一种多细胞因子诱导的高纯度NK细胞培养方法技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体地说是一种多细胞因子诱导的高纯度NK细胞培养方法。一种多细胞因子诱导的高纯度NK细胞培养方法，包括如下步骤：(1)获取PBMC；(2)洗涤PBMC；(3)调整PBMC细胞浓度；(4)培养瓶处理；(5)第一次增殖培养；(6)第二次增殖培养；(7)第三次增殖培养；(8)第四次增殖培养；(9)第五次增殖培养。本发明专利技术通过筛选多种细胞因子对NK细胞共同诱导培养，从流式检测结果可以看出CD3+CD56+含量比第0天提高了86.2％，NK细胞数量增加了150倍。

A high purity NK cell culture method induced by multicellular factors

【技术实现步骤摘要】
一种多细胞因子诱导的高纯度NK细胞培养方法
本专利技术属于细胞培养
，具体地说是一种多细胞因子诱导的高纯度NK细胞培养方法。
技术介绍
NK细胞，即自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)是机体对抗病原体侵袭和正常细胞恶变的一种重要的天然免疫细胞，无需预先接触肿瘤特异性抗原即可杀伤肿瘤细胞，对肿瘤的增殖和转移扩散均具有“抑制”作用。NK细胞能够清除术后微小残留病灶，降低复发，因而被认为是肿瘤免疫治疗的重要免疫细胞。NK细胞具有广谱的肿瘤杀伤效果，伤机制包括：FasL与Fas相互作用、穿孔素/颗粒酶作用、借助表面CD16与肿瘤特异性IgG发生的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)、肿瘤凋亡相关因子(TNF-α、IFN-β)的分泌作用。NK细胞除对靶细胞具有溶解杀伤作用外，NK细胞还在机体免疫反应中具有重要功能。NK细胞可通过对粒细胞、树突状细胞的调节作用而控制天然免疫力。NK细胞可以作用于CD4+T细胞和CD8+T细胞以强化获得性免疫。有研究表明肿瘤患者外周血NK细胞的活性与其痊愈后存在着密切关系，然而本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多细胞因子诱导的高纯度NK细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：/n（1）获取PBMC：取肿瘤患者外周血50-60mL，利用淋巴细胞分离密度梯度离心法分离出PBMC；/n（2）洗涤PBMC：将步骤（1）所得PBMC细胞用基础培养基洗涤一次；/n（3）调整PBMC细胞浓度：用所述基础细胞培养基对步骤（2）所得的PBMC的细胞浓度进行调整；/n（4）培养瓶处理：将T175细胞培养瓶用包被液包被处理1-2h后，倒出包被液并用生理盐水润洗一遍；/n（5）第一次增殖培养：将步骤（3）所得PBMC置于步骤（4）所得T175细胞培养瓶中，并利用第一次增殖培养基增殖培养至第3d；/n（6）第二次增殖...

【技术特征摘要】
1.一种多细胞因子诱导的高纯度NK细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）获取PBMC：取肿瘤患者外周血50-60mL，利用淋巴细胞分离密度梯度离心法分离出PBMC；
（2）洗涤PBMC：将步骤（1）所得PBMC细胞用基础培养基洗涤一次；
（3）调整PBMC细胞浓度：用所述基础细胞培养基对步骤（2）所得的PBMC的细胞浓度进行调整；
（4）培养瓶处理：将T175细胞培养瓶用包被液包被处理1-2h后，倒出包被液并用生理盐水润洗一遍；
（5）第一次增殖培养：将步骤（3）所得PBMC置于步骤（4）所得T175细胞培养瓶中，并利用第一次增殖培养基增殖培养至第3d；
（6）第二次增殖培养：补加第0d一倍体积的第二次增殖培养基增殖培养至第5d；
（7）第三次增殖培养：补加第3d一倍体积的第三次增殖培养基增殖培养至第7d；
（8）第四次增殖培养：将经过步骤（7）增殖培养后的细胞转入培养袋中，补加第四次增殖培养基至500mL继续增殖培养；
（9）第五次增殖培养：每隔2-3d补加300-500mL的第五次增殖培养基300-500mL，第17-20d收获细胞。


2.根据权利要求1所述多细胞因子诱导的高纯度NK细胞培养方法，其特征在于，步骤（3）中所得PBMC细胞浓度为1-2×106个/mL。


3.根据权利要求1所述多细胞因子诱导的高纯度NK细胞培养方法，其特征在于，步骤（4）中包被液为0.01-5.0m...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫毅，梁红，吴曼惠，
申请(专利权)人：南宁摩米生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广西;45