统的失衡，并可能发生癌症等各种难治疗的疾病。因此，免疫细胞疗法的发展成为人们关注的焦点，它是一种通过缓解免疫系统失衡并恢复正常状态来治疗免疫相关疾病的方法。自然杀伤细胞（NK）是人体免疫细胞的一种，来源于骨髓淋巴细胞。在人体中，NK细胞主要分布在外周血和脾脏中，大致占外周血淋巴细胞的5%~15%；同时，也少量存在于淋巴结等其他组织中。NK细胞相对于其他类型的淋巴细胞，具有其自身的独特性质。其最重要的特性是NK细胞不表达特异性抗原识别受体。因此，NK细胞在杀伤靶细胞的过程中，不需要通过特异性的机制识别靶细胞，是人体快速抵抗外源物质入侵的第一道防线，可以广谱地杀灭各种病原物。同时，NK细胞的杀伤作用不受主要组织相容性复合体的限制，可以对多种肿瘤细胞迅速杀伤和溶解。近年来有大量的临床研究表明NK细胞在抵抗肿瘤和病毒感染方面具有非常重要的作用。由于在外本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种自然杀伤细胞体外培养方法，其特征在于，包括以下操作步骤：/n1)制备单个核细胞悬浮液：/n将分离获得外周血单个核细胞重悬于诱导培养基中，得到单个核细胞悬浮液；/n2)诱导培养：/n在培养瓶中加入透明质酸和CD16抗体对培养瓶进行包被，作为诱导培养用培养瓶；将步骤1)的单个核细胞悬浮液接种至诱导培养用培养瓶中，培养24小时，培养过程中及时补充诱导培养基，并且每间隔6小时，向培养瓶中加入维生素E和槲皮素，获得诱导培养悬浮液；/n3)增殖培养：/n在新的培养瓶中加入芝麻素和RetroNectin对培养瓶进行包被，作为增殖培养用培养瓶；将步骤2)获得的诱导培养悬浮液接种至增殖培养用培养瓶中，在...

【技术特征摘要】
1.一种自然杀伤细胞体外培养方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
1)制备单个核细胞悬浮液：
将分离获得外周血单个核细胞重悬于诱导培养基中，得到单个核细胞悬浮液；
2)诱导培养：
在培养瓶中加入透明质酸和CD16抗体对培养瓶进行包被，作为诱导培养用培养瓶；将步骤1)的单个核细胞悬浮液接种至诱导培养用培养瓶中，培养24小时，培养过程中及时补充诱导培养基，并且每间隔6小时，向培养瓶中加入维生素E和槲皮素，获得诱导培养悬浮液；
3)增殖培养：
在新的培养瓶中加入芝麻素和RetroNectin对培养瓶进行包被，作为增殖培养用培养瓶；将步骤2)获得的诱导培养悬浮液接种至增殖培养用培养瓶中，在增殖培养基环境下培养14天，培养过程中及时补充增殖培养基，并且每间隔2～3天，向培养瓶中加入谷胱甘肽和卟啉-α，即完成；
其中诱导培养基的组成包括基础培养基、IL-2、IL-5、自体血清、氨基酸；增殖培养基的组成包括基础培养基、IL-15、GM-CSF、自体血清、氨基酸。


2.如权利要求1所述的自然杀伤细胞体外培养方法，其特征在于，步骤2)中在培养瓶中加入透明质酸和CD16抗体对培养瓶进行包被的具体方法包括取生理盐水，加入透明质酸和CD16抗体，配置成含有3～6mg/ml透明质酸和5～8μg/mlCD16抗体的包被液，在培养瓶中加入5～10ml的PBS、1～2ml的包被液，4℃过夜后，弃去包被液，用PBS洗涤，即完成。


3.如权利要求1所述的自然杀伤细胞体外培养方法，其特征在于，步骤3)中在培养基中加入芝麻素和RetroNectin对培养瓶进行包被的具...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小奇，张晓盈，黄睿龙，苏琳琳，孙向东，
申请(专利权)人：河南侨创生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41